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贾超
作品数:
2
被引量:5
H指数:1
供职机构:
青岛大学
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
曲彦
青岛大学医学院
王奉涛
青岛大学医学院
郭璐璐
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刘媛
青岛大学医学院
胡丹
青岛大学医学院
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慢病毒介导的BAG-1L基因对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞的保护作用
被引量:1
2017年
目的探讨慢病毒介导Bcl-2结合抗凋亡基因1L(BAG-1L)过表达对缺氧/复氧诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,研究其对磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,取对数生长期细胞分为重组慢病毒感染组(感染携带BAG-1L基因及荧光蛋白基因的重组慢病毒)、载体对照组(感染携带荧光蛋白基因但不携带BAG-1L基因的慢病毒)及细胞对照组(未感染慢病毒)。感染48h后采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测靶细胞BAG-1L的表达;3组细胞经缺氧8h/复氧24h处理后,采用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性;采用别藻蓝蛋白标记的膜联蛋白V/7-氨基放线菌素D(Annexin V-APC/7-AAD)双染法检测细胞凋亡,并进行流式分析;采用Western Blot试验检测细胞BAG-1L、热休克蛋白70(HSP70)、AKT及磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达。结果重组慢病毒感染48h后可观察到外源性BAG-1L特异性蛋白条带,而细胞对照组和载体对照组无此特异性蛋白条带。经缺氧,复氧处理后,重组慢病毒感染组细胞活性较细胞对照组和载体对照组均明显增高(A值:0.689±0.036比0.425±0.013、0.400±0.012),细胞凋亡明显减少[凋亡率:(26.97±1.82)%比(36.60±1.45)%、(35.77±3.74)%],BAG-1L、HSPT0、P-AKT蛋白表达水平明显升高(BAG-1L蛋白(灰度值):2.405±0.167比0.529±0.141、0.601±0.099,HSP70蛋白(灰度值):0.997±0.123比0.634±0.091、0.584±0.106,p-AKT蛋白(灰度值):1.234±0.118比0.661±0.210、0.712±0.199,均P〈0.01];而AKT蛋白表达虽高于细胞对照组和载体对照组(灰度值:1.103±0.269比0.646±0.188、0.791±0.326),但差异无统计学意义(均P〉O.05)。细胞对照组和载体对照组各指
王芸
李庆淑
贾超
谢春雨
宋砚坤
张楠
曲彦
关键词:
抗凋亡
P13K/AKT通路
热休克蛋白70对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤细胞细胞膜钙通道的调节机制
被引量:4
2016年
目的探讨慢病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对缺血/缺氧神经细胞细胞膜钙离子通道的影响及其机制。方法取对数生长期的嗜铬细胞瘤细胞(PC12),以缺氧6h、复氧12h刺激PC12细胞模拟体内神经细胞遭受缺血/再灌注时的病理过程,将细胞分为非感染组,感染含绿色荧光蛋白(GFP)基因但不含HSP70基因的慢病毒对照组(GFP慢病毒对照组),及感染含重组HSP70和GFP基因的慢病毒实验组(HSP重组慢病毒感染组)。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测L型钙通道cav1.2、cav1.3亚基,受体门控通道NR1、NR2亚基,及Na^+/Ca^2+交换体(NCX)的mRNA和蛋白表达。结果缺氧/复氧处理后,HSP70重组慢病毒感染组细胞cav1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表达均明显低于GFP慢病毒对照组和非感染组[cav1.2 mRNA(2^-△△Ct):3.13±0.46比5.12±0.52、5.13±0.66,NR1 mRNA(2^-△△Ct):1.61±0.44比3.23±0.82、3-31±0.78,NR2 mRNA(2^-△△Ct):2.09±0.41比3.91±0.64、3.88±0.62;car1.2蛋白(灰度值):2.82±0.39比3.98±0.23、3.96±0.24,NR1蛋白(灰度值):1.84±0.35比2.79±0.21、2.86±0.23,NR2蛋白(灰度值):0.87±0.24比1.57±0.31、1.33±0.44;均P〈0.01];而GFP慢病毒对照组与非感染组间细胞car1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表达差异均无统计学意义(均P〉0.01)。非感染组、GFP慢病毒对照组和HSP70重组慢病毒感染组间细胞cav1.3、NCX的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义[cav1.3 mRNA(2^-△△Ct):4.82±0.32、4.72±0.36、4.82±0.29,NCX mRNA(2^-△△Ct):3.49±0.78、3.47±0.71、3.56±0.65;cav1.3蛋白(灰度值):2.63±0.40、2.64±0.39、2.68±0.39,NCX蛋白(灰度值):3.27±0.48、3.34±0.48、3.31±0.
郭璐璐
贾超
曲彦
刘媛
宋砚坤
王奉涛
胡丹
关键词:
热休克蛋白70
慢病毒
L型钙通道
嗜铬细胞瘤细胞
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