张燕
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
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- 晚期糖基化终末产物对SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制被引量：4
- 2016年
- 目的观察晚期糖基化终末产物(AGEs)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,探讨AGEs影响BMSCs成骨分化的机制。方法(1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,采用贴壁法培养,传至第三代,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定。(2)按处理方法将细胞分为实验组(AGEs组)和对照组(BSA组),分别给予0.2 mg/ml AGEs或牛血清白蛋白(BSA)成骨诱导液干预18 d,然后用茜素红染色,观察比较成骨矿化结节形成情况。(3)将第三代AGEs按处理方法分为正常组、对照组(BSA组)和实验组(AGEs组),正常组细胞不作特殊处理,对照组与实验组分别给予0.2 mg/ml的BSA和0.2 mg/ml的AGEs干预7d,用RNA提取试剂盒提取总RNA,然后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定成骨细胞分泌的I型胶原蛋白(Col-Ⅰ)以及Wnt通路相关分子低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)mRNA的表达量。结果(1)细胞从原代传至第三代的过程中,细胞外形由长梭形逐渐变至短棒状,并伸出多个突起,表型鉴定结果:第三代BMSCs特异性表面标志物CD44、CD90的阳性表达率分别为96.07%、99.34%,CD34的阴性表达率为0.19%。(2)与BSA组相比,AGEs组明显减少了矿化结节的形成。(3)Col-ⅠmRNA、LRP5 mRNA表达量在AGEs组和BSA组组间比较差异均有统计学意义(F=70.10,P=0.00;F=47.99,P=0.00)。结论 AGEs抑制BMSCs的增殖,并阻碍BMSCs向成骨细胞分化,此过程可能是通过干扰Wnt/LRP5/β-catenin通路来进行。
- 张燕高飞
- 关键词：晚期糖基化终末产物骨髓间充质干细胞成骨分化I型胶原蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白5
- Vaspin通过Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化被引量：4
- 2016年
- 目的观察vaspin对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（ BMSCs）增殖及成骨分化的影响及其潜在机制。方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs。成骨诱导液联合不同浓度vaspin （10、50、100 ng/ml）作用于BMSCs,分别于24、48、72 h采用CCK8法检测细胞增殖水平；于第7天用实时荧光定量聚合酶链反应（ RT-PCR）检测ALP、Runx2、β-catenin mRNA表达水平,Western印迹法检测β-catenin、Runx2蛋白表达水平。21天采用茜素红染色矿化结节及定量检测；在100 ng/ml vaspin中加入Wnt通路特异性阻断剂DKK1（1μg/ml）后,RT-PCR及Western印迹法再次检测上述指标表达水平。结果 Vaspin对大鼠BMSCs增殖无显著影响（P〉0.05）,可上调促进BMSCs成骨分化基因ALP、Runx2及β-catenin mRNA表达及β-catenin、Runx2蛋白表达,茜素红染色矿化结节呈红棕色且增多,定量检测OD值,vaspin组高于对照组（P〈0.05）。加入阻断剂DKK1后ALP、Runx2及β-catenin mRNA表达水平均显著下降（均P〈0.05）, Runx2及β-catenin蛋白表达水平亦显著下降。结论 Vaspin可通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化。
- 高飞陈坤张燕杨静
- 关键词：VASPIN骨髓间充质干细胞WNT/Β-CATENIN成骨分化
