目的探讨长链非编码RNA00963(LINC00963)通过微小RNA-150-5p(miR-150-5p)/白介素1受体关联激酶1(IRAK1)轴对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,分为正常对照(Con)组、LPS组、LPS+敲低阴性对照组(LPS+si-NC组)、LPS+敲低LINC00963组(LPS+si-LINC00963)、LPS+si-LINC00963+抑制剂阴性对照组(LPS+si-LINC00963+inhibitor NC组)、LPS+si-LINC00963+miR-150-5p抑制剂组(LPS+si-LINC00963+miR-150-5p inhibitor组)、LPS+si-LINC00963+过表达阴性对照组(LPS+si-LINC00963+oe-NC组)、LPS+si-LINC00963+过表达IRAK1组(LPS+si-LINC00963+oe-IRAK1)组。MTT和Ed U法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6和IL-10,商品化试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物歧化酶(GSH-Px),q RT-PCR检测LINC00963、miR-150-5p、IRAK1 mRNA表达,Western blot法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、IRAK1蛋白表达。双荧光素酶报告基因和RNA pull down实验验证miR-150-5p与LINC00963和IRAK1的关系。结果与Con组比较,LPS、LPS+si-NC组LINC00963和IRAK1 mRNA表达、TNF-α、IL-6、MDA、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、IRAK1蛋白表达升高(P<0.05),miR-150-5p表达、24 h A490值、48 h A490值、细胞增殖率、IL-10、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00963组LINC00963和IRAK1 mRNA表达、TNF-α、IL-6、MDA、细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、IRAK1蛋白表达降低(P<0.05),miR-150-5p表达、24 h A490值、48 h A490值、细胞增殖率、IL-10、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。抑制miR-150-5p表达或过表达IRAK1均可降低干扰LINC00963对LPS诱导NRK-52E细胞损伤的改善作用(P<0.05)。结论干扰LINC00963可调控miR-150-5p/IRAK1轴减轻LPS诱导的NRK-52E细胞氧化应激、炎症反应和凋亡。
