冯洁
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 重组人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor Kazal结构域的原核表达、纯化及活性鉴定
- 2013年
- Hespintor是应用抑制消减杂交技术(SSH)从肝母细胞瘤细胞系HepG2中筛选得到的一未知功能蛋白,序列分析表明该蛋白属于Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serine proteinase inhibitor,Serpin)家族中的一个分泌型新成员,具有与食管癌相关基因2(Esophageal cancer related gene 2,ECRG2)高度同源的Serpin基本结构。为了进一步阐明Hespintor的生物学功能,必须得到纯化的Hespintor蛋白。先将Hespintor Kazal结构域编码序列亚克隆至原核表达载体pET-40b(+),转化至Rosetta(DE3)表达宿主菌中。经0.25 mmol/L IPTG,30℃诱导5 h获得了分子量约为42 kDa的Hespintor-Kazal重组融合蛋白的优化表达,Western blotting证实了重组蛋白的特异性。Hespintor-Kazal重组融合蛋白以包涵体形式在宿主菌中表达,利用金属螯合亲和层析和阴离子交换层析柱对重组蛋白进行两步纯化。初步的活性鉴定表明,纯化的Hespintor-Kazal重组融合蛋白能特异性抑制胰蛋白酶的水解活性,提示Hespintor具有作为一种新型抗肿瘤药物的潜在开发价值。
- 冯洁伦永志李越武会娟李宝明魏玲张小莉王雪蕾迟庆
- 关键词：原核表达
- 一种丝氨酸蛋白酶抑制因子重组多肽及其制备方法和应用
- 本发明提供一种丝氨酸蛋白酶抑制因子重组多肽及其制备方法和应用，属于基因工程及其制备领域。本发明通过构建人源丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor原核表达载体，优化重组多肽表达，改善重组多肽纯化，鉴定重组多肽活性，其重组多...
- 伦永志王雪蕾冯洁
- 文献传递
- 人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用研究进展
- 2012年
- 围绕人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构、主要成员及其抗肿瘤作用做一综述。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子在机体内发挥重要的生理作用,具有广泛的研究和应用价值。它们在各种肿瘤中有着或高或低的表达,与肿瘤发生、发展相关,可能成为肿瘤治疗的新标靶。
- 冯洁伦永志
- 关键词：抗肿瘤作用
- 人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor的基因克隆与序列分析被引量：2
- 2013年
- 目的:克隆得到人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因,并应用生物信息学方法进行序列分析。方法:提取HepG2细胞总RNA,RT-PCR扩增Hespintor基因片段,连接至pMD 20-T克隆载体中,转化JM109宿主菌,蓝白斑法筛选阳性克隆菌落,菌落PCR及测序鉴定。利用在线工具软件对Hespintor进行信号肽预测、亚细胞定位、结构域、三级结构、基因染色体定位及组织分布表达分析。结果:人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor基因全长285bp,共编码94aa,其中1-23aa编码信号肽,符合亚细胞定位于细胞外的预测;53-93aa编码一个典型的Kazal结构域。Hespintor基因的染色体定位于5号染色体短臂3区3带1亚带(5q33.1);正常组织中仅在睾丸有表达,而肿瘤组织中仅在生殖细胞瘤有表达。结论:Hespintor是一个在机体中静止表达的Ka-zal型丝氨酸蛋白酶抑制因子家族的分泌型新成员。
- 伦永志冯洁李欣悦王雪蕾
- 关键词：逆转录PCR基因克隆生物信息学
- 乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白HBVDNAPTP1的表达、纯化与初步鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并对融合蛋白进行纯化。方法利用逆转录-PCR获得乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(Polymerase)反式调节人类新基因HBVD-NAPTP1,测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌进行诱导,并利用组氨酸亲和层析方法对融合蛋白进行纯化。结果 HBVDNAPTP1原核表达载体转化宿主菌后,经0.5 mmol/L IPTG、30℃诱导5 h获得了分子量约为31 kD的HBVDNAPTP1融合蛋白的优化表达,Western blotting证实融合蛋白的特异性。亲和层析纯化后得到较纯的HBVDNAPTP1融合蛋白,每升培养菌液中可获得2.24 mg的纯化蛋白。结论成功获得纯化的HBVDNAPTP1融合蛋白,为今后开展HBVDNAPTP1的生物学功能研究奠定了物质基础。
- 阎秀丽伦永志王芳冯洁迟庆
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA聚合酶原核表达
- 应用ERIC-PCR技术分析多药耐药肺炎克雷伯菌的基因分型被引量：2
- 2013年
- 目的分析多药耐药肺炎克雷伯菌的肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因分型,为临床诊断和防治肺炎克雷伯菌感染提供依据。方法先利用纸片扩散法检测18株临床分离的肺炎克雷伯菌对17种抗菌药物的耐药性并获得耐药谱型;再利用ERIC-PCR获得18株肺炎克雷伯菌DNA指纹图谱,通过非加权配对聚类分析(UPGMA)法构建分子进化树;最后探讨肺炎克雷伯菌ERIC-PCR基因型与其耐药性及耐药谱之间的关系。结果 18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈不同程度耐药,对亚胺培南敏感性达100%。18株肺炎克雷伯菌对17种抗生素呈现12种耐药模式,并可分为9种基因型。结论肺炎克雷伯菌耐药性及耐药谱与特定的ERIC-PCR基因型之间存在较高程度的关联。
- 王芳高梦孙杰冯洁伦永志
- 关键词：ERIC-PCR基因型耐药谱
