刘红涛
- 作品数：20 被引量：125H指数：5
- 供职机构：北京医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠凋亡相关新基因TFAR19 cDNA的克隆化和序列分析被引量：33
- 1999年
- 目的：了解一个细胞凋亡相关新基因ＴＦＡＲ１９在不同种属间的序列同源性。方法：利用表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇ，ＥＳＴ）拼接技术、ＲＴＰＣＲ、ＤＮＡ序列测定技术及计算机分析技术。结果：首次成功进行了小鼠ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ编码区的ｃＤＮＡ克隆化和序列分析，发现小鼠和人ＴＦＡＲ１９在核苷酸水平上有８１．４％的同源性，在氨基酸水平上有高达９６％的同源性。功能区分析发现，小鼠ＴＦＡＲ１９ｃＤＮＡ序列含编码１２６个氨基酸的开放性读码框架，含１个可能的ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ依赖的蛋白激酶磷酸化位点，４个可能的ＰＫＣ磷酸化位点。其Ｃ端的“ＥＤＤＡＤＹ”序列与人ＤＮＡ拓扑异构酶Ｉ１４１１４７位残基序列完全相同。结论：小鼠ＴＦＡＲ１９是与人ＴＦＡＲ１９高度同源的新基因，与ＤＮＡ拓扑异构酶Ｉ可能有功能相关性。
- 宋泉声韩文玲刘红涛马大龙
- 关键词：TFAR19CDNA分子克隆
- 基因治疗的新载体──腺联病毒被引量：2
- 1995年
- 基因治疗将一种全新的概念引入医学界，给现有条件尚难治愈的疾病患者带来一线希望。基因治疗主要是利用病毒介导的基因转移，腺联病毒ＡＡＶ载体，由于其得天独厚的特点，正广泛地用于基因治疗研究。文中简单地介绍了ＡＡＶ的生物学特点、载体结构及其在基因治疗研究中的优越性。
- 袁勇刘红涛
- 关键词：基因治疗腺联病毒包装细胞
- 提高人重组IL-6在真核细胞中表达的新途径被引量：3
- 1996年
- 为提高IL-6在真核系统中的表达效率,我们在构建真核表达载体pcDNA3IL-6的基础上,用表达载体pCI中的CMV启动子和下游所带的β-球蛋白的第一个内含子,置换了pcDNA3中的CMV启动子,构建了一种新的表达载体,使IL-6的表达水平提高了7.5倍。此外,我们还研究了pAdVAntage共转染对IL-6表达的影响,使之表达水平提高了3.6倍。以上结果为细胞因子在真核系统中的高效表达提供了有益的经验。
- 刘红涛袁勇张颖妹王应狄春辉马大龙
- 关键词：真核细胞基因转染细胞因子
- 腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素6在真核细胞中的表达效率
- 1998年
- 目的：构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率。方法：利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素６（ＩＬ６）真核表达载体ｐＡｄＣＩＩＬ６和ｐ３３５ＣＩＬ６。将它们瞬时转染ＣＯＳ７细胞后，利用ＩＬ６依赖株７ＴＤ１对上清中的ＩＬ６进行检测。结果：两种新建载体分别能提高ＩＬ６在真核细胞中的表达效率５．５和３．４倍。结论：腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡＲＮＡ（ｖｉｒｕｓａｓｏｃｉａｔｅｄⅠａｎｄⅡＲＮＡ，ＶＡⅠａｎｄＶＡⅡ）和腺伴随病毒（ａｄｅｎｏａｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）的倒转末端重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ。
- 刘红涛袁勇张颖妹狄春辉王应马大龙
- 关键词：白细胞介素6腺病毒分子克隆真核细胞
- 白介素6基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响被引量：5
- 1999年
- 目的为了进一步观察白介素6(IL 6)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法采用基因工程方法构建了真核表达载体 pcDNA3 IL 6 ,并经体内和体外实验检测到被其转染的细胞高效表达IL 6和IL 6mRNA。先后2次(于第1、第20天)将这种质粒多点肌注于12只3 5月龄雄性BXSB狼疮小鼠 ,每次每只100μg,同时用等量空载体质粒(pcDNA3)肌注于10只同龄雄性BXSB狼疮小鼠作对照。结果发现IL 6在该鼠体内的过表达导致其血清ANA滴度、尿蛋白水平和肾小球IgG、C3沉积较对照组明显增加 ,血清IL 6水平和肾小球IL 6表达高于对照组 ,并有2例小鼠脾脏明显增大。结论证实了IL 6在SLE发病中的病理性作用 ,并提示阻止或抑制IL
- 杨高云刘红涛李世荫姜学义宋泉声马大龙
- 关键词：红斑狼疮白细胞介素6BXSB小鼠
- PTKs及其在信号传导和T细胞活化中的作用
- 1995年
- PTKs(Protein Tyrosine Kinases)即酪氨酸蛋白激酶,是1980年由Hunter等人首先在Rous肉瘤病毒的编码蛋白质中发现的。它能特异地将磷酸基团转移到酪氨酸(Tyr)而对Ser/Thr,Hyp无作用。随后相继发现了多种PTKs及其作用底物。进一步研究表明它在调控细胞生长、分裂、转化、衰老及细胞信号传导诸方面有极其重要的作用。
- 刘红涛刘俊达
- 关键词：信号传导途径细胞活化酪氨酸磷酸化细胞信号传导酪氨酸蛋白激酶
- Magic/WizardDNA纯化试剂盒的再生利用被引量：1
- 1998年
- ＤＮＡ的提取是分子生物学的常规操作，美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司推出的Ｍａｇｉｃ／Ｗｉｚａｒｄ试剂盒大大简化了这一烦琐、费时的工作，但试剂盒一次性使用的价格使多数国内实验室难以承受，摸索出一种简单的试剂盒再利用的方法，使再生试剂盒的纯化效果与原装试剂盒无显著差别，在方便了研究工作的同时也大大降低了实验成本．
- 袁勇宋泉声刘红涛狄春辉王玉刚
- 关键词：DNA提取试剂盒再利用
- 人参皂甙对老年人淋巴细胞免疫功能的作用机制
- 刘俊达王舒刘红涛张春玲
- 该项目利用免疫荧光及流式细胞仪检测了老年人淋巴细胞表型变化、受体分布；用荧光偏振分析法检测了细胞膜结构及流动性；用3H-TdR掺入法及MTT法检测了增殖应答；用ELISA法检测了细胞活化的信号传递及蛋白质酪氨酸激酶活性以...
- 关键词：
- 关键词：老年人淋巴细胞免疫功能免疫衰老人参皂甙
- 人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应被引量：73
- 2000年
- 目的：对一种新发现的凋亡相关基因ＴＦＡＲ１９进行蛋白质水平的促凋亡效应研究，并对其作用机理进行初步的探讨。方法；利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组ＴＦＡＲ１９蛋白进行纯化，将其加入到培养的白血病细胞株ＨＬ－６０，通过ＤＮＡ片段化、ＰＩ及ＡｎｎｅｋｉｎＶ标记进行流式细胞仪分析，观察ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。利用ＦＩＴＣ标记ＴＦＡＲ１９蛋白，分析其与细胞的结合及定位。利用Ｃａｓｐａｓｅ－３抑制剂ＤＥＶＤ－ｆｍｋ研究ＴＦＡＲ１９的凋亡信号转导途径。结果：高纯度的重组ＴＦＡＲ１９蛋白剂量依赖性地促进撤除血清的ＨＬ－６０细胞的凋亡，最高可使８２％细胞凋亡，对照为３０％。荧光标记的ＴＦＡＮ１９蛋白能与ＨＬ－６０细胞结合，主要定位于细胞核。ＤＥＶＫ－ｆｍｋ可部分抑制ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。结论：ＴＦＡＲ１９蛋白能够直接进入ＨＬ－６０细胞，发挥其促进细胞凋亡的效应。这一效应部分地与Ｃａｓｐａｓｅ－３的凋亡执行效应有关。
- 张颖妹徐秀珍刘红涛宋泉声马大龙
- 关键词：HL-60细胞白血病细胞凋亡
- 狼疮性肾炎病人肾脏组织中IL-6 mRNA的表达被引量：2
- 1997年
- 为探讨ＩＬ－６在狼疮性肾炎病人肾脏组织中的表达情况及其致病作用，我们用ＲＴ－ＰＣＲ和原位杂交方法对狼疮性肾炎病人和正常人肾穿标本中的ＩＬ－６ｍＲＮＡ进行检测。结果：（１）用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测的５例病人都有ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达，而３例正常对照中仅一例有弱的ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。（２）用地高辛标记的ＩＬ－６ｃＤＮＡ探针，对１３例病人进行原位杂交检测，结果都有不同程度ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达，表达部位在肾小球系膜细胞、小管上皮细胞、血管内皮细胞和间质细胞等。而３例正常对照未检测到ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。表明在狼疮性肾炎病人肾脏组织中ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达增高，且ＩＬ－６ｍＲＮＡ的高表达与血清中ＡＮＡ水平及肾脏ＩｇＧ、Ｃ３沉积可能有关。提示ＩＬ－６在狼疮性肾炎发病中可能有重要的病理作用。
- 杨高云李世荫刘红涛姜学义贾建文马大龙
- 关键词：狼疮性肾炎肾脏组织白细胞介素6
