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金骨莲胶囊对兔膝骨关节炎软骨保护作用的研究被引量：10: 2016年; 目的研究中药金骨莲胶囊对兔膝骨关节炎(OA)关节软骨中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响,探讨其可能作用机制。方法 40只家兔分为4组:空白对照组(10只)、模型对照组(10只)、金骨莲胶囊组(10只,74.4mg·kg-1·d-1)、氨基葡萄糖组(10只,150mg·kg-1·d-1)。除空白对照组外其余均按改良Hulth法复制OA模型,术后当天开始药物灌胃,对照组仅灌服等量生理盐水,1次/天,连用8周。8周后处死家兔取右膝股骨髁及胫骨平台大体观察。采用Mankin评分评价关节软骨退变情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测股骨内侧髁负重区关节软骨IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA相对表达量。结果空白对照组、金骨莲胶囊组、氨基葡萄糖组和模型对照组Mankin评分分别为(1.380±0.183)、(2.580±0.464)、(5.250±0.143)、(10.380±0.183)分,Mankin评分依次升高,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。金骨莲胶囊组和氨基葡萄糖组3种炎性因子mRNA表达量均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);中药金骨莲胶囊在下调IL-1βmRNA方面与氨基葡萄糖作用相当,差异无统计学意义(P=0.271)。金骨莲胶囊在降低IL-6和TNF-αmRNA方面优于氨基葡萄糖作用,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中药金骨莲胶囊可不同程度下调关节软骨中IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子的表达,使软骨退变的部分因素得到控制,从而起到保护关节软骨的作用。; 王胜民刘毅刘波桑鹏仲鹤鹤孙鹏鹏; 关键词：骨关节炎白细胞介素-1Β 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-Α

睾酮对膝关节骨关节炎去势雄兔的软骨修复作用: 2017年; 目的探讨睾酮对膝关节骨关节炎(KOA)睾丸切除(去势)雄兔的软骨修复作用。方法将18只雄兔采用改良Hulth法建立右侧KOA模型并去势,8周时随机处死6只,确认模型建立成功。将剩余12只兔随机分为观察组和对照组,每组6只。观察组每隔2周肌注十一酸睾酮6 mg/kg,对照组同时肌注等量生理盐水,共8周(4次)。分组处理第8、12、16周,采用电化学发光免疫分析法检测血清睾酮;分组处理第16周末处死,取出右股骨髁,肉眼观察标本大体情况,采用免疫组化法检测软骨组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达,并进行关节软骨Mankin's评分。结果两组第8周血清睾酮水平比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组第12、16周血清睾酮水平均明显高于对照组(P均<0.05)。对照组右膝关节明显肿大,关节软骨面变薄、粗糙,软骨表面色泽变暗,溃疡较深,边缘骨赘形成明显。观察组右膝关节肿大程度轻于对照组,软骨表面有光泽,可见小溃疡和不规则裂隙。观察组软骨组织IGF-1阳性表达率高于对照组,Mankin's评分低于对照组(P均<0.05)。结论睾酮可促进KOA去势雄兔的软骨修复;其机制可能与促进IGF-1表达有关。; 熊华章刘毅王胜民吴术红桑鹏; 关键词：骨关节炎膝关节睾酮去势法胰岛素样生长因子1 软骨修复

TGF-β_1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究被引量：5: 2017年; 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β_1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力。方法取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养h AMSCs,流式细胞术检测h AMSCs表型分子,免疫荧光染色检测h AMSCs其角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况。取第3代h AMSCs,分别使用含TGF-β_1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15 d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达。结果倒置相差显微镜观察示h AMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示h AMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示h AMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;h AMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力。CCK-8法检测示,7 d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7 d后显著高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色示,培养5、10、15 d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强。实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF m RNA相对表达量均逐渐上调(P<0.05)。除培养5 d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF m RNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF m RNA相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 h AMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细�; 邹刚李豫皖金瑛朱喜忠杨继滨王胜民尤奇熊华章刘毅; 关键词：人羊膜间充质干细胞 VEGF 组织工程韧带

金铁锁灌胃对兔膝骨关节炎的治疗作用及其机制探讨被引量：2: 2017年; 目的观察金铁锁对兔膝骨关节炎(OA)的治疗作用,并探讨其可能机制。方法 120只兔随机分为4组各30只,模型组、金铁锁组、氨基葡萄糖组均制备OA模型,空白组不制备模型;制模后金铁锁组和氨基葡萄糖组分别灌胃金铁锁、氨基葡萄糖,模型组和空白组给予等量生理盐水。观察各组兔膝关节软骨大体、病理学变化,比较兔膝关节软骨白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)的mRNA及蛋白。结果与空白组比较,模型组膝关节肉眼观及病理学变化明显,且随制模时间变化而变化;与模型组比较,氨基葡萄糖组、金铁锁组上述情况好转,金铁锁组治疗效果更佳。与空白组比较,模型组IL-1β、MMP-3、TIMP-1 mRNA及蛋白表达升高;与模型组比较,氨基葡萄糖组、金铁锁组IL-1β、MMP-3 mRNA及蛋白表达降低,TIMP-1表达升高;与氨基葡萄糖组比较,金铁锁组IL-1β、MMP-3 mRNA及蛋白表达降低,TIMP-1表达升高。结论金铁锁对兔膝OA有治疗作用,其机制可能与下调膝炎症因子IL-1β、MMP-3表达及上调TIMP-1表达有关。; 王胜民刘毅熊华章; 关键词：金铁锁骨关节炎白细胞介素1Β 基质金属蛋白酶3 基质金属蛋白酶抑制剂1

大蒜素对兔膝骨关节炎作用的实验研究被引量：3: 2017年; [目的]探讨大蒜素对兔膝骨关节炎的作用。[方法]将30只家兔随机分为空白对照组、模型对照组和大蒜素组,每组10只;除空白对照组外其余2组按改良Hulth法建立模型,术后开始灌服药物,大蒜素组(大蒜素,128 mg/kg/d)、空白对照组和模型对照组(等量生理盐水20 ml),连用8周。术后8周处死所有家兔取右膝股骨髁大体观察;苏木精-伊红(HE)和番红O(SA-O)染色对股骨髁关节软骨行Mankin评分;采用q RTPCR法检测股骨内侧髁负重区软骨组织interleukin-1β(白细胞介素-1β,IL-1β)、matrix metalloproteinase-3(基质金属蛋白酶-3,MMP-3)和tissue inhibitor of metalloproteases-1(基质金属蛋白酶组织抑制因子-1,TIMP-1)的m RNA相对表达量。[结果]三组之间比较,空白对照组的Mankin评分最低,IL-1β、MMP-3和TIMP-1 m RNA表达量最低,模型对照组和大蒜素组,分别与空白对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,大蒜素组Mankin评分降低,IL-1β、MMP-3、TIMP-1 m RNA表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]大蒜素能够改善兔膝骨关节炎Mankin评分并能够下调股骨髁关节软骨中IL-1βm RNA、MMP-3m RNA表达,上调TIMP-1 m RNA表达量。; 熊华章刘毅王胜民吴术红邹刚金瑛; 关键词：大蒜素骨关节炎白细胞介素-1Β 基质金属蛋白酶-3 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

金铁锁对膝关节骨性关节炎兔关节软骨的保护作用及其机制被引量：3: 2016年; 目的观察金铁锁对膝关节骨性关节炎(OA)兔关节软骨的保护作用,并探讨其作用机制。方法将50只家兔随机分为空白对照组,金铁锁大、中、小剂量组和模型对照组,各10只。除空白对照组外,其余各组均按照改良Hulth法制备右膝关节OA模型。金铁锁大、中、小剂量组术后分别按体质量称取金铁锁粉末12.80、4.23、2.58 mg/kg,配制药物溶液10 m L灌胃,空白对照组及模型对照组灌服等量生理盐水,1次/d,连用8周。造模第8周处死家兔,取右膝股骨内侧髁组织,采用Mankin评分标准评价关节软骨退变情况,qRT-PCR法检测关节软骨组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量。结果空白对照组,金铁锁大、中、小剂量组和模型对照组Mankin评分分别为(0.80±0.20)、(2.60±0.16)、(3.40±0.16)、(5.10±0.38)、(10.40±0.16)分,各组Mankin评分依次升高,组间两两比较均有统计学差异(P均<0.01)。模型对照组软骨组织IL-6、TNF-αmRNA相对表达量均高于其余各组,空白对照组均低于其余各组,金铁锁大、中剂量组均低于金铁锁小剂量组(P均<0.05)。模型对照组软骨组织IL-1βmRNA相对表达量均高于其余各组,空白对照组、金铁锁大剂量组均低于金铁锁中、小剂量组(P均<0.05)。结论金铁锁对膝关节OA兔的软骨具有保护作用,且呈浓度依赖性,机制可能与降低软骨组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达有关。; 王胜民刘毅刘晓丽熊华章李豫皖余峰; 关键词：骨性关节炎膝关节金铁锁关节软骨

盐酸氨基葡萄糖对膝骨关节炎家兔MMP-3、TIMP-1的影响被引量：1: 2016年; 目的:观察盐酸氨基葡萄糖对膝骨关节炎家兔炎症因子的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法:30只家兔随机等分为空白组、模型组和盐酸氨基葡萄糖组。空白组仅暴露右膝关节腔,其余两组均按改良Hulth法造模。盐酸氨基葡萄糖组术后开始灌药(132 mg·kg^(-1)·d^(-1)),空白组和模型组均灌服等量生理盐水1次·d^(-1),连用12周。观察术前及术后12周家兔体重变化;采用Mankin评分评估右膝股骨髁关节软骨退变情况,RT-q PCR法检测股骨内侧髁负重区软骨组织基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶特异性抑制剂-1(TIMP-1)的mRNA相对表达量,ELISA法检测血清中MMP-3和TIMP-1的蛋白表达量。结果:模型组体重变化幅度均比其余两组大(P<0.05);Mankin评分、MMP-3和TIMP-1 mRNA及蛋白表达量,盐酸氨基葡萄糖组和模型组均比空白组高(P<0.05),盐酸氨基葡萄糖组比模型组低(P<0.05)。盐酸氨基葡萄糖在调节MMP-3/TIMP-1平衡方面具有一定作用。结论:盐酸氨基葡萄糖对膝骨关节炎具有一定的治疗作用,其机制可能与下调MMP-3和TIMP-1等炎症因子有关。; 刘波刘毅熊华章王胜民刘子铭; 关键词：盐酸氨基葡萄糖基质金属蛋白酶-3 家兔

体外定向诱导人羊膜间充质干细胞向骨、软骨及脂肪细胞的分化被引量：8: 2017年; 背景:人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞,在体外不同条件下诱导分化为骨、软骨及其他结缔组织,较其他类型间充质干细胞,因其来源广泛,分离无创伤,较低的免疫原性、生长周期短等特点,是组织工程种子细胞的重要来源。目的:探讨人羊膜间充质干细胞是否具有间充质干细胞特性及诱导成骨、软骨及脂肪细胞诱导分化的能力。方法:取足月产胎盘羊膜组织,酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,取第3代细胞分别加入成骨、成软骨及成脂诱导液的培养基进行诱导。结果与结论:(1)茜素红染色显示,成骨诱导后细胞存在多个矿化结节,细胞中碱性磷酸酶活性明显增加;(2)甲苯胺蓝染色显示,成软骨诱导后细胞基质中分泌大量的糖胺聚糖;(3)油红O染色显示,成脂诱导后,细胞浆内可见脂滴;(4)实时荧光PCR结果显示,成骨、成软骨及成脂诱导21 d后,相关基因表达较7 d时明显增高;(5)结果人羊膜间充质干细胞具有向成骨细胞,软骨细胞及脂肪细胞的潜能,可选作为组织工程学的种子细胞。; 李豫皖朱喜忠金瑛王胜民杨继滨熊华章邹刚刘毅; 关键词：干细胞人羊膜间充质干细胞成骨细胞成软骨细胞体外诱导

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王胜民

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