马纪
- 作品数：14 被引量：38H指数：4
- 供职机构：同济大学附属第十人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 转录因子Osterix对成骨细胞Col1a1基因的反式激活作用被引量：6
- 2007年
- Osterix(Osx)是一种具有锌指结构的转录因子,对骨形成十分重要.但到目前为止,直接接受Osterix调控的靶基因尚不清楚.用骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导原代培养小鼠成骨细胞的骨分化,定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ a1,Col1a1)与Osx的转录水平.结果发现,二者的转录时相具有相同的变化模式.为了确定二者之间的关系,采用腺病毒表达系统在原代成骨细胞中过表达Osx.数据表明,Osx能够明显上调Col1a1的转录水平.用EMSA(electromobility shift assay)检测这些过表达Osx基因的成骨细胞核抽提物,迁移条带的出现表明,Osx能够直接与Col1a1的启动子相结合.结果提示,在原代培养的成骨细胞中,Osterix通过直接与启动子相结合,调控Col1a1基因的转录.
- 潘秋辉马纪于永春孙奋勇
- 关键词：成骨细胞OSTERIX骨形态发生蛋白2
- 重组胸腺素α1在大肠杆菌中的融合表达及培养条件的优化被引量：2
- 2007年
- 采用三角摇瓶来摸索BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种表达目的蛋白的最优发酵条件,并在此基础上在Biotop CF-5L自动控制发酵罐中,利用补料分批培养技术,流加甘油,进行发酵培养;利用Western blotting进行发酵产物鉴定.摇瓶培养最优条件:10%接种量、25 mL LB培养基、37℃培养,0.02 g/mL的甘油做碳源,接种后4 h加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3h后目的蛋白表达量最高.BL21(DE3)/pET28A-Tα1菌种在BiotopCF-5L自动控制发酵罐中的条件为:以10%的接种量接种到3L发酵培养基中,设定溶氧40%,pH7.0,温度37℃,通气量3 L/min,快速流加甘油60 g,培养4 h后,加入终浓度为0.75 mmol/L的IPTG,诱导3 h后终止发酵.发酵罐中获得的菌体量为36 g/L,蛋白表达率为10%左右.
- 马纪谢秋玲刘侃汪炬
- 关键词：发酵工艺
- 慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立被引量：4
- 2011年
- 目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。
- 李川马纪张越安靓
- 关键词：NESTIN鼻咽癌细胞慢病毒
- miR-122过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证被引量：1
- 2011年
- 目的:比较两种miR-122转基因小鼠过表达载体构建方法,为建立miR-122过表达转基因小鼠奠定基础。方法:PCR扩增长约291bp的pre-miR-122的序列,分别定向克隆到pBROAD3-GFP载体GFP基因上游内含子或下游3′UTR区域,两种质粒分别转染293T细胞,Q-PCR检测miR-122和GFP的表达水平,并观察GFP绿色荧光。miR-122 sensor reporter是将3个miR-122成熟序列的反义序列串联克隆至psiCHECK2载体luciferase 3′UTR中,然后分别与2种miR-122过表达质粒载体共转染293T细胞,最后检测荧光素酶活性来鉴定miR-122调控功能。结果:2种构建方法的miR-122表达水平都明显增高,而只有插入到GFP基因3′UTR的质粒表达GFP功能正常。结论:构建microRNA过表达载体时,microRNA位于报告基因3′UTR区域不会影响microRNA和报告基因的功能;构建的两种miR-122过表达质粒载体都可应用到转基因小鼠研究中,而将miR-122插入到GFP下游的方法则更利于miR-122的表达。
- 马纪孙奋勇张越洪岸
- 关键词：MIR-122过表达SENSORREPORTER转基因小鼠
- 骨形态发生蛋白2通过Smad途径上调Osterix的表达被引量：12
- 2008年
- Osterix(Osx)是一种重要的调控成骨细胞分化的具有锌指结构的转录因子.骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP 2)能够上调Osx的表达,但其分子机制并不清楚.采用实时定量RT-PCR方法检测到BMP2诱导成骨相关细胞C3H10T1/2,MC3T3-E1,C2C12中Osx的转录水平显著上调,并且与成骨分化指标Col1a1,osteocalcin具有相似的表达动力学特征.而且,在C3H10T1/2细胞中过表达负显性(dominant negative,DN)Osx基因,能够有效抑制BMP2诱导的成骨分化.过表达BMP/Smad信号通路抑制蛋白Smad6,能够抑制Osx转录水平的上调.但是通过荧光素酶报告载体对Osx的启动子-1254^+85区域进行分析后未发现接受BMP通路调控的启动子区域.上述结果表明,BMP2能够通过Smad途径上调Osx的表达,并对成骨分化的过程具有十分重要的作用.
- 潘秋辉李益广杨松海马纪谢在春于永春孙奋勇
- 关键词：OSTERIX成骨细胞骨形态发生蛋白2
- 骨髓贴壁细胞向破骨细胞的分化被引量：2
- 2014年
- 背景:一般认为采用贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能够贴壁的细胞为间充质干细胞,并能分化成为成骨、成脂肪及成软骨细胞,其中贴壁的细胞是否有分化为破骨细胞的潜能尚不明确。目的:检测贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能贴壁的细胞是否能够分化为破骨细胞。方法:采用贴壁法得到小鼠原代间充质干细胞,以及通过贴壁1-5 d后得到不同时间贴壁的骨髓细胞。原代间充质干细胞及不同时间贴壁的骨髓细胞分别用普通培养基,及含m-csf和RANKL培养基,培养9 d后进行碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色。原代间充质干细胞传代后,第2代间充质干细胞分为4组,分别用普通培养基、含m-csf培养基、含RANKL培养基及含m-csf和RANKL的培养基培养,9 d后进行碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色。结果与结论:贴壁法得到较均一的间充质干细胞,原代及传代贴壁细胞的联合诱导组抗酒石酸酸性磷酸酶染色均为阳性,说明原代和传代的贴壁骨髓细胞中均有可以分化为破骨细胞的细胞。不同时间贴壁的细胞诱导后碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色有差异,说明不同时间贴壁的细胞存在分化差异。
- 陈婧马纪孙奋勇
- 关键词：骨细胞破骨细胞造血细胞
- miR-940慢病毒表达载体的构建以及对鼻咽癌细胞的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建microRNA-940(miR-940)的慢病毒表达载体,制备重组慢病毒感染人鼻咽癌细胞5-8F,检测其对细胞迁移和增殖的影响。方法构建慢病毒载体,包装后感染人鼻咽癌细胞,通过加药筛选方法获得稳定过表达miR-940的人鼻咽癌细胞株5-8F/miR-940。实时定量PCR(RT-PCR)检测miR-940的表达量。MTT测定miR-940对5-8F体外增殖的影响。划痕试验检测miR-940对5-8F迁移的影响。结果构建稳定过表达miR-940的慢病毒表达载体。MTT证明miR-940可以抑制5-8F在体外的增殖。划痕试验说明miR-940可以抑制5-8F的迁移能力。结论 miR-940能够抑制5-8F在体外的增殖以及迁移能力。
- 陈婧孙奋勇马纪
- 关键词：鼻咽肿瘤细胞迁移细胞增殖
- 人血小板源性生长因子受体β启动子的结构与功能分析被引量：2
- 2010年
- 通过PCR扩增人血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)基因启动子片段,经双酶切后克隆到pGL3-basic载体构建了5个PDGFR-β基因启动子5′系列缺失重组载体,与作为内参的pRL-TK共转染人脐静脉内皮细胞(ECV304,HUVEC)后,通过荧光素酶活性检测鉴定出人PDGFR-β启动子中具有转录调控作用的2个活性区(-983～+53)和(+540～+1457),前者执行正调控,后者则起负调控作用.这2个转录活性区分别含有在人、大鼠、小鼠PDGFR-β基因启动子区都高度保守的区域A-box、B-box和C-box,凝胶迁移或电泳迁移率检测(EMSA)证实,核因子能与B-box*、C-box*特异结合.
- 张传宇孙奋勇时宿妹马纪谢秋玲
- 关键词：人脐静脉内皮细胞启动子血管生成
- 核因子Y介导成骨相关细胞中FGFR2启动子的基础活性
- 目的:成纤维生长因子（FGFR2）在骨的发育过程中具有十分重要的调控作用。但目前对于FGFR-2表达的调控机制的研究仍然不是很清楚。因此,本论文主要进行对成骨相关细胞中FGFR-2基因表达的转录调控机制及染色质开放状态进...
- 马纪
- 关键词：FGFR2启动子NF-Y
- 文献传递
- miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。
- 陈婧孙奋勇马纪
- 关键词：人膀胱癌细胞细胞增殖细胞迁移
