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抗黄曲霉毒素B_1纳米抗体的原核表达、纯化及活性分析被引量：4: 2016年; 表达和纯化抗黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）纳米抗体（G8）,并分析纳米抗体的热稳定性及生物学活性,建立基于纳米抗体检测AFB1的ELISA方法。将编码抗AFB1纳米抗体的基因亚克隆至原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21（Rosetta,DE3）,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析蛋白表达情况;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析纳米抗体的热稳定性、有机溶剂耐受性、盐离子耐受性及耐酸碱性。结果显示,在大肠杆菌中成功表达可溶性的抗AFB1纳米抗体,表达量为80 mg/L,在25~65℃之间,抗体具有良好的热稳定性。在5%甲醇、p H7.4、10 mmol/L PBS条件下,建立了G8-ELISA检测AFB1的方法,该方法的半抑制浓度（IC50）为4.61 ng/m L,线性范围为0.95~42.45 ng/m L。; 曹冬梅许杨涂追付金衡李燕萍王显显; 关键词：黄曲霉毒素B1 原核表达酶联免疫吸附法

抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇纳米抗体随机突变与筛选被引量：2: 2017年; 采用易错聚合酶链式反应技术,对来源于天然纳米抗体文库的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)纳米抗体进行随机突变,通过优化和比较突变条件,构建了突变分布均匀的突变文库。噬菌体展示技术对突变文库进行了6轮筛选,获得了8种突变序列,其检测信号为野生型2.1倍。多序列比对及三维结构建模分析表明,突变序列的突变位点集中于互补决定区与框架区连接的区域,并且部分序列出现了可以形成二硫键的氨基酸残基。研究结果为抗DON纳米抗体进一步的深度突变和改造提供了线索,同时可为其他抗小分子纳米抗体的改造提供借鉴。; 吴红静曹冬梅许杨付金衡涂追; 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇噬菌体展示

抗黄曲霉毒素B1纳米抗体的免疫学性能分析及其体外定点改造: 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是—种主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢产物，广泛存在于花生、玉米、小麦等农作物中，通过食品和饲料途径使人畜中毒。AFB1具有强致癌、致畸、致毒性等作用，同时还可降低...; 曹冬梅; 关键词：黄曲霉毒素B1 免疫检测

基于纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的一步酶联免疫吸附分析法检测黄曲霉毒素B_1被引量：24: 2016年; 从噬菌体展示的抗黄曲霉毒素B1(AFB_1)纳米抗体文库中,通过四轮亲和淘选,得到抗AFB_1纳米抗体G8。将编码纳米抗体G8的基因与碱性磷酸酶(AP)基因融合,构建了重组融合表达载体pET25b(+)-G8-AP,将其转化大肠杆菌BL21(Rosetta,DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合基因表达。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白G8-AP为可溶性表达,Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法测得纯化后的G8-AP的碱性磷酸酶比活力为(364.5±8.3)U/mg。ELISA检测结果表明,G8-AP具有特异识别AFB1的活性,与其它真菌毒素(AFB_2、AFG_1、AFG_2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B_1)无交叉反应。基于G8-AP建立了检测AFB1的一步ELISA法。在优化的条件下,即甲醇浓度20%、盐离子浓度20 mmol/L、pH 7.4条件下,方法的半数抑制浓度(IC_(50))为19.8 ng/mL,线性范围为4.3~92 ng/mL,检出限为2.6 ng/mL。对玉米和小麦样品加标回收实验结果表明,基质对本方法的干扰不明显,可用于实际样品检测。; 曹冬梅许杨涂追李燕萍熊亮付金衡; 关键词：碱性磷酸酶酶联免疫吸附分析

基于抗黄曲霉毒素单域重链抗体的免疫亲和吸附材料: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于单域重链抗体的免疫亲和吸附材料，特别是针对黄曲霉毒素的免疫亲和吸附材料。包括载体，搭载在载体上的配基，其特征在于该材料以特异性识别黄曲霉毒素的单域重链抗体作为配基，所述特异性识别黄曲霉...; 许杨熊勇华何庆华曹冬梅; 文献传递

特异识别黄曲霉毒素的单域重链抗体: 本发明属于生物技术领域，涉及单域重链抗体技术，具体为针对黄曲霉毒素的单域重链抗体，其具有SEQ？ID？NO.1所示的氨基酸序列。该抗体具有耐酸碱、耐高温以及易于生产等特性，对于黄曲霉毒素的低成本、可重复使用的免疫学检测方...; 涂追许杨熊勇华何庆华曹冬梅; 文献传递

抗黄曲霉毒素的单域重链抗体: 本发明属于生物技术领域，涉及单域重链抗体技术，具体为针对黄曲霉毒素的单域重链抗体，其具有SEQ？ID？NO.：1所示的氨基酸序列。该抗体具有耐酸碱、耐高温以及易于生产等特性，对于黄曲霉毒素的低成本、可重复使用的免疫学检测...; 涂追许杨熊勇华何庆华曹冬梅; 文献传递

基于特异识别黄曲霉毒素单域重链抗体的亲和吸附材料: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于单域重链抗体的免疫亲和吸附材料，特别是针对黄曲霉毒素的免疫亲和吸附材料。包括载体，搭载在载体上的配基，其特征在于该材料以特异性识别黄曲霉毒素的单域重链抗体作为配基，所述特异性识别黄曲霉...; 涂追许杨熊勇华何庆华曹冬梅; 文献传递

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曹冬梅