张明亮 作品数:9 被引量:5 H指数:1 供职机构: 上海交通大学附属第六人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市科学技术委员会科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
应用高葡萄糖钳夹技术评估高糖喂养小鼠胰岛细胞功能 被引量:1 2011年 目的利用高葡萄糖钳夹技术探讨高糖喂养小鼠胰岛B细胞功能。方法将16只4周龄C57BL/6J品系小鼠随机数字表法分为2组(各8只),分别用高糖与普通饲料喂养,8周后行腹腔葡萄糖耐量实验比较2组小鼠葡萄糖耐量,行胰岛素耐量实验比较2组小鼠外周组织对胰岛素的敏感性,应用高葡萄糖钳夹技术比较模型小鼠在体胰岛β细胞第1时相和第2时相胰岛素分泌改变。钳夹实验结束3~4d后麻醉动物,取小鼠肝脏,利用庚烷-异丙醇-吐温的方法提取肝脏内甘油三酯及总胆固醇。组间数据比较采用t检验。结果喂养10周时,高糖组小鼠体质量[(18.0±0.8)g]低于普食组[(23.6±0.5)g],2组差异有统计学意义(扭5.595,P〈0.05)。高糖组糖耐量曲线下面积为(103±3)mmol/L,显著高于普食组的(91±3)mmol/L(t=2.487,P〈0.05)。普食组葡萄糖利用指数(KITT)与高糖组差异无统计学意义(分别为0.53±0.08和0.54±0.14,t=2.360,P〉0.05)。高葡萄糖钳夹显示,高糖组第1时相胰岛素水平较普食组下降了49.6%[分别为(0.71±0.26)和(I.41±0.44)μg/L;t=2.943,P〈0.05];高糖组平均葡萄糖输注率为(6.8±2.2)mg·kg-1·min-1,也较普食组的(20.2±2.3)mg·kg-1·min-1降低了66.3%(t=4.206,P〈0.05)。结论高糖喂养早期(8周),小鼠发生葡萄糖耐量降低,主要为胰岛β细胞第1时相胰岛素分泌减弱所致,并非外周胰岛素敏感性改变引起。 张明亮 朱云霞 尹德超 李羚 陆俊茜 王琛 贾伟平关键词:糖尿病 小鼠 胰岛Β细胞 小鼠持续葡萄糖监测技术的建立及其血糖时间序列的多尺度熵分析 2021年 目的·建立小鼠持续葡萄糖监测(continuous glucose monitoring,CGM)技术,并对其血糖时间序列进行多尺度熵(multiscale entropy,MSE)分析。方法·选取饮食诱导肥胖型(diet-induced obesity,DIO)小鼠(n=3,DIO组)及对照组小鼠(n=3)为研究对象,利用全植入式血糖遥测系统分别收集2组小鼠的血糖及体温数据,取术后第10~14日数据进行分析,并统计系统的记录时间。利用MATLAB R2019b软件对2组小鼠术后第11~17日的血糖时间序列进行MSE分析,计算每个时间尺度上对应的熵值。结果·成功建立了以全植入式血糖遥测系统为基础的小鼠CGM技术。6只小鼠的平均记录时间为(27.3±9.3)d,共获得232887个血糖数值。DIO组小鼠平均血糖水平为(7.04±0.71)mmol/L,平均体温为(33.34±0.18)℃。与对照组相比,DIO组小鼠血糖时间序列复杂度较低,但差异无统计学意义。结论·成功建立了小鼠CGM技术;MSE分析发现,DIO型小鼠血糖时间序列复杂度降低,可能是其早期糖代谢异常的表现之一。 李成 张明亮 应令雯 苏娇溶 陶睿 于霞 包玉倩 周健关键词:时间序列 内质网应激诱导G0期G1期转换蛋白2的表达在非酒精性脂肪肝中的作用机制研究 目的 肥胖人群和2型糖尿患者群中合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)者目前显著增加,NAFLD的重要性已在临床上越来越重视.内质网应激(ER Stress)是NAFLD发病的重要原因之一.细胞周期G0期G1期转换蛋白2(G0... 马运芹 张明亮 陆俊茜 郭凯锋 潘盼 赵芳雅 陈海冰 贾伟平骨钙素通过Nrf2及JNK通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝病的机制研究 杜婧 张明亮 陆俊茜 熊钦 许怡婷 张学丽 包玉倩 贾伟平流式细胞仪分选大鼠胰岛β细胞方法的建立及应用 被引量:2 2012年 目的:应用流式细胞仪(FCM)结合侧向角散射光(SSC)和细胞自发荧光强度分选大鼠胰岛β细胞。方法:选取正常雄性SD大鼠,胶原酶消化显微镜下手捡纯化胰岛。胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液。依据细胞自发荧光强度和SSC的差异通过流式细胞仪进行细胞分选。细胞存活率用PI/HO双染法鉴定,β细胞的纯度用细胞免疫组化鉴定。胰岛素测定采用酶联免疫吸附法。结果:自发荧光强度和SSC均高的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(94.5±0.95)%,较分选前单细胞中胰岛素染色阳性细胞百分比(81.2±1.12)%增高,为β细胞富集群;自发荧光强度和SSC均较低的细胞群中胰岛素染色阳性的细胞百分比为(10.0±0.82)%,为non-β细胞群。分选出的β细胞群死亡率低(<5%),其胰岛素分泌随葡萄糖刺激浓度的增加而增加(r=0.8,P<0.001),其中葡萄糖浓度在20 mmol/L时β细胞分泌的胰岛素明显大于浓度为2.8 mmol/L时的分泌量(P<0.001)。此外,Forskolin(FK)和Exendin-4(EX4)可以显著增强β细胞胰岛素的分泌(PFK<0.001,PEX4<0.05)。结论:根据β细胞自发荧光和SSC与non-β细胞的差异进行纯化的β细胞死亡率低、纯度高,胰岛素分泌功能较好,是一种值得推广的分选β细胞的方法。 尹德超 李羚 张明亮 李晓雯 王士洪 幕开达 王琛 贾伟平关键词:胰岛Β细胞 流式细胞仪 肝脏特异性含ZP结构域蛋白在肥胖小鼠模型中的表达 2019年 目的·研究肝脏特异性含ZP结构域蛋白(liver-specific ZP domain-containing protein,LZP)在肥胖小鼠模型中的表达。方法·检测C57BL/6J小鼠各组织LZP的基因和蛋白表达水平。通过高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖模型,以高脂饲料喂养ob/ob小鼠,在实验期间监测体质量和血糖,实验结束后检测肝质量和体脂,进行肝脏组织学检查。应用realtime-PCR检测肝脏组织LZP基因表达水平,Western blotting检测肝脏组织LZP蛋白表达水平。结果·Realtime-PCR结果表明LZP基因主要在C57BL/6J小鼠的肝脏表达,在脾脏和睾丸等部位表达量少;Western blotting结果表明仅在肝脏组织中检测到LZP蛋白表达。与普通饮食喂养的C57BL/6J小鼠相比,高脂饮食喂养的小鼠体质量、体脂和血糖增加(均P<0.05);肝质量增加(P<0.05),肝脏脂肪变明显;肝脏LZP在基因和蛋白表达水平均显著下降(均P<0.05)。与同窝野生型小鼠相比,ob/ob小鼠体质量和血糖均明显增高,但LZP在基因和蛋白水平均明显下降(均P<0.05)。结论·LZP在肥胖小鼠模型中表达明显下降,提示其可能参与机体的能量代谢。 袁叶青 张明亮 王彦苏 包玉倩关键词:肥胖 间断注射骨钙素可预防高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝病的发生 2014年 目的:探讨外源性骨钙素干预是否可预防高脂饮食诱导的野生型小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生。方法将5周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组:(1)普通饮食对照组;(2)高脂饮食对照组;(3)高脂饮食+骨钙素低剂量组;(4)高脂饮食+骨钙素高剂量组。实验期间监测体质量、血糖、进食量等指标;实验结束后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等指标,并行肝组织学检查及肝TC、TG含量测定。HE染色和油红O染色观察肝形态学改变。结果(1)与高脂饮食对照组相比,两种不同剂量骨钙素干预组的体内脂肪含量,包括附睾旁脂肪、肾周脂肪、皮下脂肪及脂体比均明显降低(均P<0.001);空腹血糖及葡萄糖耐量较高脂对照组明显改善(P<0.05~0.001);血清TC、TG、FFA、TNF-α等指标较高脂对照组明显降低(均P<0.05);(2)两种不同剂量骨钙素干预组的肝脂肪沉积明显减少,肝质量、肝体比、肝TC及TG含量等指标均较高脂饮食对照组明显降低(均P<0.05)。结论骨钙素间断注射可有效预防高脂饮食诱导小鼠NAFLD的发生,改善糖脂代谢,并可降低血清TNF-α水平。 聂美云 张明亮 杜婧 窦建新 陆俊茜 马晓静 包玉倩 贾伟平关键词:脂肪肝 骨钙素 肝脏脂肪变对胰高血糖素受体的表达影响 被引量:1 2016年 目的观察胰高血糖素受体(GCGR)在ob/ob小鼠肝组织以及肝癌细胞株HepG_2细胞脂肪变后表达变化。方法分别检测10周龄的雄性ob/ob小鼠和同窝野生对照小鼠的体重、肝功、血糖、血脂以及胰岛素等指标,用荧光定量PCR方法、Western blot法和免疫组化分别检测两组鼠肝脏中gcgr基因、蛋白表达的差异以及定位情况。不同浓度油酸处理HepG_2细胞,油红O染色观察HepG_2细胞脂肪病变程度,QPCR法和Western blot法检测细胞gcgr mRNA和蛋白的表达变化。结果 GCGR广泛表达于多种组织,以肝脏表达较多,ob/ob小鼠呈现明显的脂肪肝性病变,且免疫组化结果发现,ob/ob小鼠与正常对照小鼠相比,肝脏中GCGR表达减少;mRNA表达水平分别为0.709±0.174 vs 1.000±0.000,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);蛋白表达水平分别为0.761±0.211 vs 1.200±0.346,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度梯度油酸处理HepG_2细胞,其GCGR mRNA和蛋白水平表达随油酸浓度增加而逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝脏脂肪性病变降低了肝脏GCGR表达水平,从而可能影响肝脏的糖脂代谢。 王倩倩 肖元元 祝超瑜 魏燕燕 李旭 张明亮 韩峻峰 魏丽 贾伟平关键词:非酒精性脂肪肝 糖尿病 波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响 被引量:1 2020年 【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。 洪新宇 杨正丽 马运芹 张明亮 肖萍关键词:波动性高糖 内皮细胞 氧化应激 自噬