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养殖三疣梭子蟹体内哈维氏弧菌的分离与致病性鉴定被引量：7: 2013年; 养殖的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)秋、冬季常发生非典型症状的死亡.本研究取濒死的三疣梭子蟹内脏及体腔液进行细菌分离,经纯化传代获得1株优势菌HY.HY菌的革兰氏染色呈阴性,菌体呈杆状、弧形或逗点状,无荚膜,无芽孢,极生单鞭毛,运动性强.生长特性和生化试验表明该菌生长需盐,最适生长的NaCl含量为30 mg/cm3;28℃下生长旺盛,能利用葡萄糖产酸但不产气,可以利用麦芽糖、蔗糖等糖类.测定了HY菌约930bp的16S rDNA序列,分类进化树显示其与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)XC08001聚为一簇.综合形态、生化和16S rDNA序列分析结果确定HY菌为哈维氏弧菌.以2×106cfu/只(蟹)的HY菌悬液注射健康梭子蟹成蟹(平均体重为400±25 g/只),致死率为35%;菌液浸泡感染梭子蟹仔蟹的半数致死剂量(LC50)为8.25×105cfu/cm3.上述结果表明分离的哈维氏弧菌对三疣梭子蟹具有致病性.; 周永强李登峰彭姣Ester Johanna Shikongo陈炯刘联国顾晓英; 关键词：海洋微生物学三疣梭子蟹病原哈维氏弧菌

HRCA技术检测中华鳖虹彩病毒被引量：3: 2013年; 【目的】中华鳖虹彩病毒(STIV)是甲鱼重要的病毒性病原之一,建立特异性好、灵敏度高的中华鳖虹彩病毒超分支滚环扩增体系(HRCA),对STIV进行快速、准确地检测。【方法】根据中华鳖虹彩病毒(STIV)独有的基因序列和锁式探针公共连接序列分别设计特异性的锁式探针及其扩增引物,对HRCA的系列反应条件进行优化,验证该方法的特异性和灵敏度,并用该方法对感染STIV显症和未显症的甲鱼组织进行检测。【结果】10 nmol/L探针经T4 DNA连接酶作用20 min环化,Bst DNA聚合酶大片段扩增20 min即可获得很好的检测效果。特异性试验表明,在多种待检病毒样中,HRCA能特异地检测出STIV,同时HRCA具有极高的灵敏度,能检测出的最低模板量为101拷贝,而常规PCR的检测下限为103拷贝,对显症和尚未显症的感染早期甲鱼组织的检测结果均为阳性。【结论】建立的中华鳖虹彩病毒HRCA检测体系具有灵敏、快速、简便等特点,能从组织样品中准确地检测出STIV,可以用于该类疾病的早期诊断,具有较好的推广前景。; 彭姣王洪强李登峰陈炯周永强顾晓英刘联国

基于IgY的ELISA定量检测甲鱼系统性败血症球状病毒被引量：2: 2016年; 为了对甲鱼系统性败血症球状病毒（STSSSV）进行快速检测,以抗STSSSV卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,Ig Y）为一抗,以羊抗鸡Ig G（HRP-Ig G）为二抗,建立STSSSV检测的间接酶联免疫吸附（ELISA）与血凝抑制（HI）实验,对两者进行了比较.运用ELISA对感染病毒甲鱼的血清、肝脏、粪便、及饲养环境水样进行了STSSSV检测.用ELISA分析了病毒稀释倍数及其2的对数值与OD492nm值间的线性关系,建立STSSSV的ELISA定量检测方法.结果显示：ELISA较HI更灵敏,其对STSSSV的检测灵敏度为3.98 ng·m L-1,能够在携带该病毒尚未显症的隐性感染的甲鱼血清和甲鱼粪便与养殖水中检测出STSSSV.ELISA对其他水产病毒无交叉反应,特异性强.ELISA定量检测限度范围为0.031~4μg·m L-1.本研究建立的间接ELISA方法为STSSSV的定性、定量提供了准确有效的检测手段.; 夏小磊李登峰彭姣周永强郭安南刘联国陈炯; 关键词：卵黄抗体酶联免疫吸附实验

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彭姣