郭敏
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 全反式视黄酸通过RARα抑制缺氧缺糖引起的原代神经元凋亡
- 2016年
- 目的 :探讨全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能够抑制缺氧缺糖损伤(oxygen and glucose-deprivation,OGD)诱导的原代神经元凋亡。方法 :采用原代神经元作为研究对象,分为对照组、OGD组、OGD+ATRA组;体外分离培养原代神经元,用神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)鉴定神经元;倒置显微镜观察OGD损伤前后细胞形态变化;流式细胞技术研究OGD损伤后各组原代神经元凋亡水平;Real-time PCR检测视黄酸核受体α(retinoic acid receptor alpha,RARα)、转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、转录生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)mRNA表达水平;Western blot印迹检测RARα、TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平。结果 :成功培养原代神经元;原代神经元OGD损伤后,倒置显微镜观察发现OGD组死亡的原代神经元较OGD+ATRA组明显增多,细胞更加杂乱;流式细胞计数发现OGD+ATRA组(26.11±2.96)%细胞凋亡率较OGD组(52.14±5.23)%明显降低(P=0.025);OGD+ATRA组RARαmRNA表达水平(1.52±0.43)和蛋白表达水平(0.22±0.02)较OGD组的m RNA表达水平(0.49±013)和蛋白表达水平(0.10±0.02)均明显增高(P=0.006,P=0.005),而OGD+ATRA组TGF-β1、TGF-β2 m RNA表达水平(0.45±0.10,0.41±0.08)分别较OGD组(0.81±0.15,0.98±0.15)明显降低(P=0.034,P=0.018),而且OGD+ATRA组TGF-β、Caspase-3蛋白表达水平(0.22±0.04,0.18±0.03)分别较OGD组(0.39±0.05,0.47±0.06)也明显降低(P=0.016,P=0.002),OGD+ATRA组(1.08±0.49)与OGD组(1.00±0.15)Caspase-3 m RNA表达水平无明显差异(P=0.148)。结论 :ATRA可以激活其受体RARα进而下调TGF-β,抑制凋亡因子Caspase-3的表达,最终抑制OGD损伤引起的原代神经元凋亡。
- 郭敏江伟侯娜丽谷燕黄鸿眉陈洁李廷玉
- 关键词：全反式视黄酸缺氧缺糖损伤
- siCBP慢病毒降低大鼠原代海马神经元乙酰化组蛋白表达被引量：1
- 2015年
- 本研究目的为构建携带针对大鼠环磷酸腺苷反应元件结合因子的结合蛋白(CBP)基因的siRNA重组慢病毒,感染原代海马神经元并检测其对乙酰化组蛋白表达的抑制作用。本文构建了4种siCBP,并检测其对神经元中CBP表达的抑制作用,选择效果最好的一种检测神经元中HAT活性及乙酰化组蛋白Ac-H3、Ac-H4的表达。酶切及测序鉴定证实siCBP正确克隆至慢病毒质粒中,4种siCBP感染原代海马神经元后CBP mRNA和蛋白表达有不同程度降低,效果最佳的GR806对神经元的HAT活性及Ac-H3、Ac-H4表达均有显著抑制作用。本研究为后续应用siCBP阐明CBP依赖的组蛋白乙酰化对海马区学习记忆功能调节的相关分子机制提供了实验工具。
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- 关键词：慢病毒载体海马神经元组蛋白乙酰化
