李萌萌
- 作品数：10 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 发酵生产咖啡碱的工程菌、其构建方法及应用
- 本发明提供一种发酵生产咖啡碱的工程菌，所述工程菌是通过将咖啡碱生物合成途径中的关键酶基因导入谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)构建而成的重组谷氨酸棒状杆菌。本发明通过过量表达咖啡碱合成...
- 张正竹李萌萌邓威威宁井铭邓骋
- 文献传递
- CaXMT和TCS1突变体基因串联共表达及体外酶活检测分析
- 2016年
- 咖啡碱和可可碱是茶叶生物碱的主要组分,且咖啡碱是茶叶重要的滋味物质,随着咖啡碱在食品和药物领域的应用愈发广泛,咖啡碱的生物合成成为新的研究热点。目前市场上的咖啡碱主要靠化学合成,为了探索其生物合成途径,该研究将咖啡黄嘌呤核苷甲基转移酶(coffee xanthosine methyltransferase,Ca XMT)基因和茶树咖啡碱合成酶(tea caffeine synthase,TCS1)基因的4个突变体分别串联至同一大肠杆菌表达载体p MAL-c5X,诱导融合蛋白共表达,并进行SDS-PAGE凝胶电泳分析。结果表明:目的蛋白成功表达后,应用超声破碎法制备含有目的蛋白的粗酶液,添加底物黄嘌呤核苷(xanthosine,XR)和甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(Sadenosyl-L-methionine,SAM)进行体外酶促反应,将反应产物进行高效液相色谱检测。检测结果显示,p MALCa XMT-TM2/3/4的体外酶促反应产物仅有可可碱生成,均未见咖啡碱生成。该研究结果为构建生物合成咖啡碱和可可碱的串联共表达载体奠定了基础,也为进一步研究生物合成咖啡碱和可可碱提供了新思路。
- 武鑫李萌萌邓骋邓威威张正竹
- 关键词：咖啡碱体外活性
- 酿酒酵母和大肠杆菌鸟嘌呤脱氨酶基因的克隆、原核表达及活性测定被引量：1
- 2018年
- 与植物体内合成路径不同,微生物体内合成咖啡碱存在一条以黄嘌呤为底物,利用鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤生成黄嘌呤有效合成咖啡碱的新途径。为克隆鸟嘌呤脱氨酶的基因,构建可高效合成黄嘌呤的原核表达载体并对外源蛋白活性进行检测,分别以酿酒酵母和大肠杆菌为研究材料,根据Gen Bank中酿酒酵母和大肠杆菌中鸟嘌呤脱氨酶基因gud1和egud序列设计引物,聚合酶链式反应特异扩增其基因片段,将目的基因连接至p MAL-c5X载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达,并用高效液相色谱法鉴定其目的蛋白的催化活性。结果表明重组载体p MAL-gud1、p MAL-egud均可用来合成黄嘌呤,且GUD1比EGUD合成黄嘌呤的效率更高。研究结果将进一步丰富黑茶加工技术理论,同时为体外构建高效咖啡碱生物工程菌提供理论支持。
- 孙莹潘思安李萌萌邓威威张正竹
- 关键词：咖啡碱鸟嘌呤脱氨酶黄嘌呤原核表达
- 茶树咖啡碱合成酶基因TCS1的定点突变及体外表达分析
- 通过分析茶树咖啡碱合成途径中的N-甲基转移酶基因TCS1与ICS1、PCS1的蛋白质空间结构模型,找到了四个可能影响TCS1催化活性的关键位点进行定点突变,构建突变基因重组原核表达质粒pMAL-TMx并在表达菌株BL21...
- 李萌萌邓威威金璐Mohammad Wadud Bhuiya余晓丹张正竹
- 关键词：茶树定点突变N-甲基转移酶
- 文献传递
- 产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种新的产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用，本发明主要利用以黄嘌呤为甲基受体的咖啡碱合成代谢途径，将茶树咖啡碱合成酶基因TCS1和酵母鸟嘌呤脱氨酶基因GUD1共同导入大肠...
- 张正竹李萌萌邓威威孙莹潘思安
- 产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用
- 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种新的产茶叶碱和咖啡碱的重组基因工程菌及其构建方法和应用，本发明主要利用以黄嘌呤为甲基受体的咖啡碱合成代谢途径，将茶树咖啡碱合成酶基因TCS1和酵母鸟嘌呤脱氨酶基因GUD1共同导入大肠...
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- 文献传递
- 茶树咖啡碱合成酶基因TCS1的定点突变及体外表达分析
- 分析茶树咖啡碱合成途径中的N-甲基转移酶基因TCS1与ICS1、PCS1的蛋白质空间结构模型,找到了四个可能影响TCS1催化活性的关键位点进行定点突变,构建突变基因重组原核表达质粒pMAL-TMx并在表达菌株BL21(D...
- 李萌萌邓威威金璐Mohammad Wadud Bhuiya余晓丹张正竹
- 关键词：茶树N-甲基转移酶定点突变体外表达
- 提高重组谷氨酸棒状杆菌发酵生产咖啡碱产量的方法
- 本发明提供一种提高重组谷氨酸棒状杆菌发酵生产咖啡碱产量的方法，以含有咖啡碱生物合成途径中关键酶基因CaXMT和TCS1的重组谷氨酸棒状杆菌作为发酵菌株，通过向发酵液中添加前体物质黄嘌呤核苷，并采用加压方式对重组菌细胞进行...
- 张正竹李萌萌邓威威宁井铭邓骋
- 文献传递
- 茶树咖啡碱生物合成相关酶基因原核多基因表达载体的构建及其体外表达调控
- 咖啡碱（1,3,7-三甲基黄嘌呤）作为茶叶、咖啡和可可三大软饮料植物中嘌呤碱的主体成份，一方面因具有多种生理功能而被广泛应用于医药、食品、化工等领域;另一方面长期过量摄入咖啡碱会对人体产生一定的负面影响，从而使脱（低）咖...
- 李萌萌
- 关键词：茶树咖啡碱生物合成基因共表达
- 文献传递
- 发酵生产咖啡碱的工程菌、其构建方法及应用
- 本发明提供一种发酵生产咖啡碱的工程菌，所述工程菌是通过将咖啡碱生物合成途径中的关键酶基因导入谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)构建而成的重组谷氨酸棒状杆菌。本发明通过过量表达咖啡碱合成...
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