陈安琪
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：潍坊医学院临床医学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省卫生厅青年科研基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 14-3-3基因真核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的克隆人14-3-3基因并构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-14-3-3。方法从胎脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得人14-3-3基因的全长cDNA,将其插入pCUm-T载体中;序列测定后,重组携带14-3-3基因的表达载体pcDNA3.1(+)-14-3-3。结果经限制性内切酶酶切分析、PCR和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒。结论成功构建了14-3-3真核表达载体pcDNA3.1(+)-14-3-3,为进一步研究14-3-3在帕金森病中的作用奠定了良好的基础。
- 苗新东刘同美王婷陈安琪崔晓栋郭军堂
- 关键词：真核表达帕金森病
- A53Tα—synuclein与Ⅱ型单胺囊泡转移体相互作用的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的鉴定A53Tα—synuclein（A53T—SYN）与Ⅱ型囊泡单胺转移体（VMAT2）在体外分子间的相互作用，为研究α-synuelein在帕金森病（PD）发病机制中的作用提供依据。方法大肠杆菌B121中表达带GST标签的A53T-SYN蛋白，考马斯亮蓝染色和Western印迹检测蛋白质的表达，以该蛋白为诱饵，通过GST-Pull Down鉴定A53T-SYN与人脑提取物中的VMAT2在体外分子间的作用。结果考马斯亮蓝染色和Western印迹检测到GST-A53T-SYN在大肠杆菌中的高效表达，GST-Pull Down实验后的Western印迹检测发现与A53T—SYN作用的VMAT2蛋白。结论A53T-SYN与VMAT2在体外存在着分子间的相互作用。
- 陈安琪王建英牟青杰刘江月崔晓栋张代娟郭军堂
- 关键词：帕金森氏病
- A53T α-synuclein抑制SH-SY5Y细胞2型囊泡单胺转运体的表达
- 2016年
- 目的研究稳定表达A53Tα-synuclein对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中2型囊泡单胺转运体(VMAT2)蛋白表达的影响。方法构建A53Tα-synuclein真核表达载体,用脂质体lipofectamineTM2000转染SHSY5Y细胞,经G418筛选获得稳定转染单克隆细胞株;分别采用Western blotting及DCFH-DA染色检测细胞系A53Tα-synuclein过表达对VMAT2蛋白的表达及细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。结果 Western blotting结果显示VMAT2的表达在稳定表达A53Tα-synuclein的细胞系中明显降低。DCFH-DA染色结果显示稳定表达A53Tα-synuclein细胞系内DCF signal(507.3±7.1)较对照组(410.7±10.5)明显增多(P<0.05)。结论 A53Tα-synuclein能够通过抑制VMAT2的表达,增加细胞内的ROS水平,在帕金森病的发病过程中发挥重要作用。
- 满建梅郭军堂张代娟陈安琪
- 关键词：帕金森氏病
- 稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株的构建
- 2013年
- 目的构建稳定表达β-synuclein的SH-SY5Y细胞株。方法利用脂质体转染技术将质粒pcD-NA3.1-β-synuclein转染SH-SY5Y细胞,通过Zeocin进行抗性筛选。采用原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western blot杂交检测β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达情况;通过MTT比色法检测β-synuclein稳定表达对SH-SY5Y细胞增殖的影响。结果原位免疫荧光、免疫组织化学染色及Western blot检测结果显示β-synuclein在SH-SY5Y细胞中的表达水平较对照组明显升高;稳定表达β-synuclein的细胞增殖程度较对照组明显增高(P<0.05)。结论β-synuclein在SH-SY5Y细胞中稳定表达,为后续的研究提供有用的细胞模型。为进一步研究β-sy-nuclein对帕金森病发病神经保护作用的研究奠定了良好的基础。
- 王桂芬周英泽陈安琪郭军堂
- 关键词：帕金森病
- β-synuclein真核表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的克隆人β-synuclein基因并构建真核表达载体pcDNA3.1-β-synuclein,为帕金森病发病机制的研究奠定基础。方法从人胎脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得人β-synuclein基因的全长cDNA,将其插入pCUm-T载体中;序列测定后,重组携带β-synuclein基因的表达载体pcDNA3.1-β-synuclein。结果经限制性内切酶酶切分析、PCR和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒。结论成功构建了β-synuclein真核表达载体pcDNA3.1-β-synuclein;该载体可用于帕金森病的相关研究。
- 郭军堂苗新东刘同美王婷陈安琪崔晓栋
- 关键词：帕金森病
- β-synuclein蛋白原核表达载体的构建与表达
- 2010年
- 目的构建人β-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法从人脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得人β-synuclein基因,克隆至pCUm-T载体中,PCR筛选阳性克隆并测序。将酶切后的目的片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳分析目的蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增出人β-synuclein基因,将其亚克隆至pGEX-6P-1构建成重组表达质粒,并在BL21中表达了β-synuclein蛋白。结论成功构建人β-synuclein的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了人β-synuclein融合蛋白,为进一步研究β-synuclein在帕金森病中的作用奠定了良好的基础。
- 陈安琪刘学杰崔晓栋刘江月张代娟郭军堂
- 关键词：帕金森病
- 真核表达载体GV394-Nurr1的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394-Nurr1,检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。方法 PCR扩增人Nurr1基因,克隆至T载体,测序正确后与真核载体GV394一起,经Bam HI和Xho I双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建GV394-Nurr1;采用脂质体将GV394-Nurr1瞬时转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,RT-PCR检测Nurr1基因mRNA水平,通过DCFH-DA染色检测Nurr1对细胞内ROS水平的影响。结果 PCR及测序证实人Nurr1基因正确克隆至真核表达载体GV394;RT-PCR显示Nurr1基因mRNA水平在瞬时转染的细胞中明显增高;DCFH-DA染色显示瞬时转染Nurr1的神经母细胞瘤细胞的细胞内的ROS水平峰值较对照组明显左移。结论成功构建人源性Nurr1真核载体,可在SH-SY5Y细胞中表达并减少细胞内ROS水平,为进一步在体外研究Nurr1的功能及其与多巴胺能神经元的保护作用的关系提供了基础。
- 樊秀双郭军堂陈安琪
- 关键词：NURR1真核表达载体帕金森氏病
