钟雪晴
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
- 供职机构：江西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 蓝光受体基因Cmwc-1和Cmwc-2的原核表达和蛹虫草中表达蛋白的检测被引量：1
- 2018年
- 生物体中接受蓝光信号的因子为蓝光受体蛋白。为了揭示蓝光受体蛋白在蛹虫草中的存在形式,将蛹虫草蓝光受体基因Cmwc-1和Cmwc-2的部分序列构建在原核表达载体p ET-41a(+)中,在大肠杆菌中进行表达。以所表达的融合蛋白作抗原制备抗体,并由Western Blotting对蛹虫草菌丝体和子实体分别进行分析检测。结果表明,获得了高效价的蛹虫草蓝光受体蛋白Cm WC-1和Cm WC-2的抗体。经过Western Blotting分析,在蛹虫草菌丝体和子实体中检测到Cm WC-1有42 ku (Cm WC1-42)和48 ku (Cm WC1-48) 2种蛋白质存在形式,其中在菌丝体中主要以Cm WC1-48为主,Cm WC1-42的相对量较少;而在子实体中主要以Cm WC1-42为主,没有检测到Cm WC1-48。在菌丝体和子实体中检测到Cm WC-2有相同的50 ku(Cm WC2-50)蛋白质存在形式。结果表明,在Cm WC-1和Cm WC-2复合物行使生物功能过程中,Cm WC-1在菌丝体和子实体中分别产生了差异性降解,而Cm WC-2维持稳定。
- 钟雪晴叶德晓毛玉梅付鸣佳杨志海
- 关键词：蛹虫草
- 蛹虫草中蓝光受体基因Cmwc–1和Cmwc–2的表达特性分析被引量：3
- 2016年
- 采用RT–PCR克隆蛹虫草中蓝光受体基因Cmwc–1和Cmwc–2。结果表明,Cmwc–2基因序列的翻译产物Cm WC–2中存在1个PAS结构域和1个锌指结构域。实时荧光定量PCR结果显示,蛹虫草菌丝体Cmwc–1和Cmwc–2基因的表达量分别在蓝光照射后6 h和2 h达到峰值。子实体形成不同阶段Cmwc–1和Cmwc–2的相对转录量都有较大差异,生长50 d时蛹虫草子实体不同部位的Cmwc–1表达主要在子实体的中下段,Cmwc–2的表达主要在子实体的顶端和中段,畸形子实体中Cmwc–1和Cmwc–2的表达量都不高。
- 李琴毛玉梅付鸣佳沈俊良金华燕钟雪晴
- 关键词：蛹虫草蓝光蓝光受体
- 枯草芽孢杆菌SX3411产羊毛硫细菌素subtilomycin的初步鉴定与理化特性分析被引量：7
- 2019年
- 为了确定分离得到的枯草芽孢杆菌SX3411(Bacillus subtilis SX3411)具有产羊毛硫细菌素subtilomycin的能力和subtilomycin的理化特性。利用滤纸片扩散法检测到菌株SX3411发酵液对猪链球菌(Streptococcus suis)、枯草芽孢杆菌(非本筛选菌株)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和嗜水性单胞杆菌(Aeromonas hydrophila)具有抑菌作用。通过基因簇克隆和测序,表明其中抑菌物质主要为羊毛硫细菌素subtilomycin。理化特性分析表明菌株SX3411发酵液中抑菌物质具耐热和耐酸碱特性。SDS-PAGE检测表明subtilomycin分子质量在4 kDa左右。模拟胃液对subtilomycin抑菌活性影响不大,但不耐蛋白酶K和模拟肠液的处理。该研究为进一步开发应用羊毛硫细菌素subtilomycin奠定了基础。
- 李晓然叶德晓付鸣佳钟雪晴肖世平杨志海
- 关键词：枯草芽孢杆菌理化特性
- 蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测被引量：1
- 2016年
- 为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶（Subtilisin-like protease）的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域（143～429）和1个前体蛋白转化酶P功能域（514～600）,符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48～50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。
- 毛玉梅李琴付鸣佳金华燕沈俊良钟雪晴
- 关键词：蛹虫草NORTHERN杂交实时荧光定量PCR
- 枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质的发酵条件优化被引量：2
- 2021年
- 枯草芽孢杆菌SX3411菌株自身带有subtilomycin基因簇,其主要的抑菌成分为subtilomycin.该文采用单因素分析法分析了枯草芽孢杆菌SX3411在不同发酵条件和营养成分时对抑菌物质产生的影响.根据单因素分析,对枯草芽孢杆菌SX3411产抑菌物质设计了响应面法分析,通过响应面法获得了最优的发酵条件和最佳营养成分配比.结果表明:最佳培养条件是初始pH值为8.25、转速为169 r·min^(-1)、温度为30.24℃、装液量为37.9%、接种量为1.46%,抑菌圈直径预测值为30.04 mm;最佳培养基的成分为葡萄糖11.4 g·L^(-1)、酵母粉5.0 g·L^(-1)、ZnSO_(4)0.00056 g·L^(-1)、CaCl_(2)0.0595 g·L^(-1),抑菌圈直径预测值为27.83 mm.实际检测值与预测值完全吻合.实验结果为生产羊毛硫细菌素subtilomycin提供了依据.
- 丰磊魏伟群付鸣佳肖世平叶德晓钟雪晴黄紫妍
- 关键词：抑菌物质单因素分析响应面法
- 羊毛硫细菌素变体及其生物活性研究进展被引量：2
- 2019年
- 羊毛硫细菌素是由细菌核糖体上合成并经翻译后加工修饰而成的一类抗菌肽。已经在多种G+细菌中发现有羊毛硫细菌素,大多对G+细菌有抑菌作用。羊毛硫细菌素的基因工程无法从单一的表达羊毛硫细菌素结构基因获得高活性的成熟羊毛硫细菌素。本研究综述了羊毛硫细菌素前体分子定向位点突变后,由修饰酶重新识别和修饰可产生结构变异的可分泌的变体分子和无法分泌的变体分子,对羊毛硫细菌素分子突变位点进行了分类和归纳,并总结了羊毛硫细菌素分子突变位点与其生物活性的关系。在现有羊毛硫细菌素应用成果有限的条件下,对于工程改造羊毛硫细菌素和增强其抑菌活性具有重要意义。
- 叶德晓钟雪晴付鸣佳杨志海
- 关键词：变体抗菌活性
- 枯草芽孢杆菌SX3411羊毛硫细菌素Subtilomycin结构基因subA的原核中串联表达和抗体制备
- 2021年
- 为了提高枯草芽孢杆菌SX3411菌株羊毛硫细菌素Subtilomycin前体基因subA表达产物的抗原性,采用化学合成的方法合成了SubA的3次重复串联体3×subA基因,构建了该基因的原核表达载体并转入大肠杆菌中。结果表明,3×subA基因在大肠杆菌中获得了融合表达。利用SDS-PAGE纯化大肠杆菌中融合表达的3×SubA,免疫家兔后制备抗体anti-3×SubA,该抗体经检测有较高的滴度。通过Western Blotting杂交,检测了Subtilomycin前体多肽SubA的胞内表达特性。结果表明,枯草芽孢杆菌SX3411在30℃培养的条件下进行不同时间取样检测,枯草芽孢杆菌3411约在培养的第10,12小时胞内有较多的SubA表达。综上所述,通过串联表达Subtilomycin前体基因subA所获得的融合表达产物3×SubA具有较好的抗原性,以此获得的抗体anti-3×SubA完全可以用于枯草芽孢杆菌SX3411中Subtilomycin前体检测和分析。
- 丰磊魏伟群钟雪晴付鸣佳肖世平叶德晓黄紫妍
- 关键词：抗体制备
- 蛹虫草和蝉棒束孢组氨酸激酶基因受杀菌剂影响的差异表达
- 2017年
- 组氨酸激酶是真菌感受外界刺激的重要组成部分,它使真菌能适应和应答环境的改变。通过RT‐PCR克隆蝉棒束孢Isaria cicadae组氨酸激酶基因Ic HK的ORF序列,对Ic HK基因序列分析表明其翻译产物Ic HK中存在着4个HAMP功能域、1个His KA功能域、1个HATPase功能域和1个REC功能域。采用实时荧光定量PCR方法研究了3种杀菌剂咯菌腈(Fludioxonil)、异菌脲(Iprodione)和克菌丹(Captan)对蛹虫草Cordyceps militaris组氨酸激酶Cm HK和蝉棒束孢组氨酸激酶Ic HK表达的影响。结果表明,Cm HK基因的表达对这3种杀菌剂的影响不敏感,这3种杀菌剂不能导致Cm HK基因的相对转录量明显增加。Ic HK基因的表达对这3种杀菌剂的影响都敏感,特别是对咯菌腈和克菌丹更为敏感,这3种杀菌剂可导致Ic HK基因的相对转录量的增加。研究结果表明不同真菌应对相同胁迫环境时,同源基因的表达特征可存在差异。
- 李琴毛玉梅付鸣佳钟雪晴
- 关键词：蛹虫草组氨酸激酶杀真菌剂
