王安
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 供职机构：苏州大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金苏州市科技发展计划苏州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 微小RNA-1在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的调控作用被引量：5
- 2016年
- 目的探讨微小RNA-1（miR-1）在高糖培养下心肌成纤维细胞致纤维化中的作用。方法取1-3日龄SD大鼠心尖组织培养原代成纤维细胞，选用3-4代细胞并随机分为正常糖空病毒组（CON＋Lv-Vehicle组）、正常糖miR-1沉默组（CON＋Lv-miR1组）、高糖空病毒组（HG＋Lv-Vehicle组）、高糖miR-1沉默组（HG＋Lv-miR1组）4组，分别置于含葡萄糖5．5mmol／L（正常糖）或25mmol／L（高糖）的DMEM培养基中，并分别接种含miR-1沉默序列的慢病毒或慢病毒载体，于12h后更换新鲜培养基。接种病毒3d后病毒转染效率达90％时，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-1表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量，蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）及自噬相关蛋白微管相关蛋白l轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）、死骨片重组蛋白1（P62/SQSTM1）、组织蛋白酶D（Cathepsin D）的蛋白表达。结果与CON＋Lv-Vehicle组比较，CON＋Lv-miR1组各指标差异均无统计学意义；HG＋Lv-Vehicle组miR-1表达明显升高（2^△△Ct：1．82±0．17比1．00±0．04），胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量（mg／L：14．55±0．33比7．28±0．22，157．50±13．22比61．25±8．54）及表达量（灰度值：432．35±56．00比100．00±15．00，320．35±47．00比100．00±15．00）明显升高，MMP-2、MMP-9、LC3B-Ⅱ、P62/SQSTM1蛋白表达明显增高（灰度值：249．0±21．0比100．0±15．0，142．3±20．0比100．0±16．0，178±19比100±14，378．3±20．0比100．0±15．0），而CathepsinD表达明显降低（灰度值：60±14比100±10），差异均有统计学意义（均P〈0．01）。与HG＋Lv-Vehicle组比较，HG＋Lv-miR1组miR-1表达明显降低（2^△△Ct：1．21±0．10比1．82±0．17），胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的分泌量（mg／L：10．68±0．54比14．55±0．33，87．25±13．55比157�
- 王安孙波仇佳乔世刚王琛
- 关键词：高糖损伤心肌成纤维细胞纤维化微小RNA
- 硫化氢后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与自噬潮的相关性研究被引量：5
- 2016年
- 目的观察硫化氢后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用及其与自噬潮的关系。方法将60只成年雄性SD大鼠分为五组:假手术组:仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不结扎阻断血流;I/R组:于冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注4 h;氯喹(CQ)组:于术前1 h腹腔注射10 mg/kg,其余操作同I/R组;硫氢化钠(Na HS)组:于开放左冠状动脉再灌注即刻1 min内静脉注射硫氢化钠0.05 mg/kg,再灌注4 h;CQ+Na HS组:于术前1 h腹腔注射CQ,其余操作同Na HS组;每组12只。连续监测并记录大鼠平衡期15 min、缺血期15 min、再灌注1、2、4 h时大鼠心率、平均动脉压和心率-收缩压乘积(RPP)。再灌注4 h结束后分批处死大鼠并取心脏测定心肌梗死范围,并采用Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Cathepsin B、Beclin-1、P62表达水平。结果各组大鼠在各时间点心率的比较,差异无统计学意义(F=0.854,P=0.512),而平均动脉压及RPP的比较差异均有统计学意义(F=5.182,P=0.007;F=5.082,P=0.008)。且再灌注期2、4 h时,Na HS组平均动脉压为(87±8)mm Hg、(91±10)mm Hg,RPP为(35.4±4.6)次·mm Hg·103/min、(36.2±5.8)次·mm Hg·103/min,Na HS组明显高于I/R组[平均动脉压分别为(72±10)mm Hg、(63±6)mm Hg,RPP分别为(28.7±5.8)次·mm Hg·103/min、(26.8±3.8)次·mm Hg·103/min,P均<0.05]。各组灌注期4 h时,心肌梗死范围区域所占比例及LC3、Cathepsin B、Beclin-1、P62比较差异均有统计学意义(F=96.907、71.164、43.594、57.180、35.967,P均<0.05),且Na HS组上述各指标均明显低于I/R组、CQ组、CQ+Na HS组(P均<0.05)。结论硫化氢可能通过修复自噬潮对2型糖尿病大鼠心肌I/R损伤发挥保护作用。
- 赵雯洁王琛孙波单海华王安乔世刚
- 关键词：硫化氢缺血后处理心肌再灌注损伤自噬
- 自噬小体清除在七氟烷预处理延迟性心肌保护中的作用被引量：2
- 2017年
- 目的探讨自噬小体清除水平在七氟烷预处理产生延迟性心肌保护中的作用。方法成年雄性SD大鼠45只，体质量270-350g，采用随机数字表法，随机分为3组（n=15）：假手术组（sham组）；缺血一再灌注组（CON组）；七氟烷延迟性组（SWOP组）。采用结扎左冠状动脉前降支30min后再灌注2h的方法制备在体大鼠心肌缺血-再灌注模型，于再灌注2h时取心肌组织，TYC染色法测定心肌梗死范围；TUNEL试剂盒检测细胞凋亡；透射电镜观察心肌自噬小体变化；Western blot法检测自噬溶酶体相关蛋白LC3-Ⅱ、Cathepsin B、自噬性底物p62以及cleavedcaspase-3的表达水平。采用SPSS15．0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析。结果与sham组比较，CON组的心肌凋亡指数增高（P=0．004）、自噬小体增多，LC3-Ⅱ（P=0．009）、Cathepsin B（JP=0．032）、p62（P=0．007）和caspase-3（P=0。006）水平明显升高；与CON组比较，SWOP组的梗死范围（P=0．027）、凋亡指数（P=0．042）、自噬小体减少，LC3-Ⅱ（P=0．033）、p62（P=0．041）和cleaved caspase-3（P=0．037）水平降低，Cathepsin B（P=0．046）水平升高。结论七氟烷预处理对在体大鼠心肌缺血-再灌注产生延迟性保护作用可能与增强心肌自噬小体清除有关。
- 乔世刚孙波单海华王安仇佳王琛
- 关键词：麻醉药心肌再灌注损伤自噬细胞凋亡溶酶体
- 微小RNA-1介导的AMPK通路在高糖培养大鼠心肌成纤维细胞致纤维化中的作用被引量：11
- 2018年
- 目的探讨微小RNA-1（miR-1）在高糖培养所致大鼠心肌纤维化中的作用途径。方法取1～3日龄SD大鼠心尖组织培养原代心肌成纤维细胞，传代至3～4代细胞后被随机分为正常糖空病毒组（CON＋ Lv-Vehicle组）、正常糖miR-1沉默组（CON＋Lv-miR1组）、高糖空病毒组（HG＋Lv-Vehicle组）、高糖miR-1沉默组（HG＋Lv-miR1组）、高糖空病毒抑制剂组（HG＋Lv-Vehicle＋CC组）、高糖miR-1沉默抑制剂组（HG＋Lv-miR1＋CC组）。将细胞分别置于葡萄糖5.5 mmol/L（正常糖）和25.0 mmol/L（高糖）的DMEM培养基中，接种含miR-1沉默序列的慢病毒载体或慢病毒；抑制剂组于取样前12 h加入20 μmol/L腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C。采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）、自噬流相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）、死骨片重组蛋白1（p62/SQSTM1）的蛋白表达。结果体外培养大鼠心肌成纤维细胞的纯度达97%。与CON＋Lv-Vehicle组比较，CON＋Lv-miR1组p-AMPK表达无明显变化，HG＋Lv-Vehicle组p-AMPK表达明显降低（p-AMPK/t-AMPK：44.72±3.29比100.00±7.77，P〈0.01）；HG＋Lv-miR1组p-AMPK表达较HG＋Lv-Vehicle组明显增高（p-AMPK/t-AMPK：60.52±5.16比44.72±3.29，P〈0.05）。与HG＋Lv-Vehicle组比较，HG＋Lv-miR1组胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ和p62/SQSTM1表达均明显降低；给予AMPK抑制剂后胶原蛋白、MMP、LC3B-Ⅱ、p62/SQSTM1表达均明显增高（HG＋Lv-Vehicle＋CC组与HG＋Lv-Vehicle组比较：胶原蛋白Ⅰ/β-actin为158.74±13.21比100.00±7.64，胶原蛋白Ⅲ/β-actin为177.38±17.31比100.00±5.18，MMP-2/β-actin为130.09±14.31比100.00±10.47，MMP-9/β-actin为215.54±20.92比100.00±11.28，LC3B-Ⅱ/β-actin为159.34±13.83比100.00±6.44，p62/SQSTM1/β-actin为201.01±24.02比100.00±8.62；HG＋Lv-miR1＋CC组与HG＋Lv-miR1组比较：胶原
- 仇佳王安许映娜乔世刚安建中李华王琛
- 关键词：腺苷酸活化蛋白激酶心肌成纤维细胞纤维化
