黄玉霞
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
- 供职机构：江苏科技大学生物与环境工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕抗菌肽cecropin A的表达特征及其体内外抑菌研究被引量：3
- 2016年
- 家蚕抗菌肤cecropin A(BmCecA)是家蚕体液免疫中产生的一种重要的抗菌肤。本研究利用RT-PCR技术克隆出BmCecA基因的开放阅读框(ORF),该ORF编码22个氨基酸的信号肤和37个氨基酸的成熟肤,通过蛋白结构分析该成熟肤形成经典的双亲α螺旋。实时荧光定量PCR表明,BmCecA在5龄家蚕的体壁、马氏管、中肠、丝腺、血淋巴和脂肪体中均有表达在脂肪体中表达量最高,其次是血淋巴。通过固相合成法合成BmCecA成熟肤用质谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其分子量约为4.05 kD,高效液相色谱检测其纯度为89.14%。用合成多肤分别对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomouas aerugiuosa)、革兰氏阳性菌球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)做体外抑菌实验,发现BmCecA对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有明显的抑菌作用。首次用BmCecA做家蚕的体内抑菌实验,结果显示注射BmCecA的家蚕存活率显著高于对照组相对于对照组,致死中时间(LT_(50))分别延长了17.85%(大肠杆菌)、37.31%(铜绿假单胞菌)、21.92%(球形节杆菌)、49.45%(枯草芽孢杆菌)差异显著。凝胶迁移实验结果说明BmCecA可能在破坏细菌细胞膜之后作用于基因组DNA和RNA,从而导致细菌的快速死亡。本研究结果有利于从分子水平上深入理解家蚕乃至其它昆虫抵御细菌侵染的防御机理,也为家蚕的抗菌育种提供理论依据。
- 吕丁丁耿涛侯成香黄玉霞覃光星郭锡杰
- 关键词：家蚕CECROPIN抗菌活性细菌
- GSTs和GSH-Px在家蚕幼虫抵御球胞白僵菌感染过程中的作用被引量：3
- 2016年
- 本实验研究家蚕幼虫解毒和抗氧化防御体系在抗真菌感染过程尤其是真菌毒素解毒过程中的作用。检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌以及注射球孢白僵菌毒素之后血淋巴、中肠和脂肪体中谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活力、谷胱甘肽还原酶（GR）活力和谷胱甘肽（GSH）含量的变化及GST、GSH-Px基因表达水平的变化，同时还检测了注射GSH和毒素对家蚕幼虫感染球孢白僵菌后存活率的影响。结果表明球孢白僵菌感染家蚕幼虫后脂肪体、中肠、血淋巴中的GSTs、GR、GSH-Px酶活力性显著提高，各组织中BraGSTd1、BmG5Ts1、BmGSTo1和BmGSH-Px的表达量在感染后期（54～72h）也显著上调表达，说明家蚕幼虫可以通过增加酶活力并上调解毒和抗氧化因子的表达量以增强抗真菌感染能力。毒素注射实验表明家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的解毒作用主要在脂肪体和血淋巴中依赖GSTs、GR和GSH来完成，同时定量实验表明BmGSTs1和BmGSTo1在注射毒素24h后显著上调表达，说明它们可能是家蚕幼虫对球孢白僵菌毒素的主要解毒基因。存活率实验结果表明GSH能够缓解球孢白僵菌毒素对蚕体的损害，延长家蚕幼虫的半数致死时间（约6h）。本研究结果表明家蚕幼虫GSTs和GSH-Px构成的解毒和抗氧化防御系统在抗真菌感染过程中起到重要作用，丰富了对家蚕与病原真菌互作机制的认识。
- 耿涛黄玉霞侯成香吕丁丁覃光星郭锡杰
- 关键词：球孢白僵菌解毒作用
- 白僵菌诱导家蚕抗菌肽enbocin1基因的表达特征及产物的抗真菌活性被引量：4
- 2016年
- 家蚕的抗菌肽家族基因enbocin1是蚕体免疫系统相关基因。为解析家蚕对病原真菌感染免疫应答反应的分子机制,采用实时荧光定量PCR检测抗菌肽基因enbocin1在家蚕5龄幼虫感染球孢白僵菌(Beauveria bassiana)后的时空表达模式,结果显示:enbocin1主要在幼虫脂肪体中显著上调表达,而且持续至感染诱导后30 h,感染后8、30 h的表达水平分别上调了约44倍和6倍;在马氏管、体壁中该基因的诱导表达差异不显著,在血淋巴中几乎检测不到该基因的表达。进一步用原核表达系统成功表达并纯化获得了高纯度的重组家蚕抗菌肽enbocin1,体外抑菌试验表明其对白僵菌具有较强的抑菌活性,且重组enbocin1蛋白浓度与抑菌活性之间具有量效关系。用重组enbocin1蛋白制备了效价达1∶30 000的多克隆抗体,可用于进一步深入研究enbocin1的功能及其作用机制。研究结果提示抗菌肽enbocin1在家蚕抵御真菌感染的过程中可能具有重要作用。
- 黄玉霞耿涛侯成香吕丁丁覃光星高坤郭锡杰
- 关键词：家蚕抗菌肽抑菌活性球孢白僵菌
- 抗菌肽Enbocin1基因在家蚕抵御白僵菌感染过程中表达特征及其抗真菌活性
- 白僵菌是家蚕重要的病原真菌，其感染家蚕引起的白僵病，往往对蚕桑业的生产造成巨大损失。目前，包括白僵菌在内的真菌对家蚕的作用机理尚不明确。因此开展家蚕抗菌肽 enbocin1在抵御白僵菌感染过程中的功能研究，可解析家蚕对白...
- 黄玉霞
- 关键词：家蚕白僵菌抗菌肽抗真菌活性病原真菌
- 家蚕感染球孢白僵菌后4种抗菌肽基因的表达分析被引量：1
- 2016年
- 【目的】阐明家蚕（Bombyxmori）抗菌肽对球孢白僵菌感染的应答模式，为揭示家蚕及鳞翅目昆虫抗真菌机制提供参考依据。【方法】利用实时荧光定量PCR检测家蚕被球孢白僵菌感染后抗菌肽基因cecropinA、gloverin2、lebocin1/2和lysozyme的表达情况，比较4种抗菌肽在家蚕脂肪体、血淋巴、马氏管和中肠中不同时间点的表达差异。【结果】经球孢白僵菌诱导后，cecropinA基因在家蚕脂肪体中的最高上调表达倍数为10.2倍，在血淋巴中的最高上调表达倍数为13.2倍，在马氏管中感染初期显著上调表达（P〈0.05，下同），在中肠中感染后期显著上调表达；gloverin2基因在家蚕脂肪体中出现2次上调表达过程，最高上调表达倍数为15.7倍，在血淋巴中感染前期呈上调表达，在马氏管中略呈下调表达，中肠中的gloverin2基因在接种后16-48 h呈显著上调表达，最高上调表达倍数为6.7倍；lebocin1/2基因在家蚕脂肪体和血淋巴中的最高上调表达倍数分别为19.4和22.4倍，在马氏管中仅在接种后16 h呈显著上调表达，在中肠中则是接种后24-48 h呈显著上调表达；lysozyme基因在家蚕脂肪体中显著上调表达，在血淋巴和马氏管中感染初期也呈显著上调表达，但在中肠中的表达无明显规律。【结论】cecropinA、gloverin2、lebocin1/2和lysozyme基因在球孢白僵菌侵染家蚕的过程中均不同程度地被诱导上调表达，尤其在家蚕脂肪体和血淋巴中较明显，由此推测这4种抗菌肽在抵御球孢白僵菌的侵染过程中发挥重要作用。
- 吕丁丁侯成香耿涛黄玉霞覃光星高坤郭锡杰
- 关键词：家蚕球孢白僵菌抗菌肽
