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关岭牛PPARγ基因原核表达载体的构建及生物信息学分析: 2018年; 本研究旨在通过克隆关岭牛PPARγ基因CDS区及构建p ET32a（＋）-PPARγ真核表达载体。本研究通过RT-PCR技术克隆关岭牛PPARγ基因的CDS区,采用DNAStar和Ex PASy等软件对该基因CDS区进行序列分析;利用双酶切的方法构建原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,结果显示,关岭牛PPARγ基因的CDS区全长1 428 bp,编码475个氨基酸。本研究成功克隆了关岭牛PPARγ基因的CDS区,并构建了其原核表达载体p ET32a（＋）-PPARγ,为进一步研究PPARγ基因调控机制提供了理论基础。; 吴国文陈伟陈伟张青青许厚强周迪赵焕平; 关键词：PPARΓ基因原核表达载体

从江香猪ApoC3基因的克隆及亚细胞定位研究被引量：2: 2017年; 为了观察从江香猪载脂蛋白C3(ApoC3)基因及其表达产物在真核细胞中的亚细胞定位情况,以脂肪型小型猪从江香猪为研究对象,克隆ApoC3基因CDS区,构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoC3重组质粒,转染HEK-293T细胞。结果显示:从江香猪ApoC3基因与GenBank上公布的序列相比,在141位有1个碱基发生转换,由腺嘌呤(A)突变成鸟嘌呤(G),为无义突变;对ApoC3蛋白的亚细胞定位分析表明,该蛋白在胞外基质占55.6%,内质网占22.2%,液泡占11.1%,细胞质占11.1%。pEGFP-C1-ApoC3重组质粒转染HEK-293T细胞后的荧光共定位结果显示,ApoC3蛋白在细胞中表达部位与PSORT II Prediction软件预测结果一致。本研究结果为进一步构建ApoC3基因转基因动物模型,开展ApoC3基因的多态性变化而导致的相关疾病研究奠定了基础。; 卢贤君赵佳福苟维胜段志强赵焕平; 关键词：从江香猪基因克隆亚细胞定位

关岭牛MyoD基因原核表达载体的构建及生物信息学分析被引量：1: 2015年; 本实验采用RT-PCR方法克隆关岭牛MyoD基因的CDS区,利用Eco RⅠ、XhoⅠ酶对目的片段与pET32a(+)原核表达载体进行酶切,T4连接酶连接过夜,通过转化,测序,构建重组表达载体,并对该基因进行相关生物信息学分析。实验结果获得了关岭牛Myo D基因CDS区,成功构建了p ET-32a(+)-MyoD重组表达载体。MyoD基因编码区为954 bp,编码318个氨基酸,共有31个稀有密码子,表达蛋白大小为34.2 kD。该蛋白为水溶性蛋白,等电点p I=5.8,在体内带负电,二级结构中α-螺旋、无规则卷曲较多。蛋白没有信号肽和明显的跨膜区,为胞内蛋白,主要存在于细胞核中。重组载体表达的Myo D蛋白带有His等标签,蛋白大小为53.6 kD,共497个氨基酸。实验对关岭牛Myo D蛋白的理化性质、结构特点进行了初步分析,以期为研究牛MyoD蛋白特性及其作用机制奠定理论基础。; 夏丹许厚强陈伟陈祥周迪张雯桓聪聪赵焕平张青青孙成娟; 关键词：原核表达载体生物信息学

关岭牛肌球蛋白重链1基因5′侧翼启动子的克隆和生物信息学分析: 2018年; 本试验旨在进行关岭牛肌球蛋白重链1(myosin heavy chain 1,MYH1)5′侧翼启动子的克隆和生物信息学分析。采集关岭牛血液及组织样品(背最长肌、后腿肌、心脏、肝脏、小肠、脂肪组织),利用PCR方法扩增关岭牛MYH1基因5′侧翼区,构建关岭牛pUCm-T-MYH1克隆载体,并对MYH1基因5′侧翼区进行生物信息学分析,最后利用实时荧光定量PCR法测定了MYH1基因在关岭牛不同组织中的表达。结果显示,本试验成功获得1 373bp(-1 360^+12bp)的MYH1基因5′侧翼启动子序列;利用生物信息软件对获得的克隆序列进行分析发现,MYH1基因5′侧翼启动子序列存在5处可能的转录起始点和多个潜在转录因子结合位点;关岭牛与金丝猴、野猪、家鼠、藏羚羊、野驴的MYH1基因5′侧翼区保守性较强的区域为转录起始点上游-400^+100bp,推测转录起始点上游-400^+75bp可能是其核心启动子区域。实时荧光定量PCR分析发现,MYH1基因在关岭牛背最长肌和后腿肌中高表达,在心脏、肝脏、小肠、脂肪组织中表达量很低,说明MYH1基因表达具有组织特异性。; 陈伟陈伟许厚强周迪张青青赵焕平; 关键词：克隆启动子预测生物信息学分析

贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究被引量：7: 2017年; 试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorsγ,PPARγ)基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著(P<0.01),在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。; 张青青许厚强陈伟陈祥周迪夏丹赵焕平孙成娟王圆圆杨洋张鸣; 关键词：黄牛 PPARΓ基因实时荧光定量PCR

贵州从江香猪FoxO4、PRKAA1基因在不同组织中的表达分析被引量：3: 2017年; 为研究FoxO4、PRKAA1基因在从江香猪不同组织中的表达情况,本实验采用实时荧光定量PCR技术,检测FoxO4、PRKAA1基因的mRNA表达量,分析FoxO4、PRKAA1在贵州从江香猪不同组织的差异表达。结果显示,FoxO4基因mRNA在从江香猪所检测的9个组织样中均有表达,其中在脂肪组织中表达量最高,且差异极显著(p<0.01),在背最长肌组织中表达量最低;PRKAA1基因mRNA在从江香猪所检测的9个组织样中也均有表达,其中在肺组织中表达量最高,且差异极显著(p<0.01),在脂肪组织中表达量次之,在背最长肌组织中表达量最低。FoxO4、PRKAA1基因可能在肌内脂肪(IMF)沉积中发挥重要作用,为进一步研究FoxO4、PRKAA1的功能奠定基础。; 孙成娟许厚强陈伟陈祥周迪赵焕平吴萍张青青陈福; 关键词：荧光定量PCR

关岭牛FoxO6转录因子与MSTN启动子相互作用的机制研究: FoxO6转录因子属于FoxO转录家族（FoxO1，FoxO3a，FoxO4，FoxO6）的一员。在多种细胞类型中，FoxO转录因子家族在细胞周期、阻滞作用、抗氧化应激、细胞生存、能量代谢、细胞死亡等过程中发挥重要。并且...; 赵焕平; 关键词：C2C12细胞基因表达骨骼肌代谢

贵州从江香猪PDK4、FGF10基因的克隆及组织表达分析被引量：11: 2017年; 试验旨在克隆获得PDK4、FGF10基因,并研究大白猪与从江香猪不同组织中PDK4、FGF10基因mRNA的表达差异。采用RT-PCR分别克隆从江香猪PDK4、FGF10基因并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测PDK4、FGF10基因在大白猪和从江香猪不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,从江香猪PDK4基因的编码区全长1 224bp,编码407个氨基酸;FGF10基因的编码区全长636bp,编码211个氨基酸。经BLAST软件进行同源性比对,发现从江香猪PDK4基因与羊、马、人的核苷酸序列同源性分别为93%、92%和91%;FGF10基因与羊、牛、人、鼠的核苷酸序列同源性分别为94%、93%、93%和90%。由PDK4基因系统进化树可知,从江香猪与牛、绵羊亲缘关系较近;由FGF10基因系统进化树可知,从江香猪与绵羊、牛、人、猕猴亲缘关系较近,与小鼠和鸡亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果显示,在从江香猪不同组织中,PDK4基因在肾脏中的表达量最高,在胃和脂肪中表达量较高,FGF10基因在胃中表达量最高,在肾脏和脂肪中表达量较高,两个基因在背最长肌中的表达量均最低;在大白猪的不同组织中,PDK4、FGF10基因在脂肪中的表达量均最高,PDK4基因在背最长肌中的表达量最低,而FGF10基因在心脏中表达量最低。本试验成功克隆了从江香猪PDK4、FGF10基因,并检测了其在大白猪与从江香猪不同组织中的表达,为进一步研究PDK4、FGF10基因在脂质代谢及脂肪沉积等方面的调控作用提供科学依据。; 杨洋杨洋许厚强陈伟陈伟周迪徐敏孙成娟张青青赵焕平孙成娟; 关键词：从江香猪实时荧光定量PCR

从江香猪LMF1基因的克隆、亚细胞定位及组织表达研究被引量：2: 2017年; 为研究脂肪酶成熟因子1(LMF1)基因在从江香猪不同组织的表达情况及在真核细胞中的亚细胞定位情况,采用RT-PCR,Real-Time PCR,PSORT II Prediction软件结合荧光共定位的方法,克隆了从江香猪LMF1基因cDNA,构建了pEGFP-C1-LMF1真核表达载体,分析了LMF1基因在不同组织的表达差异和亚细胞定位情况.结果表明,从江香猪LMF1基因与GenBank上提交的其他猪种的同源性达到了100%;LMF1基因在脂肪中表达量最高,心中最低,且脂肪和小肠与其他7个组织相比,表达量均存在统计学意义(p<0.01);荧光共定位结果表明,LMF1基因主要集中在细胞质中表达.相关结果对后续研究LMF1蛋白与其互作蛋白在脂质代谢的作用机理奠定的基础.; 赵佳福苟维胜段志强赵焕平阮涌倪萌萌; 关键词：从江香猪基因克隆亚细胞定位荧光定量

猪FoxO4基因cDNA部分序列的克隆及其组织表达被引量：1: 2017年; 为探究FoxO4基因序列和组织表达特征,采用RT-PCR法从猪肝脏中克隆FoxO4基因c DNA的部分序列,采用荧光定量PCR对大白猪、从江香猪2个猪品种的不同组织m RNA表达进行了相对定量分析。结果:获得猪FoxO4基因615 bp编码区序列;FoxO4基因m RNA在大白猪所检测的9个组织样中均有表达,在肺中表达量最高,在脂肪中表达量次之;FoxO4基因m RNA在从江香猪所检测的9个组织样中也均有表达,在脂肪中表达量最高,在肺中表达量次之;在2个品种中FoxO4基因在肺、肾、大肠、脂肪中m RNA表达水平差异极显著(P<0.01)。; 孙成娟许厚强陈伟周迪张青青赵焕平王园园张鸣杨洋吴萍陈福; 关键词：从江香猪大白猪克隆

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赵焕平

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