目的探讨肛门失禁动物模型的造模方式及其临床意义。方法本文采用两种方法进行肛门失禁巴马小型猪模型的创建,分别为通过外科手术操作对小型猪的肛门括约肌离断致猪肛门失禁动物模型的创建和骶神经麻醉药物注射的方法对小型猪的骶神经损伤所致猪肛门失禁动物模型的创建,对猪肛门失禁动物模型进行肛门静息压测定,并取肛门括约肌组织进行组织形态学检测及可变剪接基因检测。结果括约肌离断法与骶神经损伤法均诱导巴马小型猪发生肛门失禁,具体表现为大便不能自行控制(括约肌离断组:第1天出现肛门失禁,第2~14天保持肛门失禁。骶神经损伤组:第1天出现不完全大便失禁,第2~6天开始大便失禁情况逐渐加重,至第7天出现完全肛门失禁,第8~14天均保持肛门失禁状态)、肛门静息压显著降低(骶神经损伤组10.29±0.23 mmHg,括约肌离断组7.32±0.53 mmHg均<对照组26.31±2.58 mmHg)和括约肌组织形态破坏(肛门括约肌组织形态结构异常,括约肌全层变薄,固有层结缔组织变厚,肌纤维数量明显减少、变细、断裂,横纹肌致密程度明显下降)。括约肌离断法较骶神经损伤法诱导肛门失禁速度更快,并且肛门静息压更低。模型组与对照组肛门组织可变剪接基因检测结果显示存在可变剪接差异基因,京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析表明,差异可变剪接基因富集于Regulation of lipolysis in adipocytes、PPAR signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、Spliceosome等信号通路。结论括约肌离断法和骶神经损伤均可有效的进行猪肛门失禁动物模型的建立,Regulation of lipolysis in adipocytes、PPAR signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、Spliceosome等信号通路异常的可变剪接可能参与肛门失禁的发生,具体机制有待深入研究。
目的通过转录组学测序技术(RNA-seq)分析手术离断括约肌致猪肛门失禁动物模型肛门括约肌的转录组学变化。方法采用随机数字表法将8只成年长白猪分为空白组、肛门失禁动物模型组(模型组),每组4只。模型组予以手术离断括约肌致肛门括约肌损伤方式构建肛门失禁模型,空白组未手术。取各组肛门括约肌组织,提取肛门括约肌组织总RNA,采用RNA-seq技术进行转录组学测序,进行GO(Gene oncology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物信息学分析,并筛选差异基因。结果测序结果表明,模型组与空白组差异基因共431个,其中上调基因280个,下调基因151个。转录组学测序分析发现模型组中蒙脱石基因(OBSCN)、趋化因子配体(CCL26)、Fyn-结合蛋白1(FYB1)及CXC基序趋化因子10(CXCL10)等基因表达上调,α-肌动蛋白-2(ACTG2)、人平滑肌肌球蛋白轻链激(MYLK)、鸡鸭甲状腺激素应答基因(THRSP)、活性物质2(ACTA2)等基因表达下调。GO分析发现,上调表达基因主要与免疫反应和趋化性等基因功能相关。KEGG分析发现,上调表达基因主要属于金黄色葡萄球菌感染、抗原处理和提呈相关基因等信号通路。结论转录组学分析提示OBSCN等上调基因可能参与肛门失禁发生发展过程,这为研究肛门失禁致病机制研究提供实验依据。
