原飞
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：徐州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省教育厅哲学社会科学基金更多>>
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- 刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析被引量：3
- 2015年
- 目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。
- 原飞刘转转张波曹建平郑葵阳王德广
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白基因克隆原核表达免疫反应性
- 刚地弓形虫抑制蛋白主要特性分析与抗原表位预测被引量：2
- 2015年
- 目的用生物信息学方法分析刚地弓形虫抑制蛋白（ T. gondii profilin, TgPRF）的主要特性与抗原表位，筛选该蛋白的T／B细胞联合抗原表位。方法利用NCBI上的ORF finder, Prot-Param, SignalP, TMHMM. MotifScan. WoLF PSORT, PSORT Ⅱ, SOPMA, Bcepred. SYFPEITHI.NetCTL等生物信息学在线分析程序．结合Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件．分析并预测TgPRF蛋白的开放阅读框、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、亚细胞定位、二级结构、表面可及性、可塑性、亲（疏）水性及T/B细胞抗原表位。结果TgPRF基因的开放式阅读框为492个碱基的核苷酸序列。TgPRF蛋白由163个氨基酸组成，相对分子质量为17555．2，分子式为C764H^1160N204O258S7，等电点为4．40，有4个表面可及性参数≥1．9的区域、5个亲水性参数得分≥1．9的区域、3个柔韧性参数得分≥2的区域、10个翻译后修饰位点、8个潜在B细胞抗原表位和3个T／B细胞联合表位。结论TgPRF蛋白有多个优势抗原表位．为后续弓形虫免疫保护性的研究提供理论指导。
- 刘转转原飞张波郑葵阳张小凡马佳智
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白生物信息学抗原表位
- 重组刚地弓形虫Peroxiredoxin蛋白的纯化及抗血清制备被引量：4
- 2011年
- 目的对原核系统表达的重组刚地弓形虫Peroxiredoxin(rTgPrx)蛋白进行镍亲和层析纯化,免疫大鼠,制备抗血清。方法优化rTgPrx表达条件,获得大量的可溶性蛋白,经镍亲和层析法纯化后皮下注射免疫Wistar大鼠,间接ELISA法测定血清抗体效价。结果在表达菌液A600为0.5,IPTG浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导10 h时,可溶性rTgPrx表达量较高;用镍亲和层析纯化获得纯的目的蛋白,免疫大鼠后诱导产生高滴度抗体血清,效价达1∶12 800以上。结论镍亲和层析法纯化的rTgPrx具有免疫原性,用该蛋白免疫大鼠可获得高效价的抗rTgPrx血清。
- 刘转转王海龙孟晓丽刘红丽申金雁殷国荣原飞
- 关键词：刚地弓形虫PEROXIREDOXIN蛋白纯化抗血清
- 重组刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答被引量：2
- 2016年
- 目的观察不同浓度重组刚地弓形虫抑制蛋白(r Tg PRF)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨其最佳免疫剂量。方法 50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组,免疫组分别用10、20、30μg和40μg r Tg PRF溶于20μl磷酸盐缓冲液(PBS)后滴鼻免疫,对照组用20μl PBS。分别于第0、14和21天滴鼻免疫小鼠,末次免疫后2周,颈椎脱臼处死小鼠。无菌取脾,采用CCK-8法测定脾淋巴细胞刺激指数(SI),酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度。结果经r Tg PRF刺激,30μg和40μg免疫组小鼠脾淋巴细胞SI均高于对照组(P均<0.05),且30μg组显著高于40μg组(P<0.05)。与对照组比较,所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ含量升高(P均<0.05),20、30μg和40μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2含量增加(P均<0.05),其中30μg组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ(P均<0.01)和IL-2含量最高(P均<0.01);所有免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IL-10含量与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 r Tg PRF滴鼻免疫小鼠可诱导脾淋巴细胞增殖和Th1型细胞免疫应答,以30μg剂量免疫效果最佳。
- 刘转转张波原飞张开利王婷郑葵阳
- 关键词：刚地弓形虫抑制蛋白滴鼻免疫脾淋巴细胞免疫应答
