张丽 作品数:7 被引量:6 H指数:1 供职机构: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 上海市教育委员会重点学科基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
靶向PCSK9催化结构域的重组蛋白疫苗降胆固醇效果初步评价 被引量:1 2015年 PCSK9是机体内调节低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)代谢的重要蛋白之一,抑制PCSK9能够显著地降低血清LDL-C的水平。本研究的目的是构建靶向PCSK9的重组蛋白疫苗,为降低胆固醇疫苗药物的开发提供实验基础。本课题通过重叠PCR方法将白喉毒素跨膜结构和人PCSK9催化结构域基因串联,构建重组基因片段DTT-h PCSK9,在大肠杆菌中表达后经GST亲和纯化制备重组蛋白DTT-h PCSK9。用该蛋白免疫Balb/c小鼠后通过ELISA方法检测抗体应答水平,并测定小鼠体内胆固醇含量。结果显示,在小鼠体内DTT-h PCSK9引起了抗人PCSK9免疫反应,抗血清效价为1:10 000,并且该疫苗能够显著降低小鼠体内血清胆固醇含量(p<0.05)。 陈凌 程超 仲从浩 张丽 陈磊 李荣秀关键词:PCSK9 疫苗 胆固醇 葡聚糖-精胺作为CpG ODN输送载体效果的初步探究 被引量:1 2016年 Cp G ODN可增强疫苗特异性免疫反应,但是它在动物体内易降解和吞噬率低的特性降低其作为免疫佐剂的效果。本研究尝试用葡聚糖-精胺(DSP)包裹Cp G ODN,保护其免受核酸酶降解,提高细胞吞噬率。所合成DSP包裹Cp G ODN形成DSP-Cp G ODN复合物,体外刺激脾脏淋巴细胞,ELISA法测量细胞培养上清中白介素12(IL-12)含量来分析复合物是否可更有效地激活免疫细胞。结果显示所合成DSP可完全包裹Cp G ODN形成有效粒径为500 nm的颗粒并降低核酸酶对Cp G ODN降解速率。在最佳包裹条件下DSP-Cp G ODN复合物所刺激的脾脏淋巴细胞IL-12分泌水平相比单独Cp G ODN组有15.5倍增加(p<0.001)。本研究表明DSP可望作为Cp G ODN输送载体,增强佐剂效果。 陈磊 仲从浩 蔺智兵 程超 张丽 李荣秀关键词:CPG ODN IL-12 低活性hTNF-α突变蛋白的免疫原性分析 2018年 肿瘤坏死因子-alpha(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)在多种疾病如类风湿关节炎等自身免疫病发病机理上起着至关重要的作用。TNF-α生物抑制剂,在临床上具有很好的疗效。由于TNF-α是一种高活性的炎症因子,直接将其作为疫苗,会对机体产生很大的毒性副作用。故需要对天然的TNF-α进行点突变研究,找到生物活性很低的但同时保持良好的免疫原性的突变分子。本研究对人TNF-α活性部位4个关键氨基酸残基(K11,Y87,Y119,A145)进行了点突变和突变蛋白的免疫原性研究。发现Y119N、Y119G、Y87H、Y87H/A145R、K11Y、K11F这6个突变蛋白的生物活性较天然TNF-α下降90%以上,而免疫原性不受点突变的影响。 周福强 张丽 邓立 李荣秀关键词:TNF-Α 点突变 免疫原性 肿瘤转移小鼠模型研究进展 被引量:2 2012年 目前已有若干小鼠模型系统应用于分析肿瘤转移过程。这些模型可以为肿瘤进展、血管形成、局部浸润等转移时相提供可靠的解释,有助于揭示肿瘤转移机制。其中应用最为广泛的肿瘤转移小鼠模型包括遗传工程小鼠模型和可移植肿瘤小鼠模型。在肿瘤转移研究中,基于遗传学和分子生物学的综合研究方法是研究转移性癌症细胞或转移瘤微环境的有效手段。 于天飞 徐爱章 张丽 马国荣 李荣秀关键词:肿瘤 蛋白A-葡聚糖-Fe3O4纳米磁珠的制备及对IgG分离纯化 被引量:1 2014年 蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称蛋白A或SPA)是对IgG有特异性吸附能力的生物配基,将其偶联到葡聚糖修饰的Fe3O4纳米磁珠上,研究SPA纳米磁珠对IgG的纯化能力。采用高温多元醇法合成不同粒径的纳米磁珠,研究磁珠粒径对IgG吸附量的影响,并对磁珠静态载量、吸附时间、可重复性进行研究,为工业化应用提供理论依据。通过控制反应体系中NaOH的浓度成功地合成了平均粒径从30 nm到200 nm的Fe3O4纳米磁珠,通过吸附量试验证明了磁珠粒径对IgG吸附量有较大影响,当磁珠平均粒径在101.5 nm时对IgG的吸附量最大,静态吸附载量为84.85 mg/mL,亲和常数为3.48×106 M-1。对磁珠进行5次循环再生试验后,磁珠的吸附性能没有明显的降低。利用磁珠能高效快速地从人血清中纯化到IgG,纯度达到93.5%(SDS-PAGE),回收率为88.7%。因此,这种磁性分离基质在IgG纯化中有较大的应用潜力, 任敬钢 程超 仲从浩 张丽 张丽关键词:葡聚糖 蛋白A 人白介素6表位疫苗的设计及其免疫原性 被引量:1 2015年 构建人白介素6(h IL-6)表位疫苗,研究其免疫原性。利用在线预测工具预测h IL-6线性B表位(Ala69-Asn80);重叠延伸PCR法对h IL-6进行基因融合,克隆到质粒p GEX-6P-1,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;亲和层析法纯化融合蛋白,鉴定其纯度达95%以上;皮下免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定抗血清效价,表位(Ala69-Asn80)移植到白喉毒素转膜区(DTT,Ser305-Ile310),构建的表位疫苗可刺激机体产生针对h IL-6的抗体,抗血清效价达1.0×105。 都伟杰 陈磊 张丽 李荣秀关键词:白介素6 免疫原性 表位疫苗 人TNF-α点突变蛋白的制备及免疫原性分析 被引量:1 2016年 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)在人体内的毒副作用可以通过定点突变的方式得以改善。本研究结合公开文献及空间结构展示软件(discovery studio 3.5)对人TNF-α进行了的点突变实验。运用重叠PCR方法成功引入S95F、Y115F、Y119W和S147Y四个单点突变。经原核表达及镍柱亲和层析纯化后得到人TNF-α及其点突变蛋白。通过测定人TNF-α及其点突变蛋白的生物活性发现三种点突变(S95F,Y115F,Y119W)都显著降低人TNF-α对L929细胞的杀伤率。小鼠免疫实验证明4个突变蛋白均可刺激机体产生针对人TNF-α的抗体效应。 曾盼 张丽 邓立 李荣秀关键词:TNF-Α 点突变 L929细胞 免疫原性