李颜颜
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
- 供职机构：江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 蜡样芽胞杆菌磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中重组表达、纯化及酶学性质分析被引量：5
- 2017年
- 【目的】构建蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。【方法】以B.cereus基因组DNA为模板,PCR扩增得到磷脂酶C基因(bcplc),构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒并转化到乳酸克鲁维酵母中,实现bcplc基因的表达。利用镍柱亲和层析纯化和脱盐柱得到电泳纯的重组磷脂酶C(rbcPLC)。【结果】成功构建产磷脂酶C的重组乳酸克鲁维酵母并纯化了重组磷脂酶C,纯化后rbcPLC经SDS-PAGE分析在40 kDa附近出现显性条带。NPPC法测得rbcPLC酶活为19251 U/mg,最适反应温度为80°C,最适pH为9.0。在低于40°C时,pH 7.0-8.0时,rbcPLC重组酶较稳定。Cu^(2+)和Co^(2+)对其有明显的抑制作用;Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)对其有明显的促进作用。【结论】首次实现了对蜡样芽胞杆菌来源的磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了借鉴意义。
- 肖超张梁李颜颜辛瑜陈国安杨盛荣
- 关键词：蜡样芽胞杆菌乳酸克鲁维酵母纯化酶学性质
- 通过基因工程技术构建能合成特殊结构类脂A分子的大肠杆菌
- 类脂A是脂多糖(LPS)的疏水基团,大量存在于革兰氏阴性菌细胞外膜外层,可通过结合免疫细胞表面的TLR4受体来引发固有免疫应答(MyD88或TRIF途径),产生细胞因子.
- 韩亚宁李颜颜王小元
- 培养基及培养条件对Pycnoporus sp. SYBC-L1分泌漆酶的影响被引量：10
- 2009年
- 从作者所在实验室保存的3株白腐真菌中筛选到一株液态发酵产漆酶的密孔菌Pycnop-orus sp. SYBC-L1,以漆酶活力为指标,采用正交试验法,优化了Pycnoporussp.SYBC-L1分泌漆酶的培养基:麸皮水煮液60 g/L,葡萄糖60 g/L,豆粕粉15 g/L,CuSO4.5H2O 1.0 mmol/L;培养条件:初始pH 3.0,装液量50 mL/250 mL,30℃、200 r/min培养13 d,漆酶活力达24.95 U/mL,为优化前的36.16倍。
- 王志新蔡宇杰李颜颜廖祥儒张峰张大兵
- 关键词：漆酶
- 代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌合成及分泌途径生产L-缬氨酸被引量：13
- 2018年
- 谷氨酸棒状杆菌是目前微生物发酵生产L-缬氨酸的主要工业菌株。文中首先在谷氨酸棒状杆菌VWB-1中敲除了alaT(丙氨酸氨基转移酶),获得突变菌株VWB-2,作为出发菌株。进而对L-缬氨酸合成途径关键酶——乙酰羟酸合酶(ilvBN)的调节亚基进行定点突变(ilvBN_1^(M13)),解除L-缬氨酸对该酶的反馈抑制。然后辅助过量表达L-缬氨酸合成途径关键基因ilvBN_1^(M13)、乙酰羟酸异构酶(ilvC)、二羟酸脱水酶(ilvD)、支链氨基酸氨基转移酶(ilvE),加强通往L-缬氨酸的碳代谢流,提高菌株的L-缬氨酸水平。最后,基于过量表达L-缬氨酸转运蛋白编码基因brnFE及其调控蛋白编码基因lrp_1,提高细胞的L-缬氨酸转运能力。最终获得工程菌株VWB-2/pEC-XK99E-ilvBN_1^(M13)CE-lrp_1-brnFE在5 L发酵罐中的L-缬氨酸产量达到461.4 mmol/L,糖酸转化率达到0.312 g/g葡萄糖。
- 张海灵李颜颜王小元
- 关键词：L-缬氨酸代谢工程谷氨酸棒状杆菌
- 新型Kdo2-lipidA合成菌株构建及其免疫生化活性研究被引量：1
- 2018年
- 脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌外膜的主要组成部分,由疏水的Kdo2-lipid A和亲水的多糖长链组成,能激活先天性免疫系统。Kdo2-lipid A是LPS的生物活性中心,能被开发为新型疫苗佐剂。本研究在前期菌株基础上敲除与LPS庚糖合成相关waaC-waaF基因,构建了直接合成特殊结构Kdo2-lipid A、不含多糖长链的突变株BW003。通过薄层层析和电喷雾电离质谱技术鉴定了BW003合成的Kdo2-lipid A结构;HEK-Blue h TLR4细胞和THP-1细胞刺激实验证实突变株及其合成的Kdo2-lipid A的细胞毒性均明显减弱;生化表型分析结果表明BW003较野生型呈现出更高的外膜渗透性、抗生素敏感性、疏水性及自凝集能力。本研究为后续新型疫苗佐剂开发和产业化利用奠定了理论基础。
- 王碧雯李颜颜王小元
- 关键词：脂多糖疫苗佐剂
- 全局调控因子Lrp的表达强化谷氨酸棒状杆菌发酵生产L-缬氨酸被引量：3
- 2016年
- 作者研究发现全局调控因子Lrp的表达能促进谷氨酸棒状杆菌发酵生产L-缬氨酸,但对菌体生长有一定影响。RT-PCR分析发现:Lrp的表达能提高L-缬氨酸合成相关基因ilv A、ilv BN、ilv C、ilv D及转运相关基因brn FE的转录水平,这也许是L-缬氨酸产量提高的原因。实验还发现:表达含有点突变(Arg39Trp)的Lrp可以进一步提高谷氨酸棒状杆菌L-缬氨酸的产量,而且对菌体生长的影响也减小;这种效果在lrp-brn F间隔区域存在突变的L-缬氨酸生产菌VWB-1中更加明显。在VWB-1中共表达lrp1和brn FE基因,5 L罐发酵L-缬氨酸产量达到42.1 g/L,比对照提高了48.9%。
- 陈诚李颜颜尹良鸿胡瑾瑜王小元
- 关键词：LRP谷氨酸棒状杆菌L-缬氨酸
- 弗朗西斯菌类脂A结构多样性及其调控机制研究
- 本研究通过多种质谱分析方法，鉴定了弗朗西斯菌类脂的结构多样性;同时利用生物信息学分析方法、全基因组芯片、基因高效表达、蛋白纯化和酶学性质分析、基因敲除突变株构建和细菌致病毒力研究等方法手段，发现了与类脂A结构多样性相关的...
- 李颜颜
- 关键词：生物化学基因表达酶学性质
- 文献传递
- 强化两组分分泌系统BrnFE和全局调控因子Lrp的表达促进谷氨酸棒杆菌生成L-异亮氨酸
- BmFE是一种两组分分泌系统,可向胞外分泌包括L-异亮氨酸在内的支链氨基酸及L-甲硫氨酸.Lrp是一种类似的L-亮氨酸响应调控因子,可激活BrnFE编码基因brnFE的表达.
- 尹良鸿胡晓清陈诚李颜颜王小元
- 细菌苏氨酸脱水酶受L-异亮氨酸反馈抑制的关键在于其调控结构域
- 2014年
- 苏氨酸脱水酶是细菌L-异亮氨酸合成途径中的关键酶,酶活力受终产物L-异亮氨酸的反馈抑制。苏氨酸脱水酶包含催化结构域及调控结构域,其中调控结构域所起的作用有待进一步研究。本文在大肠杆菌中分别克隆表达了四种不同的苏氨酸脱水酶:来自谷氨酸棒杆菌的苏氨酸脱水酶CgIlvA及其不合调控结构域的突变体CgIlvA^M和来自大肠杆菌的苏氨酸脱水酶EcIlvA及其不合调控结构域的突变体EcIlvA^M。通过蛋白纯化和酶活分析发现,CgIlvA^M和EcIlvA^M的酶活力比CgIlvA和EcIlvA的酶活力有所降低,但它们不再受L-异亮氨酸的反馈抑制,说明L-异亮氨酸对苏氨酸脱水酶的反馈抑制是通过其调控结构域来实现的。
- 于雪飞尹良鸿李烨李颜颜王小元
- 关键词：L-异亮氨酸谷氨酸棒杆菌大肠杆菌
- 细菌类脂A结构与功能研究进展被引量：10
- 2008年
- 类脂A分布在革兰氏阴性细菌的外表层,它是脂多糖分子的疏水基团。脂多糖,俗名内毒素,可以引起致命的脓毒症、内毒素血症和多器官功能障碍综合症等疾病。近年来的研究发现:脂多糖分子中只有类脂A部分具有内毒素的活性。当细菌侵入人体后,其表面的类脂A可以刺激宿主细胞表面的Toll样受体-4,在细胞内引起一连串的反应,产生一系列的细胞因子。本文根据近年来内毒素领域的国际研究进展,系统综述了类脂A的结构特征、合成途径和致病机理,并在此基础上分析了内毒素在疫苗开发领域的应用前景。
- 李颜颜史锋李烨王小元
- 关键词：脂多糖内毒素类脂A疫苗
