康艳红
- 作品数：17 被引量：29H指数：3
- 供职机构：河南省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBx、MHBs^(t155)真核表达载体构建及在HepG2细胞中的表达被引量：3
- 2012年
- 目的建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理。方法设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、KpnⅠ和BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平。结果经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆。将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光。RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带。结论成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台。
- 康艳红杨林麦丽张绍全胡朝霞谢奇峰高志良
- 关键词：HBXGFP细胞株
- HBV X蛋白转录激活细胞DNA甲基转移酶启动子进而上调其表达
- [目的]证实HBV X蛋白(HBx)对细胞DNA甲基转移酶(DNMT)基因转录表达的影响以明了HBx调控细胞DNA甲基化的机制.[方法]以人肝母细胞瘤细胞HepG2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的GFP/HepG2、稳定表...
- 康艳红杨林
- 关键词：HBX
- 乙型肝炎病毒X蛋白通过活化ERK1/2上调DNA甲基转移酶1表达
- 2016年
- 目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶1表达的影响及调控机制。方法以Hep G2、Hep G2/EGFP及Hep G2/EGFP-HBx细胞作为实验细胞,采用Real-time PCR法及Western blot法检测细胞DNMT1的m RNA及蛋白表达水平。用不同剂量的MEK1/2特异性抑制剂U0126处理Hep G2/EGFP-HBx细胞,采用Western blot法检测总ERK1/2、磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平。结果 Hep G2/EGFP-HBx细胞的DNMT1 m RNA相对表达量平均值为9.464±0.22,明显高于Hep G2细胞(1.00±0.0)(t=60.64,P=0.0002)及Hep G2/EGFP细胞(0.95±0.29),差异有统计学意义(t=32.78,P=0.0011)。与Hep G2、Hep G2/EGFP细胞相比,Hep G2/EGFP-HBx细胞磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平有明显升高;而MEK1/2特异性抑制剂U0126处理细胞后,磷酸化ERK1/2磷酸化水平及DNMT1蛋白表达水平明显降低。结论 HBx可通过活化ERK1/2信号通路上调DNMT1的表达,这可能是HBx调控细胞基因甲基化及参与HBV相关肝细胞癌发生的机制之一。
- 吴英杰杨林朱建芸康艳红胡朝霞高志良
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白DNA甲基转移酶1ERK1/2信号通路
- 感染性疾病中细菌感染血清标志物的临床分析
- 2016年
- 目的探讨感染性疾病中细菌感染血清标志物的临床意义。方法 74例感染性疾病患者作为研究对象,根据是否为细菌感染分为细菌性感染组与非细菌性感染组,各37例;对比两组患者血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)及内毒素(LSP)表达水平的差异;细菌性感染组患者采取抗生素治疗后,对比细菌性感染组患者治疗前后的血清PCT、CRP、WBC及LSP表达水平的差异,综合评价血清标志物对细菌感染的临床诊断意义。结果细菌性感染组患者的血清PCT、CRP及LSP表达水平均显著高于非细菌性感染组,差异有统计学意义(P<0.05);细菌性感染组患者经抗生素治疗后,血清PCT、CRP及LSP表达水平较治疗前水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);血清PCT对细菌感染诊断的灵敏度及特异度均显著大于血清CRP、LSP,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清PCT可作为细菌感染的血清标志物,其诊断细菌感染的灵敏度及特异度均符合临床需求,而细菌感染的疗效和预后与血清PCT、CRP及LSP表达水平密切相关,为感染性疾病合理使用抗生素提供临床依据。
- 占伟丽康艳红
- 关键词：感染性疾病细菌感染血清标志物
- HBx蛋白对DNA甲基转移酶1的调控机制研究
- 目的：探讨乙型肝炎病毒X基因编码的HBx蛋白对DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的影响及所可能涉及的调控机制。方法：在已构建的人肝癌细胞HepG2/EGFP及HepG2/EGFP-HBx细胞模型基础上，通过Realti...
- 吴英杰康艳红杨林
- 关键词：HBXDNA甲基转移酶1ERK1/2
- 肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者腹水白细胞介素-7的表达水平和临床意义被引量：13
- 2019年
- 目的观察肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者腹水中白细胞介素-7(IL-7)的表达水平,并检测重组人IL-7对腹水中CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞功能的影响。方法选择2017年8月至2018年4月住院治疗的肝硬化患者84例,其中肝硬化合并单纯腹水患者51例,肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者33例,常规采集外周血和收集腹水,应用酶联免疫吸附法检测外周血和腹水中IL-7的水平。分选腹水中CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞,使用重组人IL-7刺激培养,检测CD4^+T淋巴细胞增殖、关键转录因子mRNA以及分泌细胞因子的变化,检测CD8^+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA和分泌细胞因子的变化,利用直接接触和间接接触共培养系统检测CD8^+T淋巴细胞的细胞杀伤和非细胞杀伤功能的变化。符合正态分布的计量资料使用Studentt检验进行两组数据间比较,使用配对t检验进行刺激前后数据比较。不符合正态分布的计量资料使用Mann-Whitney检验进行两组间数据比较,使用Wilcoxon配对检验进行刺激前后数据比较。结果肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎组和肝硬化合并单纯腹水组患者血清IL-7水平的差异无统计学意义[(5001±1458)pg/ml比(4768±1128)pg/ml,P=0.412),而肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者腹水中IL-7的水平较肝硬化合并单纯腹水患者显著降低[(792.1±126.4)pg/ml比(966.4±155.8)pg/ml,P<0.01]。重组人IL-7刺激可促进肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者腹水中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的增殖,增加CD4+T淋巴细胞中转录因子T-betmRNA的相对表达量和干扰素-γ的分泌,亦可增加CD8+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA的相对表达量以及CD8^+T淋巴细胞分泌干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α的水平。重组IL-7刺激可增加肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎患者腹水中CD8^+T淋巴细胞的细胞杀伤功能和非细胞杀伤功能,
- 侯环荣潘寒寒李玉魁魏君锋康艳红毛重山尚佳康谊
- 关键词：肝硬化腹膜炎腹水白细胞介素-7T淋巴细胞
- HBV X siRNA与5-氮-2’-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究被引量：1
- 2012年
- 目的目的探讨靶向HBVX的siRNA（X-siRNA）和5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-dC）对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制。方法设计合成X-siRNA及对照siRNA，用siRNA处理HepG2／GFP-HBx细胞，RT-PCR法测定处理细胞的HBVX基因表达；将HepG2／GFP、HepG2／GFP—HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤，分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长；甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化。结果RT—PCR检测示X—siRNA处理的细胞HBVX mRNA水平明显降低；裸鼠体内实验显示HepG2／GFP—HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2／GFP组（P〈0．05）；X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组（P〈0．05）；甲基化PER检测示HepG2／GFP—HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2／GFP组未检出p16甲基化；X-siRNA、5-aza—dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低。结论X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长，具有潜在应用价值。
- 麦丽杨林邝建玉张绍全康艳红徐启桓谢奇峰
- 关键词：肝炎病毒乙型
- HBV X蛋白诱导抑癌基因p16启动子甲基化而下调其表达
- <正>研究目的探讨HBV X蛋白(HBx)对抑癌基因P16表达、P16基因甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨HBx参与HBV相关性HCC发生发展的相关机制。方法以人肝癌细胞株HepG2、稳定表达HBx的HepG2细胞株...
- 康艳红杨林
- 文献传递
- HBV X蛋白对抑癌基因p16的表达和启动子甲基化的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨HBV X蛋白(HBx)对抑癌基因p16的表达、p16启动子甲基化的影响,从表观遗传学的角度探讨HBx参与HBV相关性HCC发生发展的相关机制。方法以人肝母细胞瘤细胞Hep G2、表达绿色荧光蛋白(GFP)的Hep G2/GFP、稳定表达HBx蛋白的Hep G2/GFP-HBx细胞为实验系统;采用Western Blot法检测Hep G2、Hep G2/GFP、Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白的表达水平。以DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-DC)处理Hep G2/GFP-HBx细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Hep G2、Hep G2/GFP细胞及药物处理和未处理的Hep G2/GFP-HBx细胞中抑癌基因p16启动子区域的甲基化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析。结果 Western Blot分析示Hep G2/GFP-HBx细胞中p16蛋白相对灰度值(23.68±3.93)显著低于Hep G2(91.23±6.87)、Hep G2/GFP(94.55±8.40)细胞,差异均有统计学意义(P值分别为0.0007、0.0014),Hep G2/GFP与Hep G2细胞中p16蛋白相对灰度值差异无统计学意义(P>0.05);MSP法检测示Hep G2/GFP-HBx细胞中存在p16基因启动子区域部分Cp G位点甲基化,Hep G2、Hep G2/GFP细胞中未检出其甲基化,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC处理的Hep G2/GFP-HBx细胞却能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态。结论在肝癌细胞系中,HBx通过诱导抑癌基因p16启动子甲基化而下调其表达,DNMT抑制剂5-Aza-2'-DC能恢复p16基因启动子区域的未甲基化状态,这种可逆性修饰可为HBV相关性HCC的治疗、预防提供新思路。
- 康艳红李威占伟丽尚佳杨林
- 关键词：DNA甲基化
- 乙型肝炎病毒X蛋白抑制p16蛋白表达及其促进HepG2肝癌细胞生长被引量：7
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）对肝癌细胞生长的影响及其机制。方法以HepG2细胞和稳定表达GFP／HBx融合蛋白的HepG2／GFP—HBx为实验细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞吸光度值爿伽，分析细胞生长增殖；流式细胞术检测细胞周期；甲基化PCR检测细胞p16INK4A基因的甲基化；Westernblot检测p16蛋白表达水平。结果72h时HeDG2／GFP-HBx细胞组的A490为3．225±0．038，分别与HepG2和HepG2-GFP细胞组的2．012±0．022、2．038±0．029比较，增殖能力明显增强，t值分别为46．86和42．51，P值均〈0．001，差异均有统计学意义。流式细胞术检测示HepG2／GFP—HBx细胞组的G0／G1期细胞占16．45％±0．45％，明显低于HepG2和HepG2／GFP细胞组的44．81％±1．36％、42．76％±1．58％，f值分别为-34．22和-28．88，尸值均〈0．001，差异均有统计学意义。而5-氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理的HepG2／GFP—HBx细胞Go／G，期细胞比例为33．25％±0．79％，较未处理HepG2／GFP-HBx细胞组的16．45％±0．45％显著增加，两组比较，t=31．85，JD〈0．001，差异有统计学意义。甲基化PCR检测显示HepG2／GFP—HBx细胞组发生了p16INK4A基因甲基化，而HepG2和HepG2-GFP细胞组及5-Aza—CdR处理的HepG2／GFP—HBx细胞组未检测到p16INK4A基因启动子甲基化。Westernblot检测示HepG2／GFP—HBx细胞组p16蛋白水平低于HepG2和HepG2／GFP细胞组，而5-Aza—CdR处理HepG2／GFP—HBx细胞后，p16蛋白水平高于未处理的HepG2／GFP-HBx细胞。结论HBx蛋白可通过缩短HepG2细胞生长的G0／G1期而加快细胞周期进程，从而促进肝癌细胞生长增殖，其机制可能与HBx蛋白诱导p161INK4A基因启动子甲基化及抑制p16蛋白表达有关。
- 麦丽杨林邝建玉朱建芸康艳红张富程谢奇峰高志良
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白
