胡博
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
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- 小鼠IL-35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2012年
- 目的克隆小鼠白细胞介素-35(IL-35)基因并在大肠杆菌中表达和纯化。方法用RT-PCR方法从小鼠脾脏扩增出IL-35的两个亚基Ebi3和p35的成熟肽基因片段,采用重叠PCR法将Ebi3基因和p35基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到的融合基因片段先克隆于pMD19-T载体,再亚克隆到表达载体pET-30b(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测目的蛋白,用Ni螯合层析方法纯化表达产物。结果从小鼠脾细胞总RNA中扩增出Ebi3和p35的基因片段,重叠PCR法得到的融合基因经鉴定含预期序列;构建的重组表达载体pET-30b(+)-IL-35在BL21(DE3)中经IPTG诱导后表达出约50kd的融合蛋白;West-ern blot检测结果显示,该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;经Ni螯合层析方法纯化获得单一蛋白条带。结论小鼠IL-35在大肠杆菌中表达并纯化,为进一步研究其功能及应用价值奠定了良好的基础。
- 房红莹赵李祥吴燕胡博刘跃均刘海燕
- 关键词：基因克隆原核表达小鼠
- 小鼠白细胞介素15慢病毒载体的构建和表达被引量：2
- 2010年
- 目的:克隆小鼠白细胞介素15(IL-15)基因,并构建可表达小鼠IL-15基因的重组慢病毒。方法:根据小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭载体相应的酶切位点设计合成PCR引物;提取小鼠脾脏总RNA,逆转录PCR扩增小鼠IL-15基因的编码区;克隆小鼠IL-15基因的编码区,并进行基因测序;构建含有IL-15基因的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG,Western Blot检测IL-15基因在MEG细胞中的表达。结果:含有小鼠IL-15基因编码区的慢病毒穿梭质粒构建成功,基因测序结果完全正确;含有小鼠IL-15基因的慢病毒载体包装成功;所得病毒上清可成功感染MEG细胞,流式细胞术检测阳性率可达98%;Western Blot结果证明小鼠IL-15基因在MEG细胞中正常表达。结论:成功扩增、克隆了小鼠IL-15基因,并建立其慢病毒表达系统,从而为后续的基础及应用研究工作奠定了基础。
- 胡博林丹丹张胤晟包光明单琳赵昀刘海燕
- 关键词：白细胞介素15慢病毒载体小鼠
- IL-23促进肝细胞肝癌细胞的生长和迁移被引量：3
- 2015年
- 目的研究IL-23在体内外对肝细胞肝癌发展的影响。方法采用慢病毒体系将构建好的IL-23质粒转入Hepa1-6肝癌细胞株中,流式分选得到过表达IL-23的Hepa1-6稳转细胞,ELISA确定所得到的稳转细胞能够表达高水平的IL-23。采用MTT方法检测IL-23对Hepa1-6细胞增殖的影响,流式细胞染色法检测IL-23对Hepa1-6细胞周期的影响,通过原位种植Hepa1-6细胞建立肝癌模型,检测IL-23体内在肝细胞肝癌发展中的作用。结果 IL-23能够明显促进肝癌细胞的增殖,然而对肝癌细胞的凋亡却没有影响,IL-23在体外促进肝癌细胞的迁移水平,并且在小鼠肝癌模型中,IL-23在体内能够促进肝癌的发展。结论IL-23在体内体外能够直接促进肝细胞肝癌的发展。
- 刘永浩宋媛雷蕾林丹丹胡博刘海燕
- 关键词：IL-23肝细胞肝癌增殖细胞周期
- 抗CD40单链抗体的慢病毒载体的构建和表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv),并构建可表达大鼠抗小鼠的抗CD40抗体的单链抗体(CD40-scFv)的重组慢病毒。方法采用RT-PCR法从分泌大鼠抗小鼠抗CD40激活型抗体的杂交瘤细胞株(FGK-115)中克隆VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD40抗体的scFv基因,将CD40-scFv基因连接至PEGM-T克隆载体,限制性内切酶酶切及测序鉴定;构建含有大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起通过磷酸钙法感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG-01,检测其感染效率。结果含大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)的慢病毒穿梭质粒构建成功;通过磷酸钙感染293T细胞所得病毒上清可成功感染MEG-01细胞,流式细胞术检测阳性率可达96%。结论成功克隆了大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)基因,并建立其重组慢病毒表达系统,为后续的实验及应用研究工作奠定了基础。
- 文丽君赵李祥王征胡博赵昀刘海燕
- 关键词：CD40SCFV慢病毒载体
- 快速高效构建小鼠体内成像肿瘤模型的方法学平台被引量：3
- 2013年
- 目的建立小鼠肿瘤模型,并用体内成像的方法进行检测,降低传统方法中的系统误差与人为测量错误,提高模型的准确性与客观性。方法构建萤火虫素酶的慢病毒表达载体,体外包装能表达萤火虫素酶的慢病毒颗粒。用病毒颗粒转染目标细胞,筛选出稳定表达萤火虫素酶的目标细胞系。体外运用双荧光素酶分析系统进行质控检测,通过后建立小鼠肿瘤模型,最后使用活体成像的方法对小鼠肿瘤模型中肿瘤的大小进行定量分析,以评估小鼠肿瘤模型的恶化程度。结果成功构建含有萤火虫素酶基因的慢病毒质粒;包装能正确表达具有功能活性萤火虫素酶的慢病毒颗粒;使用病毒颗粒感染目标细胞并筛选出能表达萤火虫素酶的稳转细胞系;建立小鼠皮下肿瘤模型,并利用活体成像的方法对肿瘤大小进行定量分析。结论通过该种方法可以建立表达萤火虫素酶的稳转细胞系,利用体内成像的检测方法可以准确的对肿瘤模型的发生发展进行评估。
- 张胤晟林丹丹雷蕾胡博王仲娟刘海燕
- 关键词：慢病毒活体成像
- 携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗对肝癌的免疫治疗效应被引量：1
- 2016年
- 目的研究携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗的抗肝癌作用。方法鸡胚扩增新城疫病毒LX/(IL-7),体外感染Hepa1-6细胞,显微镜下观察LX/(IL-7)的裂解性特征,并采用ELISA的方法检测感染Hepa1-6细胞后IL-7的表达水平;将C57BL/6小鼠分为2组,每组5只,通过皮下接种5×106个Hepa1-6细胞建立小鼠肝癌模型。成瘤1周后,200μg/ml丝裂霉素C处理的2×107/ml Hepa1-6细胞感染LX/(IL-7)病毒制成肿瘤疫苗。对照组小鼠皮下接种丝裂霉素C处理的Hepa1-6细胞,每只接种1×106个细胞,实验组接种瘤苗,每只接种1×106个细胞,每周2次。测量肿瘤体积,通过流式检测小鼠脾脏细胞免疫反应。结果 LX/(IL-7)病毒具有非裂解性特征,可以高效地感染肝癌细胞并分泌IL-7。肝癌皮下模型的结果表明LX/(IL-7)修饰的Hepa1-6瘤苗具有较好的肿瘤免疫治疗效果,流式结果显示其可增强效应T细胞的比例,促进T细胞的免疫应答。结论携带IL-7的新城疫病毒修饰的自体肿瘤疫苗具有显著抗肝癌作用。
- 郭灵华赵李祥梅雨胡博刘海燕
- 关键词：新城疫病毒IL-7肝癌
- 供体NK细胞及白细胞介素15对非清髓性异基因造血干细胞移植的促进作用
- ＜正＞目的:本研究旨在探讨植入供体NK细胞及腹腔注射IL-15在非清髓性处理的异基因造血干细胞移植中对植入和免疫重建的影响。方法:采用SPF级C57BL/6（H-2b）小鼠做为供体鼠,同时用所获取的造血干细胞体外培养供体...
- 胡博梁勇林丹丹包光明张胤胜吴康吴德培刘海燕
- 文献传递
- 辐照对水流动力学注射介导的小鼠体内基因表达的影响
- 2011年
- 目的探寻辐照对水流动力学注射(HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内的表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性。方法将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因的真核表达质粒PGL3-luc。于注射后6h腹腔注射荧光素酶底物,并通过活体动物体内光学成像系统检测基因表达的初始水平。将辐照组小鼠进行700c Gy非清髓性全身照射,并于水流动力学注射后12、24、48、72、96、120 h通过活体动物体内光学成像系统对两实验组小鼠体内目的基因的表达水平进行监测。结果通过尾静脉进行水流动力学注射的PGL3-luc质粒在注射后6h于小鼠肝脏大量表达,其平均表达水平为(3739±924.8)相对荧光单位(RLU)/(sec·mg)蛋白。在各个时间监测点辐照组与非辐照组相比实验鼠体内基因表达水平差异均有统计学意义(均P>0.05),其表达水平均于水流动力学注射72 h后显著降低。结论小鼠移植前的辐照预处理对水流动力学注射介导的基因在小鼠体内的表达并无影响,该种新型基因转移表达方法可以有效地应用于小鼠造血干细胞移植模型中。
- 包光明胡博张胤晟赵雷卞士中刘海燕
- 关键词：辐照造血干细胞移植
- 微环DNA诱导表达方法的优化和体内表达
- 2016年
- 目的通过对微环DNA的表达步骤进行优化来提高微环DNA的诱导表达量以及降低诱导表达后的母环污染,并利用微环DNA构建一个能进行体内活体成像的表达系统。方法通过改变诱导培养基中加入L-阿拉伯糖的次数以及改变培养时间来提高DNA表达量、降低母环污染。通过Furin和2A将靶基因和萤火虫素酶基因(luciferase)连接到微环DNA中,再利用高压水流动力学注射的方法使目的基因在小鼠体内表达,通过活体成像检测萤火虫素酶的表达信号来监控和检测目的基因的表达。结果成功提高了微环DNA的表达量,降低了质粒的母环污染,建立可通过活体成像系统鉴定靶基因表达的系统。结论通过对微环DNA表达过程的优化大大提高了DNA的表达量,并且可以通过构建的微环DNA系统来监测靶基因在体内的表达情况。
- 雷蕾林丹丹张胤晟胡博刘海燕
- 关键词：活体成像
