王文娟
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：山西省眼科医院更多>>
- 发文基金：山西省卫生厅科技攻关计划项目山西省回国留学人员科研经费资助项目山西省自然科学基金更多>>
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- CRISPR/Cas9技术在眼底新生血管性疾病治疗中的应用
- 2020年
- 成簇的规律间隔的短回文重复序列相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteins 9,CRISPR/Cas9)技术可用于靶向敲入、替换或敲除真核细胞基因。将血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)组装的特异Cas9核糖核蛋白于小鼠视网膜下注射,可明显减小激光诱导的脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)面积;小分子蛋白CjCas9靶向敲除视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)中VEGFA或缺氧诱导因子1基因亦可有效减小激光诱导的CNV面积,且其突变后维持时间可超过1年。在视网膜水平,利用CRISPR/Cas9技术将RPE细胞中的VEGFA或人视网膜微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HREC)中的VEGFR2基因敲除可明显抑制视网膜新生血管的生成;将内皮细胞诱导的小类泛素蛋白修饰分子(small ubiquit in-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶1基因敲低后SUMO化的VEGFR2聚集于高尔基体,亦可有效抑制病理性新生血管。将HREC中的p110δ敲除后,HREC的增生、迁移及成管能力均减弱。以PI3Kδ为靶点的药物idelalisib也有抑制病理性视网膜新生血管的作用。利用CRISPR/Cas9技术对天冬氨酸蛋白磷酸酶1基因敲除可使AKT磷酸化状态改变进而影响新生血管的生成。利用CRISPR/Cas9的协同激活介体系统筛选出AKT的阳性调节子AK023948,将AK023948敲低可抑制AKT的活性,进而抑制新生血管的生成。(国际眼科纵览,2020,44:408-413)
- 刘晋星周国宏王文娟王永瑞李静李会琳
- 关键词：新生血管形成PI3K/AKT通路
- 改良的后巩膜加固术治疗高度近视的疗效评估及护理被引量：7
- 2020年
- 高度近视又称病理性近视,多见于青少年,临床特点为屈光度、眼轴进行性增加,视力进行性下降,并伴有后巩膜葡萄肿甚至出现黄斑变性、视网膜劈裂、视网膜脱离等[1]眼底病变,导致患者的视力严重损害,影响患者的身心健康和生活质量。
- 刘亚妮赵小莹唐蓓张茜何瑨王文娟
- 关键词：黄斑变性后巩膜加固术病理性近视高度近视眼轴视网膜劈裂
- 组织蛋白酶B与血管内皮生长因子影响高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究被引量：6
- 2019年
- 目的探讨组织蛋白酶B(cathepsin B)与血管内皮生长因子(VEGF)在小鼠视网膜新生血管形成中的影响。方法选用清洁级C57BL/6J小鼠共44只,7～8日龄,雌雄不限。应用随机数字表法将其分为正常对照组和高氧处理组。其中,正常对照组11只小鼠(22只眼),高氧处理组33只小鼠(66只眼)。正常对照组小鼠在标准环境中生长;高氧处理组小鼠为建立视网膜新生血管动物模型,其环境除氧体积分数为(75±2)%,其他均相同,氧箱内饲养5 d后,将其返回到标准环境中。以视网膜表面出现新生血管簇、无灌注区,判定为造模成功。再应用随机数字表法将成模的小鼠随机分为模型对照组、实验对照组和实验组,每组11只小鼠(22只眼)。正常对照组和模型对照组不予任何药物干预,实验对照组和实验组分别给予玻璃体腔注射二甲基亚砜和溶于二甲基亚砜的CA-074 Me(cathepsin B抑制剂),继而在标准环境中饲养5 d。采用心腔注射荧光素标记葡聚糖,视网膜铺片法观察新生血管生成的情况;分别采用实时聚合酶链反应法和蛋白质印迹法检测小鼠视网膜组织中cathepsin B、VEGF信使核糖核酸(mRNA)相对表达量及蛋白的表达量。所有数据均以均数±标准差■表示。采用单因素方差分析比较各组总体差异,当差异有统计学意义时,再用SNK-q检验进行组间多重比较分析。结果在荧光显微镜下,实验组较模型对照组和实验对照组视网膜血管走行相对清晰,未见明显的缺血无灌注区。各组cathepsin B与VEGF mRNA及蛋白的表达量总体存在差异,差异有统计学意义(F=25.23,22.98,43.86,67.92;P<0.05)。模型对照组和实验对照组中cathepsin B与VEGF mRNA及蛋白的表达量均增高,而实验组中cathepsin B与VEGF的mRNA及蛋白的表达量则降低。实验组与正常对照组比较、实验对照组与模型对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CA-074 Me可抑制cathepsin B和VEGF�
- 王永瑞孔丽王文娟李宸宇周国宏
- 关键词：组织蛋白酶B视网膜新生血管化血管内皮生长因子
- 高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中CA-074 Me对JAK2/STAT3信号通路的影响被引量：2
- 2019年
- 目的研究高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中CA-074Me对JAK2/STAT3信号通路的影响。方法将44只健康的7日龄C57BL/6J小鼠应用随机数字表法随机分为:正常对照组(11只22眼)和高氧处理组(33只66眼)。正常对照组小鼠在自然环境中与母鼠共同喂养;高氧处理组小鼠与母鼠共同置于氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内5d后出氧箱,返回到自然环境中。应用随机数字表法将成模的12日龄小鼠随机分为模型组、实验对照组和实验组,每组11只22眼。正常对照组和模型组不予任何药物干预,实验对照组和实验组分别给予玻璃体腔注射DMSO和溶于DMSO的CA-074Me1μl,继而在自然环境中饲养5d。17日龄小鼠采用心腔注射荧光素标记葡聚糖,视网膜铺片法观察新生血管生成的情况;real-timePCR法和Westernblot法检测小鼠视网膜组织中JAK2、STAT3的mRNA及蛋白表达水平。结果在荧光显微镜下,实验组较模型组和实验对照组视网膜血管走行相对清晰,未见明显的缺血无灌注区。四组JAK2、STAT3mRNA及蛋白的相对表达量总体存在差异(P<0.001)。与正常对照组相比,模型组和实验对照组中JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达量均明显增高(P<0.05);与模型组和实验对照组相比,实验组中JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达量显著降低(P<0.05);实验组与正常对照组间,实验对照组与模型组间JAK2、STAT3mRNA及蛋白的表达无显著差别(P>0.05)。结论高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中JAK2和STAT3表达均增高,CA-074Me可下调JAK2/STAT3信号通路,对视网膜新生血管形成起到抑制作用。
- 王永瑞孔丽王文娟李宸宇周国宏
- 关键词：视网膜新生血管形成信号通路
- Genistein通过JAK2/STAT3信号通路抑制小鼠视网膜新生血管的形成
- 2020年
- 目的研究在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成过程中酪氨酸酶抑制剂Genistein的作用及其机制。方法将36只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠通过随机数字表法分为4组,分别为正常对照组、模型组、实验对照组和实验组,每组9只小鼠(即18眼)。正常对照组在自然环境中饲养,不予任何处理。于氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内饲养另外三组,5 d后返回到自然环境中饲养,实验对照组和实验组小鼠于出生第12天分别予玻璃体腔注射二甲基亚砜DMSO和金雀异黄素Genistein各1μl,而模型组不予处理。第17天时,对各组小鼠行视网膜血管荧光造影并铺片,观察视网膜血管的形态,并分别采用real-time PCR法和Western blot法检测各组小鼠视网膜中JAK2、STAT3 mRNA和蛋白的表达水平。结果视网膜血管荧光造影结果显示,正常对照组小鼠视网膜血管走形自然、清晰,未见新生血管;模型组和实验对照组小鼠视网膜血管可以观察到明显的新生血管簇,伴随着血管走形紊乱,其间可见明显的分支、分层现象;实验组小鼠视网膜新生血管簇较少,未见明显的血管分层、分支现象,走形比较自然。高氧诱导下的模型组和实验对照组小鼠视网膜中JAK2和STAT3的mRNA与蛋白的表达水平明显高于正常对照组,实验组小鼠视网膜中JAK2和STAT3的mRNA与蛋白的表达水平则明显低于模型组和实验对照组(均P<0.05)。结论Genistein可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路,进而抑制视网膜新生血管的形成。
- 李宸宇孔丽王文娟贺荣华王永瑞周国宏
- 关键词：酪氨酸激酶抑制剂信号通路视网膜新生血管
- Cathepsin B与视网膜新生血管形成的相关性研究
- 目的 确定在视网膜新生血管形成中Cathepsin B 与VEGF、JAK2/STAT3 的关系。方法 将C57BL/6J 7 日龄小鼠与其母鼠共同置于密闭氧箱5d,控制氧体积分数为(75±2)％,然后回到正常室内环境中...
- 王文娟
- 关键词：视网膜新生血管VEGFJAK2/STAT3
- 组织蛋白酶B和血管内皮生长因子在高氧诱导的视网膜新生血管中的作用被引量：4
- 2017年
- 背景血管内皮生长因子（VEGF）在血管发育和新生血管形成中起着关键作用。研究表明，组织蛋白酶B（Cathepsin B）参与新生血管的生成，但其具体机制尚不明确。目的探讨Cathepsin B和VEGF在高氧诱导小鼠视网膜新生血管中的表达及二者之间的关系。方法应用随机数字表法将44只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、高氧诱导组、空白对照（NC）-绿色荧光蛋白（GFP）-慢病毒（Lv）组和Cathepsin B-RNA干扰（RNAi）-Lv组，每组11只小鼠22只眼。正常对照组小鼠在自然环境中生长；其余3个组7日龄小鼠置于氧体积分数为（75±2）%的密闭氧箱内饲养5 d，之后返回到正常环境中。高氧诱导组的12日龄小鼠不给予任何药物干预；NC-GFP-Lv组和Cathepsin B-RNAi-Lv组的12日龄小鼠分别给予玻璃体腔注射NC-GFP-Lv和Cathepsin B-RNAi-Lv各1 μl。取各组17日龄小鼠，颈椎脱臼法处死后剥取视网膜，分别采用real-time PCR和Western blot法检测小鼠视网膜中Cathepsin B和VEGF mRNA及蛋白的相对表达量。结果荧光显微镜下Cathepsin B-RNAi-Lv组视网膜新生血管分层和分支均较高氧诱导组和NC-GFP-Lv组少。各组Cathepsin B和VEGF mRNA总体比较，差异均有统计学意义（F＝444.89，P＝0.00；F＝519.78，P＝0.00），其中高氧诱导组、NC-GFP-Lv组和Cathepsin B-RNAi-Lv组小鼠视网膜中Cathepsin B和VEGF mRNA的相对表达量均明显高于正常对照组，Cathepsin B-RNAi-Lv组小鼠视网膜中Cathepsin B和VEGF mRNA的相对表达量均明显低于高氧诱导组和NC-GFP-Lv组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。各组Cathepsin B和VEGF蛋白总体比较，差异均有统计学意义（F＝54.37，P＝0.00；F＝79.65，P＝0.00），其中高氧诱导组、NC-GFP-Lv组和Cathepsin B-RNAi-Lv组小鼠视网膜中Cathepsin B和VEGF蛋白的相对表达水平均明显高于正常对照组，Cathepsin B-RNAi-Lv组小鼠视网膜中Cathepsin B和VEGF蛋�
- 王文娟周国宏
- 关键词：组织蛋白酶B血管内皮生长因子视网膜新生血管
- CTSB和bFGF在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达
- 2019年
- 目的研究组织蛋白酶B(CTSB)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)在高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及其相关性。方法7日龄C57BL/6J小鼠56只被随机分为对照组、高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组。对照组小鼠在普通环境下饲养;高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组在高氧环境中饲养5 d建立氧诱导视网膜病变模型;DMSO组和CA-074Me组小鼠玻璃体腔分别注射1μl DMSO和1μl CA-074Me,各1次。各组处理后的小鼠转至标准环境饲养5 d后,采用q PCR和Western blot法分别检测各组小鼠视网膜组织中CTSB和b FGF mRNA和蛋白相对表达水平。结果正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和CA-074Me组间小鼠视网膜中b FGF和CTSB mRNA相对表达量总体比较,差异有统计学意义(b FGF:F=226.89,P=0.000;CTSB:F=25.23,P<0.05)。四组小鼠视网膜中b FGF和CTSB蛋白相对表达量总体比较,差异有统计学意义(b FGF:F=121.84,P<0.05;CTSB:F=30.69,P=0.000)。与正常对照组相比较,高氧诱导组和DMSO组中CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量显著增高;与高氧诱导组相比较,CA-074Me组中CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量则降低(均P<0.05)。正常对照组和CA-074Me组比较,高氧诱导组和DMSO组比较,CTSB与b FGF的mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CA-074 Me抑制高氧诱导小鼠视网膜组织中CTSB的表达,同时下调b FGF表达。这一机制可能是,CA-074 Me通过抑制CTSB抑制b FGF的表达;也可能是CA-074 Me直接作用于b FGF,其具体机制需要在后期的实验中进一步验证。
- 石丽洪孔丽周国宏王文娟
- 关键词：视网膜新生血管小鼠
- 雷珠单抗治疗湿性AMD的研究进展被引量：1
- 2016年
- 湿性年龄相关性黄斑变性（age—relatedmaculardegeneration，AMD）是老年人群视力丧失的主要原因之一，目前其发病原因尚不明确。研究已证实血管内皮生长因子与湿性AMD有明确相关性，已有多种抗血管内皮生长因子的药物应用于其治疗。玻璃体腔注射雷珠单抗能抑制血管内皮生长因子，阻断新生血管生长及渗漏而发挥治疗作用，其在湿性AMD的治疗中已显示出确切疗效。本文对雷珠单抗治疗湿性AMD的进展作一综述，包括雷珠单抗治疗湿性AMD的方案及疗效，影响其疗效的因素，联合治疗，以及雷珠单抗治疗湿性AMD的不良反应等几个方面。 ，
- 孔丽王文娟贺荣华周国宏
- 关键词：湿性年龄相关性黄斑变性血管内皮生长因子
