王晓文
- 作品数：20 被引量：26H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Copines蛋白家族的研究进展被引量：7
- 2005年
- Copines蛋白家族是新近发现的一类分布广泛、进化保守的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,它们的结构特征为:N端有2个C2结构域,与突触结合蛋白(synaptotagmin)和蛋白激酶C的C2结构域不但高度同源,而且同样具有Ca2+依赖性的磷脂结合功能;C端有1个A结构域,与整合蛋白A结构域部分同源,是蛋白与蛋白相互作用的结构域。近年来研究表明,Copines家族成员与细胞的膜转运、胞内信号转导、肿瘤发生等重大生物过程都密切相关。
- 王晓文范文红范明
- 关键词：C2结构域信号转导
- SH-SY5Y细胞凋亡过程中Cpne5蛋白表达的变化
- 2013年
- 目的探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化。方法显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化。结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加。A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平。血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2±2.1%,与对照组1.1±0.1%比,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化。结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路。
- 靳雁斌司慧远吴彦瑞丁学锋王晓文范文红
- 关键词：A23187血清剥夺细胞凋亡蛋白免疫印迹
- 外源表达人CPNE5通过内质网应激反应诱导细胞凋亡
- CPNE5是在人胎脑中首次发现的一个基因.CPNE5所属的Copines蛋白家族是新近发现的一类进化保守的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白.Copines蛋白目前哺乳动物中共发现8个Copines家族成员,CPNE5(copi...
- 吴彦瑞王晓文丁学锋范文红范明
- 关键词：内质网应激GRP78JNK1HEK293
- 人copineⅤ蛋白多克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:制备兔抗人copineⅤ多克隆抗体。方法:将copineⅤN端423 bp(626～1 048 bp)构建到原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;以镍柱纯化后的蛋白为抗原,与等体积佐剂混合后免疫家兔3次;用ELISA和Western印迹检测抗血清,用(NH4)2SO4沉淀法初步纯化抗体。结果:表达并纯化了copineⅤN端蛋白,ELISA检测表明抗血清具有高亲和性,Western印迹检测表明抗体能特异性识别内源性和过表达的copineⅤ。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗人copineⅤ多克隆抗体。
- 丁学锋靳雁斌王晓文吴燕刘淑红宋小国范文红范明
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 外源过表达CPNE5基因增强HEK293细胞对Zeocin的敏感性
- 2008年
- 目的:探讨Zeocin处理是否能增强CPNE5基因诱导细胞凋亡的作用。方法:分别构建CPNE5基因稳定过表达和抑表达载体,转染HEK293细胞,形成克隆后,用RT-PCR、MTT法分析CPNE5基因过表达和抑表达的HEK293单克隆细胞对Zeocin作用的敏感性。结果:CPNE5基因过表达的HEK293单克隆细胞对Zeocin反应敏感性增加。结论:Zeocin能增强CPNE5基因诱导细胞凋亡的作用。
- 王晓文吴彦瑞吴燕靳雁斌刘淑红范文红范明
- 关键词：过表达
- 肝脏cDCs亚群研究
- 2016年
- 目的探究肝脏不同c DCs亚群的特性和抗原递呈能力。方法分离肝脏非实质细胞和脾脏混合细胞,流式分选得到肝脏CD103^+ cDC(脾脏内CD8α^+ cDC)和CD11b^+ cDC,Q-PCR检测不同cDCs亚群特征性分子的表达。分离OT-Ⅰ/OT-Ⅱ转基因小鼠na?ve T细胞,并将得到的T细胞进行CFSE标记。将DCs和CFSE标记的T细胞加入特异的OVA肽段,体外共培养3 d,收集细胞检测T细胞增殖。结果稳态下小鼠肝脏内的CD103^+ cDC和CD11b^+ cDC类似脾脏CD8α^+ cDC和CD11b^+ cDC,分别负责活化CD8^+T细胞和CD4^+T细胞。结论发现了肝脏DCs的分群特性,以及证明了肝脏内cDC不同亚群对不同T细胞的活化作用,为进一步研究肝脏DCs的功能奠定基础。
- 李倩王晓文唐丽
- 关键词：T细胞共培养增殖
- 小鼠Cpne5基因mRNA水平的表达分布及其在胚胎的表达定位被引量：3
- 2013年
- 目的明确小鼠Cpne5基因在mRNA水平的组织表达分布及其在胚胎的表达定位。方法提取新生、成年小鼠主要脏器的总RNA,利用RT-PCR法检测Cpne5 mRNA的表达量;合成针对Cpne5 mRNA的杂交探针,取不同胎龄胎鼠进行整体原位杂交。结果 Cpne5 mRNA在成年小鼠10种脏器组织均有不同程度的表达,以大脑,小脑,睾丸和肺脏表达量较高;而肝脏和肌肉未表达。新生小鼠9种脏器中,Cpne5表达量最高的是脑组织,眼和肾次之,肺和肝脏表达量很少。制备并评估Cpne5原杂探针的产量,SP6转录的反义探针浓度为100ng/μL,T7转录的正义探针浓度为10ng/μL,原位杂交结果显示Cpne5 mRNA主要表达于胎鼠的端脑、间脑、中脑及菱脑原节。结论在新生和成年小鼠的脑组织中Cpne5基因mRNA高水平表达,并在胎鼠发育过程中定位于胎脑。
- 靳雁斌丁学锋司慧远吴彦瑞王晓文吴燕范文红
- 关键词：信使RNA整体原位杂交小鼠
- 促肿瘤细胞死亡,降低胞浆钙离子浓度的基因copineⅤ
- 本发明公开了促肿瘤细胞死亡，降低细胞浆中钙离子浓度一个基因copineV。该基因编码的蛋白质定位于细胞膜和内质网，利用流式细胞技术等证明该基因能促进细胞死亡，并降低细胞浆中钙离子浓度，提示该基因在组织发育、再生及肿瘤形成...
- 王晓文靳彦彬吴燕吴彦瑞范文红范明
- 文献传递
- CPNE5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响被引量：1
- 2008年
- [目的]研究CPNE5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中,经TNF-α处理后,用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响。[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性。[结论]CPNE5的A结构域能够剂量依赖性抑制NF-κB的转录激活活性。
- 吴彦瑞王晓文靳雁斌吴海涛丁学峰刘淑红吴燕范文红范明
- 关键词：肿瘤坏死因子
- CPNE5对NF-κB转录调控活性的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制。方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响。结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力。结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性。
- 吴彦瑞王晓文靳雁斌丁学峰刘淑红吴燕范文红范明
- 关键词：NF-ΚBDNA结合活性
