张玉富
- 作品数：4 被引量：10H指数：1
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划天津市科技攻关计划天津市科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 改变中心碳代谢途径对发酵生产L-亮氨酸的影响被引量：1
- 2021年
- 以一株L-亮氨酸生产菌谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)CP为研究对象,研究高活性磷酸转酮酶(PKT,fxpk编码)的表达对其产酸的影响.首先研究过表达PKT对C.glutamicum CP产酸的影响,副产物L-丙氨酸的积累减少.通过删除ltbR(leucine and tryptophan biosynthesis regulator),插入P_(tuf)-fxpk表达盒,弱化gltA(编码柠檬酸合酶)的表达,获得菌株C.glutamicum CPΔltbR∷P_(tuf)-fxpkΔP_(gltA)∷P_(dapA),其生长速率下降,L-亮氨酸的产量(53.0 g/L)提高10.0%,同时副产物L-丙氨酸减少33.3%,转化率提高23.5%.本研究获得L-亮氨酸的工程菌,较出发菌具有一定优势.
- 陈宁孙鹏杰李澜潇张玉富张玉富
- 关键词：L-亮氨酸谷氨酸棒杆菌发酵
- 一株高效氧化胆固醇的简单节杆菌构建与转化条件优化被引量：1
- 2016年
- 为实现胆固醇的高效生物氧化,利用基因工程手段将编码简单节杆菌胆固醇氧化酶的DNA片段克隆到质粒pTY2中,构建pTY2-5332插入表达载体。该载体以简单节杆菌基因组中的16S rDNA位点为整合点,提高了胆固醇氧化酶在基因组中的拷贝数,实现了简单节杆菌胆固醇氧化酶的过表达。重组菌的生长实验分析表明,插入到16S rDNA位点的胆固醇氧化酶没有影响简单节杆菌的生长。重组菌可在20h将2g/L的胆固醇完全转化为4-胆甾烯-3酮,比原始菌的转化时间缩短了4h,提高了胆固醇的转化效率。经过转化条件优化确定了该重组菌以2%的接种量后继续培养16h,然后胆固醇经120目过筛后投料量为2g/L,并添加2%(体积比)二甲基甲酰胺作为促溶剂;胆固醇添加18h后可完全转化为4-胆甾烯-3-酮,是优化前的1.11倍。
- 张璟张玉富秦慧民毛淑红路福平
- 关键词：简单节杆菌胆固醇氧化酶胆固醇RDNA
- 生物素及膜偶联间歇透析发酵对黄色短杆菌生产L-亮氨酸的影响被引量：8
- 2019年
- 生物素作为微生物的生长因子,对生长速率、细胞膜通透性、代谢产物的生成等方面具有重要作用。为提高黄色短杆菌产L-亮氨酸产量,降低副产物生成,在30 L发酵罐水平研究了在培养基中添加20、50、80、120μg/L四种不同质量浓度生物素,对黄色短杆菌产L-亮氨酸的影响。结果表明:培养基中添加50μg/L生物素,黄色短杆菌发酵44 h,L-亮氨酸的产量最高,达到60 g/L,糖酸转化率为22%,副产物L-丙氨酸的质量浓度为8 g/L。在最适生物素浓度下,发酵36 h后,采用膜偶联间歇透析发酵工艺,发酵周期延长至56 h,L-亮氨酸的糖酸转化率为25%,较普通发酵工艺约提高13. 6%,副产物L-丙氨酸的浓度降低约71. 3%,L-亮氨酸的总产量提高了16. 7%。研究结果对提高糖利用率、降低副产物、提高生产效率等方面具有重要意义。
- 张玉富熊海波徐庆阳陈宁
- 关键词：生物素黄色短杆菌L-亮氨酸
- 来源于红球菌胆固醇氧化酶ChOG的异源表达、纯化及催化反应结构分析
- 2017年
- 胆固醇氧化酶是胆固醇代谢过程中的关键酶,临床上用胆固醇氧化酶作为检测血清胆固醇含量的应用潜力巨大。将来源于红球菌Rhodococcus ruber的胆固醇氧化酶Ch OG,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,在不同条件下进行诱导表达,结果表明:BL21(DE3)菌株在诱导温度为16℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L时,Ch OG可溶性表达量最高(0.49 mg/ml)。Ch OG的最适反应温度为30℃,最适反应p H为7.5。最适反应条件下,酶活性达到8.0 U/mg。利用TLC、HPLC对Ch OG催化产物胆甾-4-烯-3-酮进行了鉴定分析。三维结构及定点突变分析表明Glu406及Arg408、Glu261在进行胆固醇C3羟基的脱氢、质子传递,以及底物异构化方面发挥着重要作用。
- 张玉富王建文李松涛朱张亮路福平毛淑红秦慧民
- 关键词：胆固醇氧化酶分离纯化
