郭晓华
- 作品数：8 被引量：20H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人vasorin蛋白胞外结构域单克隆抗体的纯化及应用被引量：2
- 2016年
- 目的:纯化人vasorin(VASN)蛋白胞外结构域的单克隆抗体并鉴定。方法:用表达人VASN蛋白胞外结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞免疫小鼠,收集腹水,纯化抗体;ELISA检测单抗的特异性和亲和力,Western印迹、免疫共沉淀、细胞免疫荧光等实验检测单抗的特异性与可能的用途。结果:纯化获得2株抗VASN胞外结构域单抗V20和V21,ELISA结果显示二者均特异性强、亲和力高;Western印迹显示2株单抗均可结合Hep G2细胞中的VASN蛋白,以V20为佳;免疫共沉淀实验结果显示V21能够钓取Hep G2细胞中的VASN蛋白及细胞培养上清中的分泌型VASN;免疫荧光实验结果显示V21能与Hep G2细胞的VASN蛋白结合。结论:纯化获得2株抗人VASN胞外结构域单抗,为进一步研究VASN蛋白的生物学功能提供了实验工具。
- 王超男孙乐桥沈雪莲李少华李洁丁红梅李慧黄皑雪郭晓华郑伟董洁邵宁生
- 关键词：单克隆抗体
- 细胞靶向适配体的筛选与面临的问题
- 细胞的靶向调控和靶向递送是近年来国际上药物递送系统的研究热点,除纳米载体外,核酸适配体已然备受瞩目。作为靶向剂和递送分子,细胞膜表面受体靶向的适配体可以将小分子化合物或生物活性分子siRNA分子导入到特定的细胞内,发挥后...
- 李少华郭晓华丁红梅李慧白琛俊董洁李章华邵宁生
- 兔源间充质干细胞特异核酸适配体的筛选与鉴定
- 目的:筛选能够特异识别兔源间充质干细胞的核酸适配体,用于通用适配体识别多种来源间充质干细胞的初步应用探究和适配体用于间充质干细胞细胞功能亚群分型的探究。方法:从幼兔股骨骨片分离培养得到间充质干细胞并对其进行成骨、成脂定向...
- 郭晓华
- 关键词：间充质干细胞适配体
- 文献传递
- LncRNA-GAS5抑制miR-21介导的非完全匹配靶mRNA降解被引量：14
- 2017年
- LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵",通过"吸收"miR-21从而调控miR-21对靶基因的抑制.此外,miR-21直接调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的表达.我们首先在HEK293T和HeLa细胞中确认,miR-21通过碱基互补配对调控非完全匹配靶基因PTEN和TPM1的蛋白表达,但不影响PTEN和TPM1mRNA的水平.此外,过表达miR-21后,qRT-PCR检测PTEN和TPM1mRNA的半衰期,发现它们的半衰期显著缩短,miR-21加速PTEN和TPM1mRNA的降解.通过转染lncRNA-GAS5的过表达质粒,发现lncRNA-GAS5竞争性地与miR-21结合能够延长PTEN和TPM1mRNA的半衰期,而miR-21与lncRNA-GAS5碱基互补配对结合后,又对lncRNA-GAS5存在调节作用,减弱lncRNA-GAS5的稳定性并加速lncRNA-GAS5的降解.LncRNA-GAS5作为miR-21的"分子海绵"能够抑制miR-21对非完全匹配靶mRNAPTEN和TPM1的降解,同时,miR-21与lncRNA-GAS5结合后又存在对lncRNA-GAS5的反馈调节,这些相互作用机制的发现有助于了解lncRNA、miRNA、mRNA之间这个复杂又精细的调控环路.
- 郑伟董洁李少华丁红梅李慧黄皑雪夏伟白琛俊郭晓华李达耿介李洁邵宁生
- 关键词：MIR-21PTEN
- 识别多种种属来源间充质干细胞核酸适配体的筛选及鉴定
- 2017年
- 目的筛选能识别多种属来源的间充质干细胞(MSC)的核酸适配体,并对其进行鉴定。方法从幼兔股骨骨片分离MSC并进行成骨、成脂诱导分化鉴定。以分离得到的兔源性MSC为筛选靶标,利用细胞SELEX技术筛选核酸适配体。将第5轮富集文库进行克隆、测序,利用RNA structure、MEME软件分析获得候选序列,利用流式细胞仪鉴定候选适配体与兔、大鼠、人源性MSC的结合。结果从兔股骨骨片分离得到的MSC可诱导向成骨、成脂分化。经过5轮SELEX筛选获得兔MSC富集文库。候选适配体5-1-12不仅结合兔MSC,也识别大鼠和人源性MSC。结论活细胞SELEX筛选获得与多种属来源MSC结合的核酸适配体5-1-12。
- 郭晓华李章华汪伟董洁丁红梅李少华邵宁生
- 关键词：间充质干细胞适配体
- miR-216b在体外培养细胞中加速长非编码RNA UCA1的降解被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨长非编码RNA(lncRNA)UCA1作为miR216b的"分子海绵"结合miR-216b后的命运变化。方法:提取人HEK293T细胞基因组,以特异性引物PCR扩增UCA1基因并克隆至pcDNA6.0b载体,用氨苄西林抗性筛选阳性克隆,重组质粒pcDNA6-UCA1转染HEK293T和HeLa细胞并鉴定其表达水平。向HEK293T和HeLa细胞转染miR-216b类似物,同时用放线菌素D抑制细胞转录,收取3个时间点的细胞总RNA并鉴定其完整性,反转录获得cDNA后,采用实时荧光定量PCR技术检测各时间点UCA1的水平,测定其半衰期。pcDNA6-UCA1转染细胞24h后,转染miR-216b类似物或miR-216b抑制剂,并使用放线菌素D抑制转录,收取3个时间点的细胞总RNA,qRTPCR检测UCA1半衰期。结果:构建的pcDNA6-UCA1过表达质粒转入HEK293T细胞后,qRT-PCR检测UCA1表达水平显著提高;miR-216b能够降低细胞内源或外源过表达的UCA1稳定性,加速UCA1的降解,显著缩短其半衰期;使用miR-216b的抑制剂,UCA1的半衰期延长。结论:miR-216b能够加速lncRNA-UCA1的降解,为研究miRNA与lncRNA的相互作用提供了新的思路。
- 郑伟郭晓华董洁李少华丁红梅李慧黄皑雪夏伟白琛俊李达耿介李洁邵宁生
- 关键词：降解
- 人肿瘤坏死因子α特异性结合miR-146b的新生物学特性研究
- 2016年
- 目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)作为micro RNA(mi RNA)结合蛋白的生物学特性。方法:Western印迹检测LPS激活的U937细胞中TNF-α蛋白表达水平,RT-PCR检测几种炎症相关的mi RNA在激活前后表达水平的变化;用RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)技术钓取U937细胞中TNF-α结合的mi RNA,RT-PCR检测RIP产物中上述几种mi RNA的含量;用凝胶阻滞实验检测TNF-α与mi RNA是否直接结合。结果:LPS激活的U937细胞中能检测到膜结合型和可溶性2种形式的TNF-α,细胞激活前后mi R-16和mi R-21的表达水平在检测的几种mi RNA中最高,mi R-146b和mi R155次之;而RIP产物中mi R-146b的水平在实验组和对照组中有显著差异,其他mi RNA差异不明显;凝胶阻滞实验结果显示mi R-146b能与人TNF-α直接结合。结论:首次证实人TNF-α能够直接特异地结合mi R-146b,提示TNF-α可能作为mi RNA结合蛋白发挥生物学功能。
- 沈雪莲李洁黄皑雪王超男孙乐桥李少华丁红梅李慧郭晓华郑伟董洁邵宁生
- 关键词：人肿瘤坏死因子ΑMICRORNARNA结合蛋白
- 乙醇刺激HepG2细胞分泌VASN蛋白的生物学功能研究被引量：1
- 2016年
- 目的：探究乙醇对HepG2细胞VASN蛋白表达与分泌水平的影响，及其对HUVEC细胞迁移的影响。方法乙醇刺激HepG2细胞，定量PCR （ qPCR）检测HepG2细胞VASN mRNA水平的变化， Western印迹检测HepG2细胞与细胞上清中VASN蛋白水平的变化。划痕愈合实验检测细胞共培养条件下，乙醇刺激的HepG2细胞培养上清对HUVEC细胞迁移的影响。结果 qPCR结果显示，乙醇可上调HepG2细胞VASN mRNA水平。 Western印迹结果显示，细胞VASN蛋白表达与分泌水平升高。划痕愈合实验结果表明乙醇刺激HepG2细胞VASN蛋白的分泌增加，可以促进HUVEC细胞的迁移。结论乙醇刺激导致HepG2细胞VASN蛋白表达水平和分泌水平升高，并可促进与其共培养的HUVEC细胞迁移。
- 孙乐桥王超男郑伟黄皑雪沈雪莲丁红梅李少华李洁李慧白琛俊郭晓华董洁邵宁生
- 关键词：乙醇人脐静脉血管内皮细胞
