丁骏
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
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- 树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)在抗肿瘤免疫中的研究进展
- 2023年
- 树突状细胞相关C型凝集素1(dectin-1)受体是真菌细胞壁上β葡聚糖的主要模式识别受体。Dectin-1广泛表达于树突状细胞(DC)、巨噬细胞及中性粒细胞等髓样细胞,在与内、外源性配体结合后,dectin-1能够诱导自身胞内信号传导触发一系列的细胞免疫反应,参与机体抗感染及抗肿瘤等过程。Dectin-1与其不同配体之间的相互作用,触发了不同的信号活化途径和细胞功能;与β葡聚糖的识别促进DC的成熟和向T细胞递呈抗原的能力,诱导细胞毒性T淋巴细胞的增殖,激活机体的特异性免疫应答进而发挥抗肿瘤作用。我们主要总结了dectin-1分子的结构、信号通路及其在抗肿瘤免疫中的研究进展。
- 段雪含丁骏戚春建
- 关键词：DECTIN-1抗肿瘤免疫
- lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠树突状细胞成熟中的作用
- 2021年
- 目的:研究lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟和免疫应答中的作用及可能机制。方法:通过转录组测序和实时定量PCR,研究经β-葡聚糖诱导成熟的DC中差异表达的lncRNA;转染小干扰RNA(siRNA)敲低lncRNA12753的表达;流式细胞术检测DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)及共刺激分子CD86、CD80和CD40等的表达;ELISA检测DC培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6和IL-10等的水平;OT-Ⅱ转基因小鼠T细胞共培养检测DC诱导抗原特异性CD4^(+)T细胞增殖和分化的方向。结果:经β-葡聚糖诱导成熟后,DC中lncRNA12753水平显著上调;敲低lncRNA12753表达后,成熟DC表面MHCⅡ分子表达下调,同时降低Th1细胞因子IL-12的分泌,而增加Th2细胞因子IL-10的产生。进一步研究发现下调lncRNA12753会制约DC诱导OVA特异性CD4+T细胞的增殖和IFN-γ+Th1细胞分化的能力。String蛋白相互作用网络分析结果表明,lncRNA12753调节DC免疫功能可能是通过IRF7来实现的。结论:lncRNA12753参与了β-葡聚糖诱导的DC成熟,通过调节DC抗原提呈分子MHCⅡ的表达和Th1细胞极化细胞因子的分泌影响其诱导CD4+T细胞的增殖和分化。
- 苏明明沈凯丁骏宁永玲戚春建
- 关键词：Β-葡聚糖树突状细胞T细胞分化
- 三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用被引量：1
- 2023年
- 目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激发后, 荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs, pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后, 流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达, ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8^(+)和CD4^(+)T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA), 与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8^(+)或CD4^(+)T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF), 将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs, 经LPS激发后, 流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。结果经LPS激发后, BMDCs中Trim23表达水平显著下调;过表达Trim23后, 其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降;与T细胞共培养结果显示, 过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4^(+)T细胞增殖分化以及诱导CD8^(+)T细胞增殖的能力;Western blot结果显示, 过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较, RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。结论过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能, 其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域, 本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细
- 丁骏段雪含谢叶文潘洁夏蕾宁永玲何树燕戚春建
- 关键词：树突状细胞功能域免疫功能
- β葡聚糖抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成并促进其迁移能力
- 2018年
- 目的研究β葡聚糖对巨噬细胞源性泡沫细胞的形成和迁移能力的影响。方法培养RAW264. 7巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其为泡沫细胞。油红O染色观察对照组、ox-LDL组和β葡聚糖干预组(β葡聚糖+ox-LDL孵育)泡沫细胞的形成;实时定量PCR检测各组细胞炎症因子肿瘤坏死因子α和转化生长因子β及白细胞介素6和10、CC趋化因子受体1(CCR1)、CCR2、CCR5和CCR7的mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞表面趋化因子受体的表达; TranswellTM迁移实验检测细胞对CC趋化因子配体19 (CCL19)和CCL21的趋化能力。结果 ox-LDL处理后细胞被油红O染成暗红色,而β葡聚糖干预组中细胞染色变浅;与ox-LDL组比较,β葡聚糖可下调泡沫细胞肿瘤坏死因子αmRNA的表达,并上调CCR7的表达,明显促进泡沫细胞向CCL19/CCL21的趋化反应(均为P <0. 05)。结论β葡聚糖不仅抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,还可通过促进泡沫细胞CCR7的高表达,增强其迁移能力。
- 丁骏谢叶文吴奇勇潘洁陈洁宁永玲戚春建
- 关键词：泡沫细胞迁移动脉粥样硬化
- β-葡聚糖对不同诱导来源的小鼠骨髓树突状细胞生物学功能的影响
- 2024年
- 目的研究在不同诱导条件下β-葡聚糖对小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)活化和功能的影响。方法取小鼠胫骨和腓骨的骨髓在体外分别用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和IL-4诱导成FL-DCs、GM-DCs, 经全葡聚糖颗粒(whole glucan particles, WGP)刺激后, 流式细胞术分析FL-DCs和GM-DCs表面分子CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α、CD11b的表达;ELISA检测细胞上清液中IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;实时荧光定量PCR检测各细胞因子及趋化因子受体的mRNA水平;OT-Ⅰ、OT-Ⅱ小鼠经磁珠分选试剂盒分选出CD8+、CD4+T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA)与FL-DCs、GM-DCs共培养, 流式细胞术检测T细胞的增殖分化情况。结果经WGP刺激后, FL-DCs和GM-DCs中CD40、CD80、MHCⅠ、MHCⅡ、CD8α的表达均显著上调(P<0.05);细胞因子IL-12p40、TNF-α的分泌显著增多(P<0.05), 而IL-6、IL-10含量在FL-DCs、GM-DCs间存在差异;实时荧光定量PCR结果显示, WGP促进GM-DCs中趋化因子受体CXCR5和CCR7的表达(P<0.001和P<0.01), FL-DCs中CCR7的改变更为显著(P<0.000 1);在两种不同的培养方式中, WGP均能促进CD4+T细胞产生更多的IFN-γ和IL-17α(P<0.05)。结论 WGP可诱导BMDCs的成熟, 提高BMDCs对效应T细胞的活化能力, 且可促使不同诱导来源的BMDCs向不同的Th细胞分化。
- 段雪含郝永哲丁骏戚春建
- 关键词：Β-葡聚糖树突状细胞免疫功能
- 莱菔硫烷对小鼠肺癌细胞凋亡的影响及机制研究被引量：1
- 2022年
- 目的:研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对小鼠肺癌细胞系(Lewis lung cancer cells,LLC)细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法:CCK-8法鉴定SFN对LLC细胞增殖率的影响;流式细胞术检测SFN对LLC细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针检测SFN对LLC细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达的影响;Western blot检测SFN对LLC细胞Nrf2蛋白和ERK信号通路的影响。最后通过皮下注射建立C57BL/6J小鼠肺癌模型,建模后实验组及对照组分别给予SFN及PBS灌胃处理,检测SFN治疗对小鼠肿瘤的影响。结果:细胞实验证实SFN能显著抑制小鼠LLC细胞的增殖(P<0.05),促进LLC细胞的凋亡,随着SFN浓度的增加,LLC细胞晚期凋亡比例逐渐升高(P<0.05)。细胞周期分析提示12.5μmol/L和25.0μmol/L的SFN处理可减少LLC细胞G1期比例(P<0.05),增加G2/M期的细胞比例(P<0.01),细胞周期相关基因CyclinD1、CDK4、CDK6、CyclinB1和CDK1的表达显著下降(P<0.01)。Western blot提示SFN促进LLC细胞ERK磷酸化以及增加Nrf2表达(P<0.05)。流式细胞术检测DCFH-DA探针显示SFN能显著提高LLC细胞内ROS水平。动物实验结果发现SFN处理组小鼠肿瘤显著小于对照组(P<0.05)。结论:体内及体外实验证实SFN触发LLC细胞内ERK磷酸化,使得细胞内Nrf2表达增加,细胞内ROS水平升高,阻滞细胞周期,从而加速LLC细胞的凋亡。SFN可能会是一种安全且有效的抗癌药物。
- 丁骏潘洁谢叶文陈洁邵芳
- 关键词：莱菔硫烷活性氧细胞凋亡ERK磷酸化
- miR-21真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖与凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨人微小RNA-21(miR-21)重组表达质粒对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响及可能机制。方法设计合成靶向miR-21的互补双链DNA,退火后与真核表达载体pPG-miR-EGFP克隆连接,构建pPG-miR-21-EGFP重组表达质粒,利用脂质体LipofectamineTM 2000将鉴定正确的重组表达质粒pPG-miR-21-EGFP转染人胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察转染效率。实验分为3组:空白对照组、空载体组、重组表达质粒组。以RT-PCR检测转染前后胃癌细胞miR-21的表达水平。MTT法评价重组表达质粒抑制肿瘤细胞生长的效果,流式细胞术及Hoechst 33258法检测转染后胃癌SGC-7901细胞周期的分布和凋亡。Western blot法、免疫细胞化学法分别检测转染前后PTEN、PCNA、PDCD4、bcl-2、cyclin D1蛋白表达的水平。结果酶切及测序鉴定证实成功构建重组质粒pPG-miR-21-EGFP,转染人胃癌SGC-7901细胞后,荧光显微镜下观察转染效率达75%。RT-PCR检测显示重组表达质粒组胃癌细胞miR-21的表达下调,与空白对照组和空载体组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot法、免疫细胞化学法检测结果显示重组表达质粒组胃癌细胞cyclinD1、PCNA、bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05),而PDCD4、PTEN蛋白的表达上调(P<0.05)。重组表达质粒组的细胞生长缓慢,凋亡指数增加。流式细胞术检测结果显示重组表达质粒组G1期细胞的百分比较空白对照组增加[(69.71±0.314)%vs(50.1±0.331)%],S期细胞较空白对照组明显减少[(14.68±0.448)%vs(28.47±0.316)%](P<0.05)。结论重组表达质粒pPG-miR-21-EGFP可显著下调miR-21在胃癌SGC-7901细胞中的表达,并在一定程度上抑制胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,使较多的细胞停留在G1期,S期细胞减少,其作用机制可能是通过下调cyclinD1、PCNA、bcl-2蛋白的表达,上调PDCD4、PTEN蛋白的表达而实现的。
- 孙阳阳丁骏周晓丽朱逸之
- 关键词：胃肿瘤凋亡
