孙霞
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 牛GHR基因与miR-139靶向关系的验证被引量：5
- 2016年
- 旨在构建牛生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)基因3′非翻译区(Untranslated region,UTR)双荧光素酶载体,并确定miR-139与牛GHR基因的靶向关系。本研究采用生物信息学方法预测miR-139与牛GHR基因3′UTR的结合位点;人工合成牛GHR基因3′UTR及突变型片段并克隆至双荧光素酶载体psiCHECK-2上,构建野生型(psiCHECK2-GHR-W 3′UTR)及突变型(psiCHECK2-GHR-M 3′UTR)双荧光素酶报告质粒。将培养的Hela细胞分为4组,分别共转染miR-139mimic或阴性对照和psiCHECK2-GHR-W 3′UTR重组质粒或psiCHECK2-GHR-M 3′UTR重组质粒,然后用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞中荧光素酶活性。之后培养奶牛乳腺上皮细胞,分别设对照组、阴性对照组、miR-139 mimic及miR-139inhibitor组,对阴性对照组、miR-139mimic组及miR-139inhibitor组分别转染阴性对照、miR-139mimic或miR-139inhibitor,利用qPCR(Realtime quantitative PCR)进一步检测各组miR-139及GHR基因的mRNA表达。结果,通过双酶切试验证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒psiCHECK2-GHR-W 3′UTR和psiCHECK2-GHR-M 3′UTR;当野生型重组质粒psiCHECK2-GHR-W 3′UTR和miR-139mimic共转染Hela细胞后,双荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性显著低于其他处理组(P<0.05)。qPCR进一步证实miR-139能显著下调奶牛乳腺上皮细胞中GHR基因mRNA的表达(P<0.05)。本研究成功构建了牛野生型及突变型GHR基因3′UTR双荧光素酶报告质粒;双荧光素酶试验及qPCR证实miR-139与牛GHR基因3′UTR存在靶向关系。
- 金连丰于广璞孙霞李庆章高学军崔英俊
- 关键词：生长激素受体
- 甘氨酰tRNA合成酶对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响被引量：2
- 2016年
- 甘氨酰tRNA合成酶(glycyl-tRNA synthetase,GlyRS)是重要的氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNA synthetases,aaRSs)家族成员。目前,国内外关于GlyRS在奶牛乳腺发育过程中表达及调节的研究鲜有报道。为了揭示GlyRS的表达与奶牛乳腺发育与泌乳之间的关系,本试验应用EdU免疫荧光法、流式细胞术检测GlyRS对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中DNA数目及细胞周期的影响,实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测GlyRS对BMEC中Cyclin D1的表达影响。结果显示,GlyRS过表达时,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均增加;GlyRS抑制后,细胞的DNA合成、处于S期和G2/M期的细胞数、细胞中Cyclin D1的表达均减少。表明GlyRS通过上调Cyclin D1的表达,加快细胞周期转换,增加DNA合成数目,从而促进BMEC增殖。
- 古新宇骆超超敖金霞黄鑫臧艳丽孙霞高学军
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖
- 奶牛乳腺分支模型的建立被引量：1
- 2019年
- 利用从青春期奶牛乳腺中提取的类器官,在Ⅰ型胶原中以镶嵌式进行三维培养,用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,FGF2)处理来建立奶牛乳腺分支模型。结果表明,在Ⅰ型胶原中以镶嵌式培养的青春期奶牛乳腺类器官,在FGF2处理下36 h时镜下即可见分支形态出现;且从36 h开始,FGF2组分支率显著高于对照组,表明奶牛乳腺分支化培养模型成功建立。结论:FGF2能使镶嵌在Ⅰ型胶原中的青春期奶牛乳腺类器官产生分支形态。
- 崔英俊于广璞汤云飞李慧铭边艳杰孙喆刘智宇孙霞
- 关键词：奶牛乳腺
- THRSP在泌乳期高、低乳品质奶牛乳腺组织中的蛋白表达及定位被引量：4
- 2015年
- 采用免疫印迹法和免疫荧光技术对泌乳期高、低乳品质荷斯坦奶牛乳腺组织中的甲状腺激素应答蛋白(Thyroid Hormone Responsive Spot 14 Protein,THRSP)蛋白表达及定位进行研究。结果表明,THRSP在泌乳期高乳品质荷斯坦奶牛乳腺组织中的蛋白表达量显著高于低乳品质荷斯坦奶牛;另外,THRSP在泌乳期奶牛乳腺上皮细胞细胞质中表达。结论:THRSP与泌乳期奶牛乳腺乳成份合成有关。
- 孙霞曲波李庆章高学军崔英俊
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞
