张晨
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 克里米亚-刚果出血热病毒可视化逆转录环介导等温扩增快速检测法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的 建立克里米亚刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV）的可视化逆转录环介导等温扩增（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RTLAMP）快速检测法.方法 体外合成CCHFV的S基因,构建重组质粒,体外转录为模板RNA,在线设计3组LAMP引物,使用实时浊度仪筛选出最佳引物,以羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）作为指示剂,建立可视化RT-LAMP反应体系.结果 实时浊度检测结果显示合成的3组LAMP引物中第1组引物的扩增效率最高,峰值出现于20 min.添加环引物后,扩增效率进一步提高,13 min即可达到峰值.利用最佳引物建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法最低检测限浓度为10拷贝/μl,检出时间为30 min,较巢式RT-PCR法和实时定量RT-PCR法分别高1-3个数量级.该方法稳定性好,不会与症状相近的病原体如肾综合征出血热汉坦病毒（汉滩型和汉城型）、马尔堡病毒、新型布尼亚病毒、埃博拉病毒（GP蛋白和VP蛋白）产生交叉反应.结论 建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法,灵敏度好、特异度高、快速廉价、操作简单,无需开盖即可直接观察结果,适用于条件有限的基层单位和偏远地区.但仍需临床样本进行进一步验证.
- 韩一芳钟璟皓张晨张琪吕恒胡丹张锦海王长军
- 关键词：克里米亚-刚果出血热
- 马尔堡病毒LAMP可视化快速检测方法的建立被引量：4
- 2016年
- 目的建立马尔堡病毒的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）可视化快速检测方法。方法人工合成马尔堡病毒保守的核蛋白（Nucleoprotein,NP）编码基因作为阳性标准品,设计LAMP扩增引物,以HNB作为可视化指示剂,通过LAMP浊度仪测定方法的灵敏度和特异性。并与常规PCR、实时荧光定量PCR作比较。结果建立的LAMP方法的灵敏度为10^0拷贝/μl,高于常规PCR及实时荧光定量PCR的灵敏度10^3拷贝/μl和10^2拷贝/μl,方法的特异性好,仅马尔堡病毒有扩增曲线且HNB指示剂颜色发生阳性改变,其他病毒扩增均为阴性。体系的扩增效率较高,试验仅需30min。结论建立的HNB-LAMP检测方法简便、快速、灵敏、特异,适用于马尔堡病毒的可视化快速检测。
- 钟璟皓韩一芳张晨胡丹王依潘秀珍王长军
- 关键词：马尔堡病毒环介导等温扩增可视化
