目的研究二硫键对溶菌酶和肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)蛋白交联聚集作用的影响。方法以人总RNA为模板设计引物进行人类PPI基因的克隆,以获取的正常型表达载体为模板,利用PCR定点突变的方法破坏掉PPI基因中形成二硫键的两个半胱氨酸残基(Cys),将其构建到p Trc His C-hpp I原核表达系统,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达获得正常型和突变型PPI蛋白,与溶菌酶在不同温度、还原剂二硫苏糖醇(DTT)存在条件下进行蛋白聚集反应,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹法分析和鉴定交联情况。结果溶菌酶和PPI在临界变性温度时有明显的二聚体和多聚体条带;反应体系中加入DTT后,几乎观察不到交联条带,两者的异源蛋白交联反应出现同样的现象;将突变型PPI置于与正常型PPI完全相同的反应条件下,均没有任何蛋白聚集现象。结论二硫键是蛋白质交联和多聚化发生的前提,破坏二硫键将导致蛋白结构和交联作用的丧失。
