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一种防溅射的离心管浮漂板: 本实用新型公开了一种防溅射的离心管浮漂板，包括浮漂板以及设置在浮漂板上的大离心管固定孔和小离心管固定孔，在浮漂板的边缘设置有转轴，浮漂板通过转轴与盖板转动连接。本实用新型在浮漂板上设置了盖板，当将离心管置于浮漂板上进行沸...; 江银辉; 文献传递

HPV基因芯片检测质控点设计和参数优化研究被引量：2: 2018年; 目的:设计人乳头状瘤病毒(HPV)基因芯片的质量控制点,优化质量控制探针和人β珠蛋白基因引物浓度以及HPV引物浓度比例,以提高基因芯片的检测质量。方法:收集临床HPV患者宫颈刮片样本,提取样本HPV58的DNA,用HPV通用引物扩增病毒DNA;利用人β珠蛋白引物扩增样本中的β珠蛋白DNA,将扩增的PCR产物与线性化的p MD18-T载体连接,构建人β珠蛋白和HPV58 L1区DNA质粒,转化大肠杆菌后,进行单克隆培养,获得HPV58样本和人β珠蛋白的DNA模板;以HPV58和人β珠蛋白DNA基因信息设计并制备扩增HPV和人β珠蛋白探针及PCR引物,将人β珠蛋白基因探针固定于基因芯片作为质量控制点(QC),按1∶20、1∶10、1∶5和1∶4比例混合单克隆HPV扩增引物与人β珠蛋白扩增引物,采用PCR反向点杂交技术,对模板进行扩增后,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物的产量,进行基因芯片孵育杂交和显色;用扫描仪扫描芯片,采用Image J软件对各阳性杂交信号点进行信号强度采集,计算最佳的人β珠蛋白扩增引物和HPV扩增引物浓度比值;将QC的探针点样浓度设为0. 1 pmol/L、1 pmol/L、10 pmol/L、50 pmol/L和100 pmol/L,检测信号强度,优化质量控制探针点样浓度。结果:扩增了HPV58病毒DNA和人β珠蛋白的DNA模板,设计了HPV58和人β珠蛋白探针及PCR引物;琼脂糖凝胶电泳检测分析发现,当人β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的浓度比例为1∶10时,二者同时PCR扩增时,扩增的强度较为一致,得到的产物量相当,用此引物浓度比例进行PCR获得的产物与测试芯片进行杂交,显色的平衡性较好;对QC的点样浓度进行测试发现,当QC点样探针浓度为50 pmol/L时,可以获得最佳的检测效果。结论:通过对β珠蛋白扩增引物与HPV扩增引物的最佳浓度比例和质量控制探针最佳点样浓度的优化,提高了HPV检测点的检测质量。; 兰金芝刘扬徐澍张金娟王欢肖俊江银辉陈腾祥; 关键词：人乳头状瘤病毒基因芯片引物 Β珠蛋白

黄曲霉基因敲除体系的构建及其RNA依赖的RNA聚合酶1基因在生长发育中的作用被引量：1: 2023年; 目的探讨黄曲霉(A.flavus)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在A.flavus生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入A.flavus的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得A.flavus基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与A.flavus表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。; 刘翔杨碧田询周建鸿禹文峰齐晓岚江银辉; 关键词：基因敲除技术原生质体黄曲霉聚乙二醇

一种丝状真菌保存袋: 本实用新型公开了一种丝状真菌保存袋，包括硫酸纸袋（1），在硫酸纸袋（1）的侧壁上设置有透明塑料片（2），在硫酸纸袋（1）的口部设置有封口条（3），所述硫酸纸袋（1）为圆筒形结构，其底部为圆弧形。本实用新型采用硫酸纸袋盛装...; 江银辉; 文献传递

耐药鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162的分离、鉴定及治疗效果评价: 2024年; 目的从地下污水中分离出一株鲍曼不动杆菌噬菌体并对其进行研究,为噬菌体治疗鲍曼不动杆菌感染提供理论基础。方法以鲍曼不动杆菌GY-6为宿主菌,采用双层琼脂平板法分离噬菌体,对其进行生物学特性检测、治疗效果评价及遗传信息分析。结果分离到鲍曼不动杆菌噬菌体Abgy202162。透射电镜(TEM)分析显示,Abgy202162的形态呈二十面体结构。生物学特性分析表明其最佳感染复数为1,潜伏期为5 min,暴发量大小约为每个细胞520 PFU。此外,Abgy202162在不同浓度的三氯甲烷以及不同pH水平和温度下保持稳定。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,其含有10种蛋白质,分子量为15~100 ku。Abgy202162的双链DNA基因组由40889 bp组成,G+C含量为38.85%,包含47个开放阅读框(ORFs),其中26个ORFs具有特异性功能,未发现毒力相关基因或抗生素耐药基因。系统发育分析显示,Abgy202162是自转录噬菌体科,拜耶林克噬菌体亚科,弗留纳病毒属的一个新的噬菌体。Abgy202162在大蜡螟幼虫体内模型中表现出了治疗鲍曼不动杆菌感染的能力。结论噬菌体Abgy202162对环境耐受性强、安全性高,提示其有望成为抗生素的代替治疗剂用于治疗鲍曼不动杆菌引起的感染。; 田询谭文才杨碧刘翔禹文峰齐晓岚江银辉; 关键词：鲍曼不动杆菌噬菌体生物学特性基因组分析治疗效果评价

AGO和RDRP基因参与黄曲霉压力应激反应: 2023年; 目的探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种10^(6)CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基上观察突变菌株的生长发育现象。在小量酵母提取物葡萄糖(YGM)培养基中加入200、400μg细胞壁压力试剂刚果红(CR),0.8 mol/L、1.6 mol/L渗透压药物氯化钠(NaCl),氧化压力试剂2 mmol/L、4 mmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2)),基因组损伤剂0.01%、0.02%甲磺酸甲酯(MMS)试剂分析突变菌株的压力应激反应。结果成功构建黄曲霉突变菌株ΔAgo1、ΔAgo2、ΔRDRP1、ΔRDRP3且生长发育正常。ΔAgo1、ΔAgo2菌株相比对照可降低对细胞壁和渗透压的胁迫影响。Ago1基因缺失可降低H_(2)O_(2)的影响,相反RDRP3基因缺失,H_(2)O_(2)的抑制作用增加。ΔAgo2、ΔRDRP1菌株能降低对基因损伤剂的作用。此外,ΔRDRP1增加渗透压胁迫作用。结论黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因不参与生长速率和无性繁殖调控,可以参与调节宿主菌对环境的应激反应。; 刘翔杨碧田询周建鸿廖永慧刘玲玲禹文峰齐晓岚江银辉; 关键词：黄曲霉 RNAI 应激反应

利用免疫抑制小鼠模型检测真菌病毒对黄曲霉菌致病力影响被引量：1: 2022年; 【目的】构建用于比较黄曲霉(Aspergillus flavus,A.flavus)菌株之间致病力差异的小鼠感染模型,并利用该模型评价真菌病毒AfPV1对宿主A.flavus致病力的影响。【方法】用不同浓度环磷酰胺腹腔注射Institute of Cancer Research(ICR)小鼠,根据白细胞的数量判断小鼠免疫抑制程度;通过滴鼻和尾静脉两种感染方法接种不同浓度的A.flavus孢子量,统计14 d以内小鼠的死亡率,确定A.flavus最佳的孢子接种量;通过小鼠组织的菌落负荷量以及肺部组织的病理观察,确定A.flavus感染是否成功;最后利用该小鼠模型评价真菌病毒AfPV1对寄主A.flavus致病力的影响。【结果】腹腔注射环磷酰胺的浓度为250 mg/kg时,能够达到免疫抑制水平;小鼠组织真菌负荷和病理组织切片观察显示A.flavus成功感染接种的ICR小鼠组织;在滴鼻接种模型中,A.flavus的孢子接种量为40μL(1×10^(6) CFU/mL)时比较合适评价A.flavus菌株之间的差异;在尾静脉接种的模型中,A.flavus的孢子接种量在50μL(1×10^(6) CFU/mL)比较合适评价A.flavus菌株之间的差异;病毒AfPV1能够引起A.flavus的致病力下降,但是不影响A.flavus在小鼠肺部的定殖量。【结论】本研究构建的小鼠感染模型能够评价A.flavus菌株之间致病力的差异;真菌病毒AfPV1的感染降低了宿主A.flavus的致病力。; 杨碧刘翔田询禹文峰齐晓岚江银辉; 关键词：真菌病毒免疫抑制小鼠尾静脉注射

贵阳市5所医院呼吸科病房空气中曲霉菌种类及携带真菌病毒调查被引量：3: 2016年; 目的:分析贵阳市5所医院呼吸科病房空气中曲霉菌种类及携带真菌病毒的情况。方法:采用含50 mg/L头孢霉素的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板敞口置于病房24 h后收集平板培养,检测5所医院呼吸科病房空气中曲霉菌株;采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取真菌病毒DNA、纤维素吸附的方法提取菌病毒双链RNA(dsRNA),琼脂糖凝胶电泳检测真菌病毒。结果:共收集到曲霉菌597株,其中黄曲霉菌株467株,烟曲霉菌株90株,黑曲霉菌株40株;CTAB法未检测到DNA病毒,纤维素吸附法检测到dsRNA病毒,90株烟曲霉菌株中有11株含有dsRNA病毒,病毒电泳条带类型有2种;467个黄曲霉菌株中有24株含有dsRNA病毒,病毒电泳的条带类型有3种;40个黑曲霉菌株有9株含有dsRNA病毒,病毒电泳条带类型只有1种。结论:烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌株中携带有较多dsRNA病毒。; 江银辉张彪吴昌学袁清官志忠张婷婷; 关键词：曲霉菌抗真菌药真菌病毒 RNA病毒

PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系被引量：2: 2019年; 目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用聚乙二醇(PEG)介导黄曲霉菌原生质体转化法,将携带ptrA的质粒pPTRI整合到黄曲菌株LD-F基因组DNA中,随机挑选7个转化子,通过聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,验证ptrA是否整合到黄曲菌基因组DNA中。结果:0.2 mg/L PT可以完全抑制黄曲霉菌的菌丝生长,1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶处理黄曲霉菌丝2 h可得到大量的原生质体;PCR检测结果显示,质粒pPTRI能够成功整合到黄曲菌基因组。结论:以PT为抗性筛选,建立PEG介导黄曲霉菌的遗传转化体系。; 江银辉杨碧吴昌学周建奖; 关键词：黄曲霉菌原生质体

一种单孢分离显微镜: 本实用新型公开了一种单孢分离显微镜，包括现有的显微镜，在显微镜的底座上固定有单孢分离丝，单孢分离丝竖直地穿过载物台上的通光孔后，其上端高于载物台的上表面；所述单孢分离丝为直径0.1～0.5mm的玻璃丝或者金属丝。本实用新...; 江银辉; 文献传递

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