陈炯
- 作品数：11 被引量：13H指数：2
- 供职机构：河南科技大学法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律生物学更多>>
- 人载脂蛋白6特异性核酸适配体的筛选与鉴定被引量：1
- 2021年
- 建立一种简单、高效的从混合斑中鉴定和分离精子的方法是法医学急需解决的难题之一。针对精细胞膜表面特定蛋白质开发的核酸适配体系统,可用于混合斑中精子的分离纯化。人载脂蛋白6(hLCN6)是一种附睾分泌蛋白质,它能结合到精子的头部和尾部,与精子成熟有关。利用指数富集配基的系统进化技术,以hLCN6蛋白为靶标,从96 nt单链DNA随机文库中筛选出与hLCN6高亲和力和特异性结合的适配体。经15轮正向筛选和3轮反向筛选。通过测序分析,采用酶联寡核苷酸吸附实验、斑点印迹和细胞免疫荧光染色等方法检测,获得的核酸适配体H2可特异性识别并结合hLCN6蛋白。hLCN6解离常数(Kd)为(3.21±0.75)nmol/L,且适配体H2在体外表现出与人精子较高的亲和力与特异性。这为依据核酸-蛋白质相互作用分离混合斑中的精细胞奠定了理论基础,提供了新思路。
- 陈炯朱伟豪赵越
- 关键词：适配体混合斑精子
- 一种带紫光灯的负压吸附式凝胶切割器
- 一种带紫光灯的负压吸附式凝胶切割器，包括底座、设置在底座内的紫光灯、设置在底座上的支撑杆和切割器，支撑杆的上部和下部分别设置有夹具和载物台，切割器通过夹具固定在载物台上方，载物台的中间位置设置有贯通的透光区，以使底座内紫...
- 李亚琴赵贵森戚恒亮陈炯艾红伟詹飞
- 文献传递
- 唾液菌群的直接PCR扩增-高分辨率熔解曲线分析及其法医学应用
- 2022年
- 目的 建立一种基于直接PCR(direct PCR,dPCR)扩增和高分辨率熔解(high resolution melting,HRM)曲线分析的唾液菌群快速检测技术,评估其法医学应用价值。方法 离心收集唾液中的细菌后重悬于Tris-EDTA(TE)缓冲液,直接作为模板用于16S rDNA V4区的扩增和HRM曲线分析,即dPCR-HRM,计算样本HRM图谱相对于参考图谱的判型置信度(genotype confidence percentage,GCP)。以传统的试剂盒(kit)提取模板DNA后再行PCR-HRM(即kPCR-HRM)为参考,验证dPCR-HRM的可行性。用dPCR-HRM法分析梯度稀释模板、群体样本和模拟唾液斑样本,评估其灵敏度、分型能力和检材适应性。结果 dPCR-HRM法可在90 min内得到唾液菌群的HRM图谱,与kPCR-HRM法之间的GCP>95.85%。应用dPCR-HRM法,一般个体0.29 nL的唾液即可测得菌群HRM型。61例唾液样本可分为10种型,8 h之内的唾液斑与新鲜唾液分型相同(GCP>90.83%)。结论 dPCR-HRM技术可用于唾液菌群的快速分型,且具有成本低、操作简单等优点。
- 杨瑞陈炯赵贵森
- 关键词：法医遗传学聚合酶链反应唾液菌群结构
- 血色原微量分光法血痕确证试验被引量：1
- 2016年
- 目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的灵敏度,用常见疑似血液/血斑,以及不同保存时间、不同基质的血斑测定方法的特异性和检材适应能力。结果用血色原微量分光法,仅血液(斑)具有415nm、525nm和555nm三个吸收峰组成的特异光谱,与常见疑似血液/斑没有交叉。反应2min,上样2.5μL,稀释1000倍的人血可稳定获得三峰光谱。通过延长浸洗时间、设置基质对照,10年陈旧血纱、有色布上的血斑等均可有效确证。三个吸收峰的高度与检液的血含量呈正相关,且525nm和555nm的吸光度变化趋势一致(y=0.523 2x+0.027 4,R2=0.997 1)。结论血色原微量分光法灵敏度高、特异性强,快速简便,可纳入DNA检验流程之中,在实际检案中有较好的应用前景。替代传统结晶法用于教学,更符合当前学生技能和意识的培养要求。
- 李亚琴赵贵森陈炯詹飞
- 关键词：法医物证学分光光度法确证试验
- 人外周血基因组DNA提取的影响因素及方案选择被引量：2
- 2016年
- 目的人外周血是基因组DNA样品的主要来源之一,了解外周血基因组DNA提取的研究进展,有助于法医检案中选择并优化DNA提取方案。方法回顾外周血基因组DNA提取的主要环节和影响因素,综述文献进行比较研究。结果白细胞裂解是决定DNA提取产量和质量的关键环节,去污剂是各种白细胞裂解液的核心组分。裂解后DNA分离纯化是影响DNA提取的另一重要环节,目前固相介质分离纯化法应用较广。实验室手工方案在一般实验室处理小批量样品时仍具有独特优势,试剂盒方案目前应用较为广泛,自动化提取系统尤其适用于大批量样品处理。然而,任何方案均不能同时满足DNA产量与质量、操作时间、安全性、费用等指标的同时最优化的要求。结论人外周血基因组DNA提取方案众多,需综合考虑DNA提取效能、操作时间、安全性、费用、设备和试剂易得性等多种因素,选择适宜的DNA提取方案。
- 张振杨文涛陈炯冯巍
- 关键词：外周血基因组DNADNA提取
- 一种负压吸附式凝胶切割器
- 一种负压吸附式凝胶切割器，包括一端具有气囊的套筒和滑动设置在套筒内的刀轴，刀轴的一端突出于套筒并位于气囊内，另一端也突出于套筒并与成型刀头连接，刀轴内设置有连通气囊和成型刀头的导气孔，刀轴通过一复位弹簧连接在套筒内，以使...
- 李亚琴赵贵森戚恒亮陈炯艾红伟詹飞
- 文献传递
- 样品成份对“咖啡环”法DNA检测的影响
- 2018年
- 目的调查样品中常见成份对"咖啡环"法DNA检测的影响。方法将含有不同浓度SDS、Na Cl等的DNA-EB滴加到载玻片上,室温自然蒸发,用凝胶成像系统观察荧光沉积形貌(Deposition Pattern,DP)、计算积分光密度(Integrated Optical Density,IOD),分析量效关系。结果低浓度非DNA成份存在时,DP仍以环状沉积为主,但有年轮环、放射纹等成份特异性细微差异。浓度高时,DP因成份而异,可为环+散在光点型(Na Cl)、中央光斑+弱小环型(SDS)、同心或年轮状多环型(Triton X-100)、环+斑点型(H^+)等。非DNA成份对DNA含量估计有不同程度影响,但估计值多数在0.5~2倍以内。结论样品成份对DNA的DP和IOD均有影响,但不影响DNA含量的粗略估计,且能提供样品纯度和残留物信息。
- 詹飞赵贵森李亚琴陈炯郭琬
- 关键词：法医物证学NACLPH
- hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定被引量：6
- 2019年
- hLCN6 (Human lipocalin 6)是附睾特异性分泌蛋白,它能与精子结合,对精子的成熟发挥着重要作用。为了探究应用抗hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠技术分离混合细胞中精子的可行性,建立混合斑中精子细胞分离的新方法,制备了不同比例的精子-上皮细胞混合悬液及混合斑样本,以生物素标记的hLCN6单克隆抗体孵育样品,再用亲和素包被的免疫磁珠捕获分离精子细胞,提取精子DNA进行PCR-STR (Short tandem repeat)分型,同时以差异裂解法提取精子,比较两者的差异。经ELISA检测,hLCN6单克隆抗体与抗原的亲和力解离常数(Kd)为3.47×10~–9 mol/L。免疫印迹和免疫荧光结果显示,hLCN6在精子中可检测到,主要定位于精子头部的顶体后区域,但不能在上皮细胞中检测到。hLCN6抗体偶联的免疫磁珠复合物能够实现精子细胞的捕获和分离,显微镜观察显示免疫磁珠能够与精子头部特异性结合。对精子个数为10~3/mL的混合悬液,STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU>200)为90%。当精子数量≥10~4/mL时,分型成功率达10~0%;对精子数分别为10~3/mL、10~4/mL、10~5/mL的混合斑STR分型成功率分别为40%、90%和10~0%。综上,hLCN6抗体偶联免疫磁珠法可以有效分离混合细胞中的精子,分型成功率高于传统的差异裂解法。该方法简单高效,可作为性侵案件中法医混合斑检验的有效补充手段。
- 陈炯冯巍詹飞
- 关键词：免疫磁珠混合斑PCR-STR
- 一种带紫光灯的旋转式负压吸附凝胶切割器
- 一种带紫光灯的旋转式负压吸附凝胶切割器，包括底座、设置在底座内的紫光灯、设置在底座上的支撑杆和切割器，切割器通过夹具转动固定在载物台上方，载物台的中间位置设置有透光区，透光区的两侧分别设置有成型刀头放置区、凝胶块放置区和...
- 李亚琴赵贵森戚恒亮陈炯艾红伟詹飞
- 文献传递
- 常备试剂法提取人外周血DNA被引量：1
- 2016年
- 目的探讨使用一种常备试剂提取外周血DNA,而无需PK、毒性有机溶剂或特殊缓冲液。方法分别使用常备试剂法、试剂型kit法和柱式型kit法提取外周血DNA,进而比较3种方法的DNA产量和质量。结果使用常备试剂法,提取200μL人外周血的DNA量为（5.77±3.49）μg,低于试剂型kit法（P〈0.05）,但与柱式型kit法（P=0.10）差异无统计学意义。常备试剂法提取的DNA样品,A230/A260为0.49±0.05,A260/A280为1.98±0.10,片段大于15 kb,Alu I、Bam HI-HF酶切完全,PCR扩增稳定、高效,DNA质量与两种kit法差异无统计学意义。常备试剂法的每样品耗费低,操作时间约30-40 min。结论常备试剂法能够保证外周血DNA产量和质量,试剂方便易得,操作快速、安全,且费用低廉,可作为一般实验室备选方案。
- 刘青青孙丹丹冯巍陈炯
- 关键词：外周血基因组DNADNA提取
