刘旭
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
- 发文基金：云南省烟草专卖局(公司)科技项目湖北省烟草公司科技项目国家烟草专卖局基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析被引量：17
- 2015年
- 【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD600值变化测定其对温度、p H、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1,噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1—2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目(Caudovirales),肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为ds DNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10—100 k D,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围(31—317 kb);生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏
- 高苗杨金广刘旭刘伟孙航军申莉莉钱玉梅杨清林余广宏李锡宏王凤龙
- 关键词：青枯雷尔氏菌噬菌体生物学特性
- 一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌菌株
- 本发明公开了一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)菌株，菌株代号为L1，该菌株于2014年10月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC ...
- 战徊旭王凤龙申莉莉杨金广钱玉梅陈德鑫刘伟刘旭
- 文献传递
- 一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析
- 2015年
- 通过在E.coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体,利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E.coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸,并分别用DNaseⅠ和RNase A对总核酸进行消化,利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切;增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩,取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征,并进行SDSPAGE电泳分析,确定其蛋白条带;同时测定其他生物学特性,包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明：分离并纯化出1株E.coli烈性噬菌体,命名为ΦTRI-1,形态特征：头部为二十面体的立体对称,直径约为60 nm,有一长尾,长约200 nm;其核酸属于双链DNA,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,长尾噬菌体科（Siphoviridae）的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI-1对E.coli的最佳感染复数为0.1,潜伏期约为20 min,爆发期约为60 min,裂解量约为38;ΦTRI-1在40℃时活性最高,在20-70℃活性均较强,80℃时活性丧失;其酸碱耐受力较强,在偏碱环境下活性相对更高;对紫外线有一定的耐受能力;对氯仿敏感,浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,综合其各项生物学特性可知其潜伏期短,裂解能力强,环境适应能力强,具有很好的杀菌效果,具有开发为抗E.coli菌剂的潜力。
- 高苗杨金广孙航军刘旭刘伟王凤龙
- 关键词：ESCHERICHIACOLI噬菌体生物学特性
- 高温介导N基因对TMV免疫丧失的代谢轮廓分析被引量：2
- 2016年
- 高温(>28℃)可引起含N基因的免疫寄主对TMV抗性丧失,导致TMV系统侵染。本研究以枯斑三生(Nicotianatabacum var.Samsun NN)烟草为研究材料,采用代谢组学方法,系统研究25℃和31℃条件下,TMV未侵染和TMV侵染12 h、24 h和48 h枯斑三生烟草的代谢差异。应用气相色谱与质谱联用(GC-MS)技术,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析法(OPLS-DA)对不同温度下代谢产物的差异性进行分析。结果表明:GC-MS技术共检测到49种代谢物包括氨基酸类、糖类、有机酸类、脂肪酸类、醇类以及多胺类等。在25℃常温条件下,TMV侵染枯斑三生烟引起苹果酸、水杨酸、γ-氨基丁酸、脯氨酸和乙醇胺等代谢物含量上调,而在31℃高温处理N基因失活后,TMV侵染导致组织蔗糖和肌醇含量下调、葡萄糖和果糖含量上调以及伴随氨基酸类含量普遍上调。
- 刘旭王耀峰余广宏宋玉川王杰申莉莉王凤龙杨金广
- 关键词：TMV代谢N基因
- 高温介导N基因对TMV免疫丧失的代谢轮廓分析
- 高温(>28℃)可引起含N基因的免疫寄主对TMV抗性丧失,导致TMV系统侵染。本研究以枯斑三生(Nicotiana tabacum var.Samsun NN)烟草为研究材料,采用代谢组学方法,系统研究25℃和31℃条件...
- 刘旭王耀峰余广宏宋玉川王杰申莉莉王凤龙杨金广
- 关键词：TMV代谢N基因
- 文献传递
- 一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌菌株
- 本发明公开了一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌(Alcaligenes？faecalis)菌株，菌株代号为L1，该菌株于2014年10月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC？...
- 战徊旭王凤龙申莉莉杨金广钱玉梅陈德鑫刘伟刘旭
- 文献传递
