张志诚
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 低表达C3aR人肾足细胞的构建及鉴定
- 2016年
- 目的前期的研究中发现过敏性毒素C3a受体(C3aR)在糖尿病肾病病中表达增加,但在糖尿病肾中的病理意义及其在肾组织足细胞中的生理作用尚不清楚,文中通过建立C3aR低表达的肾足细胞系(HPC-C3aRsiRNA),为研究C3aR在肾足细胞中的生理功能提供细胞模型。方法设计合成人C3aR小干扰RNA(C3aRsiRNA),将其克隆到慢病毒表达载体中,通过与包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aRsiRNA慢病毒,利用C3aRsiRNA慢病毒感染人肾足细胞HPC,根据C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特点筛选稳定转染的人肾足细胞。通过荧光定量PCR分析稳定转染的足细胞C3aR的mRNA表达水平,Western blot和免疫组化染色分析稳定转染的肾足细胞C3aR蛋白水平,鉴定稳定转染C3aR低表达的肾足细胞系。结果荧光定量PCR结果显示,与HPC-C3aRsiRNA细胞C3aR的mRNA水平(0.26±0.04)比较,非转染HPC细胞(1.00±0.13)和阴性对照(1.07±0.16)显著升高(P<0.05)。免疫组化染色显示HPC-C3aRsiRNA细胞的C3aR蛋白水平显著降低。Western blot结果显示,与HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表达(0.62±0.09)比较,正常HPC、阴性转染的HPC表达(1.00±0.08、1.00±0.22)显著升高(P<0.05)。结论成功构建了C3aR低表达的肾足细胞系,可为进一步了解C3aR在肾中的生理作用提供细胞模型。
- 赵文紧张志诚郑敬民
- 关键词：低表达转染
- C3aR激动剂对小鼠原代肾小管上皮细胞表型的影响被引量：1
- 2017年
- 目的细胞转分化(EMT)过程中的关键事件包括上皮细胞蛋白(E-钙黏蛋白)的表达下调,细胞活动性增加,细胞基质生成的增多等。文中构建鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法,探究C3aR活化是否能够引起小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化。方法用鼠肾小管节段进行肾小管上皮细胞原代培养,以免疫细胞化学及免疫荧光染色对上皮细胞进行鉴定。实验分为正常对照组,C3aR激动剂设5个浓度组:0.1、1、100、500及2000 ng/m L组,另设3个时间组:6、12及24 h组。利用Real-time PCR检测肾小管上皮细胞中E-钙黏蛋白、α-SMA及collagen I的表达水平变化;利用Western blot检测E-钙黏蛋白、α-SMA蛋白表达水平;用鬼笔环肽对上皮细胞行骨架染色,观察细胞骨架形态变化。结果与正常对照组比较,C3aR激动剂组(500 ng/m L、刺激48 h)抑制E-钙黏蛋白表达[(0.950±0.901)vs(0.650±0.221),P<0.05],上调α-SMA[(1.380±0.062)vs(1.600±0.103),P<0.05]和collagen I表达(P<0.05),且各自表达趋势与C3aR激动剂呈时间和剂量依赖关系。细胞骨架染色结果显示,随着C3aR激动剂刺激时间的延长,上皮细胞内由激动蛋白构成的应力纤维生成逐渐增多。结论成功构建了小鼠肾小管上皮细胞原代培养及鉴定的方法;C3aR活化能够促进肾小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化,并在肾纤维化的发生发展中起一定作用,预示C3aR可能成为肾疾病治疗的新靶点。
- 张志诚赵文紧郑敬民
- 关键词：肾小管上皮细胞原代培养
- C3a/C3aR轴在肾脏疾病中的作用
- 2016年
- 近年来,C3a/C3aR轴在肾脏疾病中的作用逐渐受到关注,在其相关肾脏疾病患者肾组织中均能检测到C3a、C3aR的表达上调,上调程度与临床病理指标及肾脏预后显著相关。一些研究表明,C3a能通过与炎症细胞及肾脏组织细胞(肾小管上皮细胞、肾小球内皮细胞等)上表达的C3aR相结合,使靶细胞活化,释放多种炎性因子,来促进肾脏疾病的发生发展。但C3a/C3aR轴在肾脏疾病中的确切病理意义和作用机制仍有待进一步研究,本文就C3a/C3aR轴在肾脏疾病中的作用进行综述。
- 张志诚郑敬民
- 关键词：肾脏疾病肾脏损害治疗靶点
- 一种扩散张量成像参数量化方法、系统、设备和介质
- 本发明提供了一种扩散张量成像参数量化方法、系统、设备和介质，其中方法包括：获取dMRI数据{S<Sub>0</Sub>,S<Sub>b</Sub>(g<Sub>n</Sub>),n＝1,2,…,N}，以及获取dMRI数据...
- 张鑫媛陈韫玮张志诚冯衍秋
- 炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞C3a受体表达的调控被引量：1
- 2016年
- 目的:为更好了解肾脏组织中C3aR表达调控因素,我们研究了多种炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)C3a受体(C3aR)表达的调控作用。方法:用多种炎性细胞因子[干扰素γ(IFN-γ)、C3a、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)]刺激HK2细胞,利用荧光定量PCR、免疫组化及免疫印迹的方法检测HK2细胞C3aR表达水平。结果:炎性细胞因子IFN-γ能够显著促进HK2细胞C3aR的表达上调[与正常对照组相比,C3aR mRNA表达水平的约增长5倍(P=0.001),蛋白水平表达上调大约1.6倍(P=0.046)],且HK2细胞C3aR mRNA水平表达上调与IFN-γ呈剂量及时间依赖关系;而其他的炎性细胞因子如TNF-α、TGF-β、IL-1β甚至生物活性多肽C3a均未观察到对HK2细胞C3aR表达造成影响。结论:肾小管上皮细胞表面可表达生物活性肽段C3aR,而且炎症细胞因子IFN-γ能够明显增强肾小管上皮细胞C3aR表达,预示C3a/C3aR轴可能参与了肾脏局部炎症反应的调节并且与肾脏疾病的发生、发展有一定的相关性。
- 张志诚赵文紧刘志红郑敬民
- 关键词：炎症细胞因子干扰素Γ肾小管上皮细胞
- 肾小管上皮细胞C3aR的表达调控及其活化作用研究
- 研究背景补体系统是一种生物级联反应体系,具有复杂而精密的调控机制,包含30多种血浆和细胞相关蛋白。补体系统组成成分大致可分为能与细胞结合的固有成分、各种调节因子以及相关的补体受体等。补体系统能被众多因素激活发生级联酶促反...
- 张志诚
- 关键词：炎症细胞因子肾小管上皮细胞原代培养
- 文献传递
