杨坤丽
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
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- 雷帕霉素减轻氧糖剥夺对SH-SY5Y细胞的损伤被引量：2
- 2017年
- 目的:观察雷帕霉素(Rapa)对氧糖剥夺(OGD)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分为4组:正常对照组(常规培养,不进行OGD处理)、Rapa组、OGD组(无糖培养基、1%O_2的三气培养箱内孵育细胞12 h)和Rapa+OGD组。进行形态学观察;MTT法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)漏出率判断细胞损伤的程度;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ及自噬调控蛋白beclin-1的表达。结果:与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞存活率明显升高(P<0.05),LDH漏出率及caspase-3酶活性明显降低(P<0.05)。TUNEL染色观察结果显示,与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞凋亡明显减少(P<0.05);Western blot实验结果显示Rapa+OGD组的Bcl-2、beclin-1及LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平显著高于OGD组(P<0.05),而Bax蛋白水平明显低于OGD组(P<0.05)。结论:Rapa对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与上调beclin-1蛋白、激活自噬有关。
- 卢娜魏林郁王宝英李璐杨坤丽李东亮
- 关键词：雷帕霉素SH-SY5Y细胞氧糖剥夺自噬
- P2X7R介导的神经炎症在神经精神疾病中的作用被引量：7
- 2019年
- 嘌呤能P2X7受体(P2X7R)是腺苷三磷酸门控阳离子通道受体,作为嘌呤受体P2X家族受体亚型之一,主要由各种免疫细胞表达。P2X7R及其介导的信号通路可触发炎症反应的激活,具有介导先天免疫反应的重要作用。中枢神经系统的炎症反应能激活小胶质细胞,从而导致白细胞介素1β等炎性因子的释放,这些炎性因子促使组织变性、损伤及细胞的死亡。目前认为,神经炎症是神经退行性疾病、精神疾病和各种脑损伤的病理进程中的重要一环,也就成为人们试图干预这些疾病落脚点。
- 黄亚迪杨坤丽李雪盼贾肖扬李东亮
- 关键词：神经精神疾病小胶质细胞神经炎症白细胞介素1Β
- P2X_7受体阻断剂对三磷腺苷诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平的影响
- 2017年
- 目的观察三磷腺苷(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平变化的特点,并探讨P2X_7受体阻断剂对其的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞接种于含体积分数10%胎牛血清高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为4组,分别加入含0、1、3、5 mmol·L^(-1)ATP的培养液,每孔100μL,各组均分别作用15、30、60 min,然后用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluo-3/AM染细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度。另取对数生长期的SH-SY5Y细胞悬液接种于含体积分数10%胎牛血清高糖DMEM的96孔板中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为正常对照组、ATP组及KN-62低、中、高剂量组,正常对照组细胞在每孔100μL培养液中常规培养,ATP组细胞在每孔100μL含5 mmol·L^(-1)ATP的培养液中培养,KN-62低、中、高剂量组细胞分别每孔先用100μL含100、500、1 000 nmol·L^(-1)KN-62的培养液孵育30 min,每孔再用100μL的5 mmol·L^(-1)ATP培养液处理1 h,用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluro-3/AM染色细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染色细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度变化,图像分析软件记录结果,测每组细胞中Ca^(2+)的平均荧光强度。每次实验每组设3个平行复孔,实验重复3次。结果0 mmol·L^(-1)ATP组呈现荧光的细胞数量少,荧光强度弱;1、3、5 mmol·L^(-1)ATP组随着ATP剂量增加,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强;若ATP剂量相同,则随着ATP作用时间的延长,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强。正常对照组、ATP组、KN-62低、中、高剂量组细胞荧光强度分别为468.24±45.67、3 292.35±159.64、3 013.27±321.42、2 515.77±320.98、2 486.32±318.31,ATP组细胞平均荧光强度显著强于正常对照组(P<0.05);KN-62低、中、高剂量组细胞平均荧光强度均低于ATP
- 李秀娟王国红张利彬杨坤丽李超堃王璐宋景贵赵红岗李东亮
- 关键词：三磷腺苷人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞P2X7受体
- 亮蓝G干预大鼠急性CO中毒海马损伤的实验研究
- 背景一氧化碳是造成中毒性死亡最常见的有毒气体,可引起机体多个系统的损伤,其中缺氧引起的脑损伤是造成患者死亡的主要原因。急性一氧化碳中毒（Acute carbon monoxide poisoning,ACMP）后数小时会...
- 杨坤丽
- 关键词：急性一氧化碳中毒海马IL-1ΒIL-6
- 文献传递
- Beclin-1 shRNA对低氧诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响被引量：4
- 2018年
- 目的:构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法:构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-SY5Y细胞; RT-PCR检测Beclin-1的mRNA表达; Western blot检测Beclin-1蛋白表达; CCK-8法测定Beclin-1 shRNA对SH-SY5Y细胞活力的影响。再将空白对照、阴性对照、转染型三种细胞分别以21%常氧及5%低氧培养,Western blot检测各组细胞LC3蛋白表达;电镜观察自噬小体。结果:Beclin-1 shRNA能明显抑制SH-SY5Y细胞Beclin-1的mRNA及蛋白的表达;沉默Beclin-1基因后,Beclin-1 shRNA组细胞存活率与阴性对照组相比无差异;成功建立了稳定表达Beclin-1 shRNA的SH-SY5Y细胞。5%低氧处理后,与阴性对照组相比较,Beclin-1 shRNA组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下调,细胞内自噬小体数量减少。结论:慢病毒介导的Beclin-1shRNA对SH-SY5Y细胞的活力无影响,但可以抑制低氧诱导的自噬。
- 卢娜李成长罗晓秋杨坤丽
- 关键词：SH-SY5YBECLIN-1自噬短发夹RNA
- 亮蓝G在制备急性CO中毒的治疗药物中的应用
- 本发明公开了亮蓝G在制备急性CO中毒的治疗药物中的应用，实验证明：采用亮蓝G对急性CO中毒的大鼠进行腹腔注射，发现亮蓝G能够明显降低ACMP引起的大鼠死亡率，减轻ACMP大鼠海马组织的水肿情况，降低炎症反应，提高学习记忆...
- 杨坤丽李颖虹魏林郁张利彬黄亚迪李东亮
- 文献传递
- 探讨5-HT在睡眠/觉醒周期中的作用被引量：13
- 2017年
- 五-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)能神经元在中枢神经系统广泛存在,目前对其参与的众多生理功能研究较多,其中在睡眠/觉醒周期调节方面研究也很深入。现就其在睡眠和觉醒两方面的作用进行探讨。
- 王桂叶杨坤丽李东亮
- 关键词：5-HT慢波睡眠
- H2S抑制高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡与P2X7受体的相关性研究被引量：1
- 2017年
- 目的:研究H_2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用和可能的机制。方法:人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞、HEK 293和HEK 293-hP2X_7R细胞,分为对照组,Na HS组,KN-62组,ATP组,ATP+Na HS组和ATP+KN-62组。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33258核染色分析细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot和RT-PCR法分别检测Caspase-3、Bcl-2在蛋白和mRNA水平的表达。结果:与对照组比较,6 mmol/L ATP处理3 h后SH-SY5Y细胞损伤明显,活力降低至62.7%±3.8%(P<0.01),而凋亡率升高至30.75%±5.1%(P<0.01)。与ATP组比较,用200μmol/L Na HS和500 nmol/L KN-62预处理30 min,SH-SY5Y细胞活力分别升高至90.1%±3.8%和84.6%±3.1%(P<0.05),凋亡率则分别降低至14.73%±3.4%和18.32%±3.1%(P<0.01)。ATP组SH-SY5Y细胞内Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,但Na HS和KN-62可抑制Caspase-3表达,促进Bcl-2表达。与对照组和HEK293细胞比较,用2 mmol/L ATP分别处理HEK 293、HEK 293-h P2X7R细胞3 h,可见HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达上调(P<0.01)。与ATP组比较,200μmol/L Na HS预处理30 min,HEK 293-h P2X7R细胞内Caspase-3表达明显下调(P<0.01)。HEK 293细胞Caspase-3表达在各组无差异(P>0.05)。结论:H2S对高浓度ATP诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,且呈浓度依赖性,其作用机制可能与P2X7R相关。
- 李璐王娇娇杨坤丽李超堃王国红李新娟魏林郁卢娜赵红岗李东亮
- 关键词：P2X7受体神经系统疾病
- 亮蓝G在制备急性CO中毒的治疗药物中的应用
- 本发明公开了亮蓝G在制备急性CO中毒的治疗药物中的应用，实验证明：采用亮蓝G对急性CO中毒的大鼠进行腹腔注射，发现亮蓝G能够明显降低ACMP引起的大鼠死亡率，减轻ACMP大鼠海马组织的水肿情况，降低炎症反应，提高学习记忆...
- 杨坤丽李颖虹魏林郁张利彬黄亚迪李东亮
- 文献传递
