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红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化: 2023年; 目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。; 何可可李远迪文廷浩朱婕高杰高杰韩锋胡蓉; 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠

胚胎干细胞源性胸腺上皮祖细胞表达少突胶质细胞糖蛋白对实验性多发硬化症的防治作用: 多发性硬化症(MS)是由自身反应性T细胞介导的,对髓鞘抗原免疫耐受破坏所致的自身免疫病。自身靶抗原通过与抗原提呈细胞结合触发自身致病性CD4+Th1/Th17细胞产生,同时伴有调节性T细胞(Tregs)的免疫功能抑制,可...; 苏敏; 关键词：胚胎干细胞耐受诱导多发性硬化实验性自身免疫性脑脊髓炎

PAX6过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向角膜缘干细胞（LSCs）样细胞的诱导分化研究: ＜正＞角膜的损伤常常会伴随着LSCs的缺乏,目前LSCs的获得多来源于原代组织培养,往往因供体的匮乏导致研究和应用两方面都受到了限制。研究表明PAX6基因在眼球形态发生中发挥重要的调节作用,参与了LSCs的形成。因此,本...; 丁玲苏敏; 文献传递

Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的表达分析被引量：1: 2020年; 目的观察Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的表达及分布情况,探讨Pax6和Wnt7a在角膜中的关系。方法对小鼠与人、家兔、恒河猿的Pax6和Wnt7a氨基酸序列同源性进行生物信息学分析;石蜡切片法观察小鼠眼球壁的形态结构;免疫组织化学技术和流式细胞术分别检测Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的分布和表达。结果小鼠和人、家兔、恒河猿的Pax6和Wnt7a蛋白氨基酸序列同源性都超过90%,其中小鼠和人的同源性最高。HE染色显示了正常小鼠的眼球壁结构。Pax6的免疫阳性表达在小鼠角膜全层的细胞质和细胞膜上,阳性表达率约为77.84%;Wnt7a的免疫阳性主要表达在小鼠角膜全层的细胞膜上,阳性表达率约为63.51%。结论Pax6和Wnt7a均在小鼠角膜中高表达,可能参与角膜的形成。; 高杰穆尧向松丁玲胡蓉李红苏敏; 关键词：PAX6 角膜小鼠石蜡切片法免疫组织化学技术流式细胞术

一种多功能人工抗原呈递凝胶液滴的制备与应用: 本发明涉及微流控技术、化学合成与癌症免疫治疗学的交叉技术领域，公开了一种多功能人工抗原呈递凝胶液滴的制备方法，包括以下步骤：(1)将抗体通过碳二亚胺法修饰到海藻酸盐上，获得抗体修饰的海藻酸盐；(2)人工抗原呈递凝胶液滴的...; 田已申胡蓉苏敏

免疫调节分子 BTN2A2结构及其在肺癌表达的分析: 2022年; 本研究旨在通过生物信息学方法,结合对人体的肿瘤组织切片进行免疫组织化学检测,分析免疫调节分子BTN2A2(butyrophilin subfamily 2 member A2)结构及其在肿瘤组织中的表达,为研究BTN2A2分子的免疫调节功能提供理论和实验支撑。序列分析表明,BTN2A2具有IgV样结构域,与B7家族分子具有序列同源性和结构相似性。系统发育树分析表明,BTN2A2和已知B7家族分子之间具有亲缘性。通过I-TASSER成功构建BTN2A2蛋白三维晶体结构模型,hBTN2A2配体为Cys,配体结合位点相应氨基酸残基分别为Arg-54、His-56、Ser-111、Val-112和Ala-113。蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)方法表明,存在10个与BTN2A2相关的分子,其中CD4和CD8与T细胞免疫相关。ZDOCK分析表明,BTN2A2确实可以与T细胞表面CD4和CD8分子结合。ClusterProfiler分析表明,BTN2A2和相关分子主要集中在原发性免疫缺陷、抗原加工和呈递、T细胞受体信号通路等免疫调节方面。流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析进一步表明,BTN2A2蛋白与T细胞表面CD4和CD8分子间存在相互作用,且BTN2A2蛋白可抑制CD4^(+)和CD8^(+)T细胞增殖和活化(P<0.001)。免疫组织化学染色显示,hBTN2A2在人肺癌、肝癌、肾癌和食管癌组织中的表达高于正常组织,而在卵巢癌组织未见表达(P<0.05);PrognoScan数据库和Kaplan-Meier曲线进行肺癌患者生存分析表明,hBTN2A2高表达的患者预后良好(P<0.001);TIMER数据库分析表明,肺癌中hBTN2A2表达水平与免疫细胞浸润呈正相关关系;GEPIA数据库分析显示,肺癌中hBTN2A2表达主要与CD8^(+)T细胞、CD3^(+)T细胞、树突状细胞(dendritic cell,DC)、辅助性T细胞(helper T cell,Th)1等免疫细胞浸润有关(P<0.001)。研究结果为免疫调节分子BTN2A2结构和功能性表达的深入研究提供了理论基础。; 杨文江何雪萍黄佑娇胡蓉胡蓉; 关键词：生物信息学肺癌

Wnt7a/β-连环蛋白/自身免疫调节因子信号通路参与1型糖尿病的发生被引量：1: 2022年; 目的探讨NOD/Ltj小鼠自发1型糖尿病(T1D)过程中,胸腺内Wnt信号通路、自身免疫调节因子(AIRE)及T1D组织特异性抗原(TSAs)胰岛素2(Ins2)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达与T1D发生的关系。方法60只雌性NOD/Ltj小鼠分3组:3周组、16周未发病组及16周发病组,每组20只;非空腹血糖值连续2次≥11.1 mmol/L视为发生T1D。胰腺HE染色观察胰岛炎发生情况,抗Ins、CD45免疫组织化学染色显示胰岛β细胞或浸润炎性细胞;Western blotting和Real-time PCR检测胸腺Wnt7a、β-catenin、AIRE、Ins、GAD67蛋白水平和mRNA表达;流式细胞术分析胸腺T细胞比例。结果1.随着T1D发生,胰岛组织结构破坏,大量淋巴细胞浸润,残存胰岛细胞减少;Ins^(+)胰岛β细胞周围见大量CD45^(+)细胞聚集。2.随年龄的增加,胸腺Wnt7a、β-连环蛋白(catenin)、AIRE、Ins和GAD67蛋白水平和mRNA表达降低;同周龄发病组小鼠与未发病组小鼠相比,胸腺Ins表达下降。3.与3周组相比,16周未发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例降低;16周发病组CD4、CD8单阳性T细胞比例升高,CD4、CD8双阳性T细胞比例降低。结论Wnt7a/β-catenin信号通路可能通过调控AIRE表达,下调T1D相关TSAs表达,参与T1D发生发展。; 李远迪马静怡余佳珊何可可文廷浩高杰李红苏敏苏敏; 关键词：1型糖尿病自身免疫调节因子 WNT信号通路免疫印迹法实时定量聚合酶链反应

内皮型一氧化氮合酶过表达对慢性低氧诱导小鼠肺动脉高压的作用被引量：4: 2020年; 目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNos)基因体内转染对小鼠慢性低氧性肺动脉高压(PAH)的作用。方法将36只雄性清洁级昆明小鼠随机分为对照组、模型组和eNos治疗组,每组12只。采用间断性常压缺氧法建立小鼠慢性低氧性PAH的模型。观察4周后,将PEI/重组质粒复合物经尾静脉注射到eNos治疗组小鼠体内,其他2组注射等量生理盐水,继续低氧处理。转基因治疗30 d后,观察小鼠的一般情况、平均肺动脉压、右心室肥大指数及肺小动脉形态变化;采用RT-PCR方法检测外源荧光蛋白DsRed表达情况;采用Real-time PCR法检测各组肺组织eNos mRNA的表达;采用硝酸还原酶法检测各组小鼠肺组织NO含量。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠的右心室肥大指数及平均肺动脉压较高,肺小动脉管壁厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组小鼠相比,eNos治疗组小鼠的平均肺动脉压及右心室肥大指数增高减轻,肺小动脉管壁增厚减轻,差异有统计学意义(P<0.05);eNos治疗组小鼠肺组织中可见外源性基因DsRed表达,eNos mRNA表达量和NO含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性eNos基因体内转染能够改善慢性低氧诱导小鼠PAH模型的肺血管重构,使右心室肥大指数增高减轻,肺小动脉血管增厚减轻。; 高杰兰江胡蓉李红黄悦苏敏; 关键词：内皮型一氧化氮合酶肺动脉高压聚乙烯亚胺一氧化氮

神经生长因子对体外培养角膜缘干细胞的作用: 2017年; 目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养角膜缘干细胞(LSCs)的影响及其受体在LSCs上的表达与细胞增殖的关系。方法体外培养LSCs,分对照组和NGF组传代培养,分别选取各组培养1 d、3 d和5 d的细胞,免疫细胞化学检测p63、TrkA、p75表达。结果 NGF组在1 d、3 d、5 d时间点p63表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点TrkA表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点p75表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析TrkA表达平均灰度值与p63表达平均灰度值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NGF有维持LSCs的干细胞特性的作用,LSCs可表达NGF受体TrkA和p75,且TrkA的表达与LSCs的增殖有相关性。; 高杰刘强胡蓉黄悦苏敏李红; 关键词：神经生长因子 P63 TRK P75

β-神经生长因子基因克隆和诱导表达及其对PC12细胞的诱导分化作用被引量：5: 2016年; 目的构建β-神经生长因子(β-NGF)慢病毒表达载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,应用Tet-on 3G四环素诱导表达系统,探讨β-NGF在人胚肾(HEK293FT)细胞中的过表达情况,及其对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞分化的影响。方法从SD大鼠脑组织提取总RNA,反转录成c DNA,利用分子生物学技术,克隆鼠β-NGF基因完整编码区,将β-NGF基因定向插入载体p LVX-TRE3G-IRES中。将重组载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF和载体p LVX-Tet3G分别转染空白HEK293FT细胞,制备收获慢病毒,共转染HEK293FT细胞,同时用不同剂量强力霉素(Dox)诱导NGF表达(分为未转染组、0、100、500和1000μg/L Dox诱导表达组)。48h后收集细胞,免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞内β-NGF表达情况。同时收集培养上清,1.ELISA检测各组上清内β-NGF的分泌量;2.制作条件培养基,加入PC12细胞培养基中进行诱导培养,观察PC12细胞诱导分化情况。结果双酶切和测序鉴定重组质粒p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF序列和方向正确;β-NGF在转染细胞内被诱导表达,随着Dox剂量增加,表达量增强;β-NGF在培养基的上清内表达,表达量随Dox剂量增加而增多。诱导表达的条件培养基可诱导PC12细胞形态改变,表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白。结论成功重组慢病毒载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,转染后β-NGF基因能够在HEK293FT细胞中表达和分泌,且该蛋白具有诱导PC12细胞向神经元样细胞分化的能力;运用Tet-On 3G四环素诱导表达系统,可成功诱导表达获得不同剂量β-NGF蛋白。; 高杰严会文李红黄悦胡蓉苏敏; 关键词：Β-神经生长因子 PC12细胞强力霉素酶联免疫吸附法免疫印迹法

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苏敏

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