- miR-146a/b在Hep3B细胞中的表达及上下游调控机制探讨被引量：2
- 2016年
- 目的:探究miR-146a/b在Hep3B的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白。方法:MTT法检测人正常肝细胞株LO2和人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的增殖活性。分别提取3个细胞的总RNA和蛋白,应用RT-qPCR和蛋白印记法分别检测细胞株中miR-146a/b的表达和细胞外调节激酶1/2(ERK)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IκBα)、白介素1受体关联激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)的蛋白水平。用抑制剂分别抑制Hep3B细胞PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号分子的活性并检测miR-146a/b的表达水平及IRAK1、TRAF6的蛋白水平。结果 Hep3B细胞增殖活力和miR-146a/b表达水平显著高于LO2和HepG2(P<0.01)。蛋白印记结果显示,以LO2为对照组,Hep3B细胞的pERK1、ERK1、p-AKT、IκB的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;IRAK1、TRAF6的蛋白水平明显降低,分别为LO2的0.23和0.003倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκB和IRAK1蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和2.69倍。抑制Hep3B细胞的PI3K和AKT活性12 h和24 h,miR-146a和miR-146b的表达水平显著降低(P<0.05);抑制ERK和NF-κB的活性12 h和24 h,miR-146a/b的表达水平没有显著变化。抑制PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号通路活性均可上调TRAF6和下调IRAK1的蛋白表达水平。结论:在恶化程度较高的Hep3B细胞中,PI3K/AKT可通过上调miR-146a/b的表达进而下调TRAF6的蛋白水平,这一机制为肝肿瘤发生发展的机理研究提供了重要线索。
- 董建一王欣欣王康伟陈军李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：PI3K/AKTTRAF6
- 肝癌细胞miR-183表达及上下游调控机制探讨被引量：3
- 2016年
- 目的 miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究探讨肝癌细胞Hep3B中miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化。方法 MTT法检测人正常肝细胞株LO2及人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的细胞增殖活性。提取细胞的总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和蛋白印迹法分别检测细胞株中miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)、磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶(phospho-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα)和程序性细胞死亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD4)的蛋白水平。用抑制剂分别抑制Hep3B细胞ERK、PI3K、AKT和NF-κB信号分子的活性并检测miR-183的表达水平及PDCD4蛋白表达水平。结果 LO2、HepG2和Hep3B细胞在48h的增殖倍数分别为8.76±0.22、16.61±1.59和19.86±0.69,F=159.90,P<0.001。与LO2(41.68±9.62)和HepG2(41.53±1.20)细胞相比,Hep3B(69.15±11.02)的miR-183细胞表达水平显著升高,F=10.250,P=0.012。与LO2相比,Hep3B细胞的p-ERK1、ERK1、p-AKT和IκBα的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;PDCD4的蛋白水平明显下降,为LO2的0.14倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκBα和PDCD4蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和7.90倍。抑制ERK的活性后24h,miR-183表达水平显著上升,F=215.459,P<0.001;抑制Hep3B细胞的PI3K活性后12和24h,miR-183表达水平显著降低,F=80.215,P<0.001;抑制AKT的活性后12和24h,miR-183表达水平显著下降,F=101.947,P<0.001;抑制NF-κB的活性后12和24h,miR-183表达水平没有显著变化,F=1.826,P=0.216。抑制ERK和NF-κB信号分子活性对PDCD4的蛋白表达没有显著影响。抑制PI3K和AKT信号分子活性可明�
- 王欣欣崔海鹏董建一李慧玲陈军王福金王爱国王靖宇
- 关键词：ERKPI3K/AKTNF-KBPDCD4肝癌
- 肝癌细胞 miR-183 的表达及上下游调控机制的探讨
- 目的：MiRNA在肝肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。其中，miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征，但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究旨在探讨肝癌细胞 Hep3B，H-ras12V转基因小鼠肝肿瘤组...
- 王欣欣
- 关键词：肝癌细胞
- 文献传递
- ERK信号通路调控Spink3在肝癌中的表达
- 2017年
- 目的探究Spink3在小鼠肝癌组织中的表达调控机制。方法采用RT-qPCR方法检测SPINK1在人肝癌及Spink3在H-ras12V转基因肝癌中的mRNA表达水平。采用Western blot和RT-q PCR法检测原代培养小鼠肝癌组织和肝癌旁组织中的ERK和mTOR信号通路的变化及Spink3的mRNA表达水平。体内抑制ERK和mTOR信号分子活性,检测其对Spink3 mRNA表达水平的影响。结果与肝癌旁组织相比,SPINK1和Spink3的mRNA水平分别在人肝癌组织和小鼠肝癌组织中显著升高(P<0.05)。在原代培养的小鼠肝癌和肝癌旁组织中,与0 h相比,随着体外培养时间的延长(6、12、24、48 h),p-ERK和p-mTOR信号分子水平明显下降;与此相一致,Spink3的mRNA的表达水平也显著降低(P<0.01)。体内抑制ERK信号分子的活性,显著下调了Spink3的mRNA表达水平(P<0.05)。但体内抑制mTOR信号分子的活性,对Spink3的mRNA表达没有显著影响。结论 SPINK1/Spink3在肝癌组织中过表达,有望成为肝癌的临床诊断指标。ERK通路可能是上调Spink3表达的主要信号通路。
- 王康伟王欣欣戎卓娜樊婷婷李娟王玉琨王福金王爱国王靖宇
- 关键词：ERKMTOR肝癌
