张庭芳
- 作品数：19 被引量：74H指数：6
- 供职机构：北京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学理学医药卫生农业科学更多>>
- 丙酮酸氧化酶激活机制的研究——α-肽与磷脂囊的结合
- 1990年
- 丙酮酸氧化酶既能被两性脂类激活,也能被蛋白酶从羧基端切下一个23肽(称α-肽)激活,而且这两种激活方式相互排斥。本文用分离纯化的α-肽,通过测定色氨酸荧光能量转移的方法,证明α-肽能与磷脂囊(vesicle)结合。我们选用两种不同类型的荧光探针,发现α-肽对它们表现不同的色氨酸能量转移效率。α-肽对Dan-syl-DPPE为7.4±1.0％对Dansyl-UAPC为12.5±2.0％。由此推测α-肽的色氨酸残基易与磷脂双层内部疏水区结合,说明α-肽是一种较为疏水的肽。我们推测α-肽在这种外膜酶的激活过程中,提供了与膜结合的部位,在生理过程中起着重要作用。
- 张庭芳L.P.Hager
- 关键词：丙酮酸氧化酶
- 胰蛋白酶分子中二硫键Cys129－Cys232的定位改造研究被引量：9
- 1996年
- 对胰蛋白酶所特有的二硫键［１２９，２３２］进行了定位改造，将Ｃｙｓ突变为Ｓｅｒ，以观察其对胰蛋白酶稳定性及活性的影响。采用蛋白质工程的方法，构建了三个突变体Ｃ１２９Ｓ、Ｃ２３２Ｓ和Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ．在Ｅ．ｃｏｌｉＸ－９０菌体中进行表达，表达产物用含胰蛋白酶特异性底物ＴＡＭＥ的活性胶检测活性，发现Ｃ２３２Ｓ丧失胰蛋白酶活性，而Ｃ１２９Ｓ和Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ保留了胰蛋白酶活性。在盐酸胍作用下比较双突变体和野生型胰蛋白酶活性，发现突变体Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ的稳定性有所降低。结果表明二硫键Ｃｙｓ１２９－Ｃｙｓ２３２对于胰蛋白酶的活性是非必需的，可能在稳定蛋白质的结构上发挥着重要作用。
- 王军唐建国张庭芳张龙翔
- 关键词：胰蛋白酶二硫键定位突变
- 大熊猫脑钙调素的纯化及性质研究被引量：1
- 1999年
- 以大熊猫脑为材料，经提取、热处理、ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ疏水柱和快速液相分子筛层析，分离纯化得到ＣａＭ．经ＳＤＳＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ和ＩＥＦ鉴定，得到的ＣａＭ为一条带．经测定，大熊猫脑ＣａＭ的分子质量为１９ｋｕ，等电点为３８．酶活性实验表明大熊猫脑ＣａＭ对牛心磷酸二酯酶有激活作用．氨基酸组成分析结果与其他来源ＣａＭ相近．
- 张燕红张庭芳
- 关键词：钙调素大熊猫疏水层析CAM
- 蚯蚓钙调素二级结构的研究及Ca^(2+),Tb^(3+)的影响被引量：2
- 1997年
- 运用ＦＴ－ＩＲ方法的分辨率增强及曲线拟合技术对水化膜中蚯蚓钙调素ＣａＭ的二级结构以及加入不同比例Ｃａ２＋、Ｔｂ３＋后ＣａＭ二级结构的变化进行了研究。结果表明，水化膜中ＣａＭ及含不同比例Ｃａ２＋或Ｔｂ３＋的蛋白复合物的α－ｈｅｌｉｘ的含量较晶体和溶液中为低，而β－ｓｈｅｅｔ和ｔｕｒｎ结构的含量相对较高。研究发现不同比例金属离子的加入，引起了ＣａＭ二级结构不同程度的变化，但各类结构在总量上观察不到明显的变化规律，且由于结合机制的不同，Ｃａ２＋和Ｔｂ３＋的影响也各不相同。Ｔｂ３＋可与ＣａＭ中的Ｃａ结合位点结合，在一定条件下激活ＣａＭ，但在较高浓度下，Ｔｂ３＋的结合抑制ＣａＭ的活性。
- 王立波吴瑾光徐光宪王采芹张庭芳
- 关键词：FTIR蚯蚓钙调素铽离子
- 蚯蚓钙调素结合蛋白的研究被引量：11
- 1997年
- 以赤子爱胜蚓（ＥｉｓｅｎｉａＦｏｅｔｉｄａ）为材料，通过ＤＥＡＥ－ＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析、ＣａＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析，分离纯化得到蚯蚓钙调素结合蛋白（ＣａＭＢＰｓ）。纯化的ＣａＭＢＰｓ对ＣａＭ激活的环核苷酸磷酸二酯酶活性有抑制作用，而且这种抑制作用可通过加入过量的ＣａＭ达到完全恢复。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ＣａＭＢＰｓ有３条明显主带，在ＥＧＴＡ存在时表现分子量分别为６２，４９和３０ｋＤ。紫外扫描测定含量分别为７．１７％，７．３１％和５１．８％。用生物素－ＣａＭ覆盖法检测到３种ＣａＭ结合蛋白，与ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果一致。酶活性测定实验表明在蚯蚓ＣａＭＢＰｓ中有Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性，但无ＮＡＤ激酶活性。
- 张燕红张庭芳
- 关键词：钙调素结合蛋白蚯蚓钙调素
- 基因工程技术的重大突破──1993年诺贝尔化学奖被引量：3
- 1994年
- 基因工程技术的重大突破──１９９３年诺贝尔化学奖隋广超，张庭芳（北京大学生命科学学院北京１００８７１）１９９３年１０月１３日，在瑞典斯德哥尔摩的皇家科学院，１９９３年的诺贝尔化学奖被授予了两位从事生物化学研究的科学家，他们是美国的ＫａｒｙＢＭｕｌｌｉ...
- 隋广超张庭芳
- 关键词：基因工程PCR寡聚核苷酸定点诱变
- 大熊猫子宫钙调素的分离纯化和性质的研究被引量：2
- 1993年
- 以大熊猫子宫为材料分离纯化了钙调素(Calmodulin,CaM),经SDS-PAGE,PAGE和等电聚焦电泳鉴定,表现均一。分子量为18800道尔顿,等电点为3.6。该蛋白质分子的N-末端为封闭的。大熊猫子宫钙调素具有其它来源钙调素所特有的一些性质。对环核苷酸磷酸二酯酶有明显的激活作用,还发现对超氧化物歧化酶也有一定的激活作用。电泳行为受Ca^(2+)影响而出现特征性电泳改变,在含有Ca^(2+)的SDS凝胶电泳中,电泳速度比EGTA存在对略快,在PAGE中,有Ca^(2+)比无Ca^(2+)对电泳速度略慢。大熊猫子宫钙调素的氨基酸组成中,Phe/Tyr为8:2,可观察到钙调素特征性紫外吸收光谱。
- 申雪菲张庭芳
- 关键词：大熊猫子宫调钙蛋白提纯
- 聚-L-赖氨酸-琼脂糖亲和色谱介质的研制及应用被引量：1
- 1993年
- 用溴化氰活化法制备了聚-L-赖氨酸-琼脂糖亲和色谱介质。其配基的偶联量平均为2.5mg/ml胶,对猪胃蛋白酶的结合率为50mg/ml 胶。用其纯化猪胃蛋白酶,活性回收率在72%以上,提纯12倍。产品在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一条主带。
- 张庭芳赵涛张拥军郁楚良
- 关键词：赖氨酸琼脂糖介质
- 蚯蚓新钙结合蛋白(NCBP)的二级结构及Ca^(2+)、Tb^(3+)离子的影响被引量：8
- 1997年
- 应用红外光谱技术定量测定了水化膜中蚯蚓新钙结合蛋白（ＮＣＢＰ）的二级结构及在不同比例Ｃａ２＋、Ｔｂ３＋离子的作用下其二级结构的变化。结果表明，ＮＣＢＰ中α－ｈｅｌｉｘ含量较低而β－ｓｈｅｅｔ的含量较高，且随不同比例金属离子的加入，１６２９ｃｍ－１处β－ｓｈｅｅｔ峰的变化较明显。同时发现，ＮＣＢＰ具有钙结合蛋白家族特征的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ现象，但不具有激活ＰＤＥ靶酶的活性，初步认为，ＮＣＢＰ含有与Ｃａ２＋浓度相关的特殊的结构和功能。另外，高浓度下Ｔｂ３＋的结合引发ＮＣＢＰ的分子间聚合。
- 王立波吴瑾光徐光宪王采芹彭瑾张庭芳
- 关键词：蚯蚓铽离子钙离子
- 丙酮酸氧化酶在压力下的解离被引量：1
- 1992年
- 本文通过测定丙酮酸氧化酶内源荧光谱和荧光偏振的变化研究了该酶在1—2200bar压力下的解离。研究结果表明,在压力作用下酶的辅基FAD不可逆地从酶分子上解离下来,并因此引起酶的失活;酶亚基在压力下的解离是可逆的,在5℃,pH7.6条件下,该酶的解离自由能⊿G°为29.89k cal/mol,解离标准体积变化⊿V°为-220ml/mol。脱辅基丙酮酸氧化酶的解离自由能为24.93k cal/mol,证明FAD对酶有稳定作用;⊿V°则为-153ml/mol,减少了近30％,表明FAD对亚基间的空间大小有很大贡献。经胰凝乳蛋白酶部分酶解所活化的酶的解离⊿G°和⊿V°均有所增加,底物丙酮酸亦有相同的影响。研究还表明,碱性pH条件能促进丙酮酸氧化酶的解离。在此研究中,我们也观察到了Weber和Ruan在乳酸脱氢酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等研究中报道的"conformational drift"现象。
- 阮康成张庭芳
- 关键词：丙酮酸氧化酶解离
