王洁琼
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项河南省高等学校创新人才培养工程更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同消毒剂抑菌效果观察被引量：2
- 2017年
- 针对3种常见的致病菌（金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌），选取3种消毒剂，检测对比其抑菌效果。方法：使用普通肉汤对3种消毒剂进行不同比例稀释，分别接种10μl×10^11CFU／ml的金黄色葡萄球菌菌悬液、沙门氏菌菌悬液和大肠杆菌菌悬液，培养8h和24h后，根据OD值测定结果判断其抑菌效果。戊二醛癸甲溴铵溶液在低浓度下即可抑制3种细菌生长，为综合效果较好的消毒剂，稀戊二醛溶液需适当提高浓度或延长时间才能有效抑菌；聚维酮碘溶液在高浓度下才可有效抑菌，低浓度下存在抑菌无效的情况。3种消毒剂对沙门氏菌、葡萄球菌抑菌效果相对较好，对大肠杆菌抑菌效果相对较差。
- 王洁琼赵玉杰周薇帆周云飞陈盼盼李新生
- 关键词：消毒剂稀释度OD值抑菌效果
- Ⅰ群4型禽腺病毒不同增殖方式的比较
- 引言禽腺病毒通常被认为广泛存在于健康鸡只和死亡鸡只中,这一认识在1987年安卡拉地区暴发因典型症状被命名为包涵体肝炎-心包积液综合征(HHS)而发生改变。随后,用该地区病料分离出的4型禽腺病毒(FAdV-4)在SPF鸡上...
- 周薇帆王洁琼赵玉杰周云飞刘琳陈盼盼李新生
- 鸡传染性法氏囊病超强毒株的驯化和VP2基因的分子特征分析
- 引言IBDV超强毒株的出现,严重威胁着世界养禽业的发展,被世界卫生组织(OIE)列为"影响社会经济的重要疾病"[1].有研究表明,VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原,与病毒中和抗体的诱导、抗原和毒力的变异和细胞凋亡密切相关...
- 王洁琼周薇帆赵玉杰周云飞刘琳李新生
- H3N2亚型猪流感病毒HA1、HA2基因的原核表达及抗原性分析被引量：3
- 2016年
- 血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的一个重要蛋白,在疾病预防和治疗中具有重要作用。本试验旨在克隆和表达H3N2亚型猪流感病毒A/swine/Henan/1/2010(H3N2)的HA1和HA2基因。用含有H3N2亚型SIV的鸡胚尿囊液提取RNA,RT-PCR扩增后将目的基因定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将其转入宿主菌BL21(DE3)pLyS进行表达,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测并用该病毒重组HA蛋白制备的特异性单克隆抗体1C10作为一抗对两种蛋白进行Western blotting分析。SDS-PAGE结果显示,得到HA1和HA2大小分别为34.8、23.2ku的重组蛋白,Western blotting结果表明,HA1蛋白与1C10单克隆抗体具有良好的反应原性,且1C10单克隆抗体表位在HA1蛋白上。本试验结果为进一步研究血凝素蛋白的结构和功能,以及建立快速诊断方法和基因工程疫苗提供材料。
- 宋玉慧王翔宇王洁琼潘梦梦张剑刘琳李新生
- 关键词：H3N2亚型猪流感病毒HA1基因原核表达
- 1株Ⅰ群血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病性被引量：8
- 2018年
- 用实验室保存的1株血清4型禽腺病毒（FAdV-4）W株对雏鸡（1dSPF鸡）进行攻毒试验,研究其致病性及免疫原性,每日观察鸡只精神状态,持续14d,计算死亡率,对每组死亡鸡只立即剖检,记录眼观组织病变,并将肝脏固定于10%的福尔马林中用于组织学观察。SPF鸡攻毒试验结果表明,口服接种100TCID50病毒量对1dSPF鸡的致死率高达100%,死亡时间在144~150h之间;对死亡鸡只剖检均可见到明显的心包积液,肝脏出血坏死;肝组织切片HE染色可见典型的嗜碱性核内包涵体。用该病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫保护作用,制作的高免血清也具有良好的治疗效果。
- 周薇帆陈田田刘建勋赵玉杰王洁琼刘琳陈盼盼李新生
- 关键词：攻毒试验免疫原性
- 河南一株鸡包涵体肝炎和心包积液综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析
- 引言自2015年5月,河南省及周边地区内爆发以鸡包涵体肝炎和心包积液为主要剖检特征的急性传染病,为更好地了解该病毒的遗传特性利用RT-PCR等方法对其进行生物学特性分析和全基因组扩增,得到序列总长度为43591bp,命名...
- 赵玉杰黄宗梅王洁琼周薇帆刘琳周云飞李新生
- 传染性法氏囊病病毒C4毒株VP2基因的原核表达及生物信息学分析被引量：3
- 2017年
- 试验旨在研究一株传染性法氏囊病病毒(IBDV)河南分离株的毒力特征及其与VP2氨基酸序列特征的关系。通过提取IBDV C4株RNA,利用RT-PCR扩增其VP2基因,与其他不同毒力IBDV毒株进行核苷酸及推导的氨基酸序列比对分析,同时使用pET-32a(+)原核表达载体表达VP2基因,用SDS-PAGE和Western blotting检测重组VP2蛋白的表达。结果显示,扩增的IBDV C4株的VP2基因序列在进化关系上属于超强毒力IBDV(vvIBDV)分类,与选取的vvIBDV毒株代表毒株核苷酸序列同源性在98.1%~98.7%之间,其七肽区为S-W-S-AS-G-S(第326—332位氨基酸)符合超强毒株特征,且222(A)、256(I)、294(I)和299(S)位氨基酸与超强毒力毒株的4个特征性氨基酸一致;但IBDV C4毒株的VP2蛋白氨基酸序列与超强毒力毒株代表毒株UK661相比,201(D/G)、281(G/R)、313(V/A)位氨基酸不同,其中281位氨基酸的改变处于279—290的小亲水区内,与病毒抗原性有关;构建的pET-32a(+)-VP2原核表达载体在大肠杆菌BL21感受态细胞上表达出分子质量约67ku的重组VP2蛋白,为进一步比较201(G)、281(R)、313(A)位氨基酸差异导致的抗原特性改变提供了研究基础。本试验结果表明,IBDV C4株VP2基因与vvIBDV毒株VP2基因的主要特性一致,但也有3处氨基酸与代表毒株UK661存在差异,这些改变可能与中国IBDV毒株毒力的进化有关。
- 王洁琼赵玉杰周云飞黄宗梅陈盼盼周薇帆刘琳李新生
- 关键词：VP2原核表达
- IBDV细胞适应株的驯化及其VP2基因的分子特征分析被引量：1
- 2018年
- 【目的】对从河南某地区发病鸡群中分离出的1株IBDV进行驯化使适应永生细胞DF-1,并对其VP2基因进行克隆和生物信息学分析,对IBDV分离株及其细胞适应株的VP2高变区及七肽区进行比较。【方法】测定IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50);通过SPF鸡胚-CEF-DF-1途径对X1进行驯化,使其适应永生细胞DF-1;根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV分离株和细胞适应株的VP2基因并测序,将其与参考毒株进行同源性和进化树分析,同时对二者在VP2高变区及七肽区的推导氨基酸序列进行对比分析。【结果】IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的ELD_(50)为10-8 mL^(-1),经驯化获得了细胞适应株C1。对2株病毒的VP2基因进行克隆并鉴定,测序分析得IBDV X1株在第222,256,294和299位上具有A、I、I、S4个特征性氨基酸,与IBDV超强毒株(vvIBDV)HK46 VP2基因氨基酸序列的同源性高达99.3%,确定X1株为IBDV超强毒株。同源性及进化树分析结果显示,C1株与IBDV减毒株CEF94亲缘关系较近,同源性较高,为99.6%,确定C1株为IBDV减毒株。在VP2高变区及七肽区推导氨基酸比对中显示,C1株第330位精氨酸R取代了X1株在330位的丝氨酸S;第222位氨基酸由A变成P;决定病毒毒力的位点第256和284位分别由I、A变为V和T。【结论】成功驯化了1株vvIBDV使其适应细胞,初步揭示vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化的过程中,VP2高变区及七肽区氨基酸序列有明显变化。
- 王洁琼赵玉杰周薇帆周云飞陈田田刘建勋李新生
- 关键词：传染性法氏囊病毒VP2基因基因克隆
