王丽华 作品数:7 被引量:26 H指数:4 供职机构: 潍坊医学院附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省科技发展计划项目 山东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
阿霉素通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性 被引量:1 2018年 目的观察阿霉素(Adriamycin,ADM)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞耐药性的诱导作用并探讨其机制。方法培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞,用不同浓度阿霉素处理细胞24 h后,MTT法检测细胞生长抑制率及细胞对阿霉素的敏感度。免疫荧光染色法检测耐药蛋白ABCG2的表达;免疫印迹法检测Stat3、p-Stat3、转录因子cMyc及耐药蛋白ABCG2的表达水平。结果阿霉素持续刺激4周后,获得的MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显降低,且耐药蛋白ABCG2的表达明显增加;MDA-MB-468/ADM细胞p-Stat3、cMyc及ABCG2的表达量显著增加;MDAMB-468/ADM细胞培养液中加入WP1066后Stat3磷酸化明显抑制,cMyc及ABCG2的表达水平下调,并且MDA-MB-468/ADM细胞对阿霉素的敏感度明显增强(P<0.05)。结论阿霉素可以通过Stat3-cMyc途径诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞产生耐药性。 徐金媛 成丛丛 钟瑾怡 崔镓钰 张宝刚 王丽华 孙秀宁 史立宏关键词:三阴性乳腺癌 阿霉素 耐药性 STAT3 CMYC ABCG2 Twist对EMT调控在循环肿瘤细胞监测与抗癌药物评价中的临床意义 被引量:6 2016年 肿瘤细胞的上皮间质可塑性变化包括上皮-间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)的可逆过程,在循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)形成、转归及肿瘤转移过程中起到重要作用。Twist在人横纹肌肉瘤、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中过表达,肿瘤细胞中Twist与多种信号通路连接,形成复杂的网状环路参与调控CTCs中EMT/MET的发生并促进肿瘤细胞向远处转移。因此,通过监测CTCs中Twist本身以及所调控的上皮-间质表型分子标志物的变化,不仅可以增加肿瘤标志物CTCs的检出率,提供肿瘤临床分期及预后评估的直接证据;而且,对于评估多种抗肿瘤药物的疗效及耐药机制均具有重要的临床意义。 李文卿 丁怡 姜雨 路中 王丽华关键词:TWIST 上皮-间质转化 循环肿瘤细胞 肿瘤标志物 多柔比星通过Stat3-Oct-4/CD44途径诱导三阴性乳腺癌4T1细胞干性的产生 被引量:7 2019年 目的:观察多柔比星对三阴性乳腺癌细胞干性的诱导作用并研究其作用机制。方法:用不同终浓度(0、0.05、0.1和0.5μmol/L)多柔比星培养细胞,观察细胞形态及存活情况,筛选出最适多柔比星浓度(0.1μmol/L)用于后续实验。小鼠乳腺癌4T1细胞和人乳腺癌MDA-MB-468细胞经多柔比星(0.1μmol/L)持续刺激4周后分别命名为4T1-DOX和MDA-MB-468-DOX细胞。通过成球实验观察细胞的干性,免疫荧光检测CD133的表达,流式细胞术检测CD44的表达,Western blot检测Stat3、p-Stat3和Oct-4的表达。结果:成球实验发现4T1-DOX细胞成球能力较4T1细胞显著增强,MDA-MB-468-DOX细胞成球能力较MDA-MB-468细胞也显著增强(P <0.05);免疫荧光结果显示CD133在4T1-DOX细胞的表达比4T1细胞明显增高(P <0.05);流式细胞术结果表明CD44在4T1-DOX中表达较4T1细胞显著增高(P <0.05);Western blot结果显示Oct-4及p-Stat3在4T1-DOX细胞中的蛋白水平增高(P <0.05),而总Stat3的表达量未见显著改变。以上结果表明在0.1μmol/L多柔比星持续诱导下4T1细胞干性特征明显增强。加入Stat3抑制剂WP1066后,CD44、Oct-4和p-Stat3的蛋白水平均下降(P <0.05)。结论:多柔比星通过激活Stat3-Oct-4信号通路,使三阴性乳腺癌细胞成球能力增强,4T1细胞干性标志物CD133及CD44表达增多,诱导乳腺癌细胞干性的产生。因此,Stat3-Oct-4通路可能成为三阴性乳腺癌治疗的新靶标。 钟瑾怡 成丛丛 徐金媛 李雪松 张升 张宝刚 王丽华 史立宏关键词:多柔比星 三阴性乳腺癌 肿瘤干细胞 循环microRNAs的外泌形成机制及其对乳腺癌侵袭和转移的影响 被引量:6 2017年 目前乳腺癌的临床诊疗主要依赖影像学和相对较少的预后/预测指标(如雌激素受体、孕激素受体、HER2等).这些生物标志物主要是基于原发肿瘤病灶的生物学检测,可用于转移或复发的检测指标很少,尤其是在切除肿瘤原发灶后,复发监测很困难.循环cell-free microRNAs(circulating cf-miRNAs,或简称circulating miRNAs)的发现为改变现有乳腺癌临床诊疗模式提供了可能.Cell-free miRNA通过外泌体、微囊或转运蛋白的主动外泌机制,可能在循环miRNA的形成中起着重要作用.Cell-free miRNA特别是circulating miRNA不仅自身可以作为信号分子影响肿瘤细胞和组织微环境,而且还可以与其他信号通路发生交互通讯来调控肿瘤部位新生血管的形成和肿瘤细胞表型的上皮-间质转换,影响乳腺癌的侵袭和转移.本文综述了循环miRNA的特征与分泌机制,特别是乳腺癌相关的循环miRNA参与作为一种液体活检生物标志物在乳腺癌诊断、预后评价和疗效评估的临床意义. 万晓庆 王学健 王艺斐 姜雨 路中 史立宏 丁怡 王丽华关键词:MICRORNA CELL-FREE MICRORNAS 循环MICRORNA 乳腺癌 一种易于循环肿瘤细胞研究的4T1-G乳腺癌稳定细胞株的构建 被引量:1 2018年 目的构建一种易于研究乳腺癌循环肿瘤细胞(CTCs)过表达绿色荧光蛋白GFP的4T1细胞株。方法通过慢病毒感染,使小鼠三阴性恶性乳腺癌4T1细胞稳定过表达GFP,构建4T1细胞株(4T1-G);将该细胞接种于BALB/c小鼠乳腺脂肪垫内,制作小鼠4T1-G乳腺癌原位移植荷瘤模型,应用免疫磁珠分选结合GFP荧光方法检测动物模型外周血中的循环4T1-G细胞。结果经慢病毒感染过表达GFP的4T1-G细胞其迁移与侵袭能力及上皮间质转化(EMT)表型标志物的表达与亲本4T1细胞无显著性差异。4T1-G细胞接种BALB/c小鼠后,在接种部位观察到肿瘤生长,通过免疫磁珠分选结合GFP荧光成功分选小鼠乳腺癌模型外周血中的循环4T1-G细胞。结论 4T1-G乳腺癌GFP稳定表达细胞株不仅其荧光特性易于CTCs的确认,而且保持亲本细胞的EMT表型和侵袭特性,因此,4T1-G乳腺癌GFP稳定表达细胞株的构建为开展CTCs及肿瘤转移的整体动物研究提供一个良好的模型。 刘淑荣 丁怡 万晓庆 成丛丛 王艺斐 史立宏 路中 王丽华 王丽华关键词:乳腺肿瘤 绿色荧光蛋白 循环肿瘤细胞 肿瘤转移 STAT3对EMT的调节和对循环肿瘤细胞与肿瘤侵袭及转移的影响 被引量:6 2016年 信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)参与了机体许多生理和病理过程.近年来发现,STAT3尽管不是上皮-间充质表型转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的管家转录因子,但是却参与EMT相关基因的表达,影响肿瘤细胞的表型可塑性,从而参与循环肿瘤细胞(circulating tumor cells)的形成及表型特征的变化,与肿瘤的转移、侵袭密切相关.一方面上游信号可以激活STAT3,磷酸化STAT3可以入核绑定特定EMT管家转录因子(Twist、Snail、Slug等)启动子上的特定片段,从而调节肿瘤细胞中的EMT程序启动和析解.另一方面,当STAT3作为一种分子适配器(adaptor)而非转录因子作用时,又可抑制EMT.因此,对STAT3与EMT相互作用及其对循环肿瘤细胞影响的认识,将有助于开拓肿瘤转移治疗的新思路. 姜雨 丁怡 李文卿 路中 张建 杨小毅 王丽华关键词:STAT3 EMT 恶性肿瘤 信号通路 循环肿瘤细胞 乳腺癌肿瘤标志物血浆cell-free DNA含量的Sybr Green荧光定量分析 2019年 目的建立一种基于Sybr Green染色的cfDNA荧光定量法定量分析血浆中肿瘤液体标记物cfDNA的含量,并评估在临床乳腺癌患者和动物模型中的应用价值。方法从血浆中提取的cfDNA加入Sybr Green染料读取荧光值对其定量,同时应用qPCR定量检测cfDNA中管家基因GAPDH与之对比,并在从4T1乳腺癌自发转移性小鼠动物模型和临床乳腺癌患者的血液样品中进一步验证。结果 Sybr Green荧光染料法测得的cfDNA含量与由qPCR实验所获得的结果呈一致性。临床样本和动物模型均显示乳腺癌组的血浆cfDNA含量明显高于健康对照组。且在4T1乳腺癌自发转移性小鼠动物模型中发现其血浆cfDNA浓度与乳腺癌瘤重之间呈正线性相关。结论基于Sybr Green染色的cfDNA荧光定量法是一种简单、稳定、可靠和敏感的分析方法,不仅可用于定量分析临床乳腺癌患者和动物模型中血浆肿瘤液体标记物cfDNA的含量,而且cfDNA定量分析还可以作为反映肿瘤负荷的有效指标。 王艺斐 王学健 路中 史立宏 王丽华 王丽华关键词:乳腺癌 SYBR 定量PCR