- 结核分枝杆菌免疫相关蛋白脯氨酸-谷氨酸家族的研究进展
- 2004年
- 脯氨酸-谷氨酸家族蛋白是一个在结核分枝杆菌中新发现高度保守的富含甘氨酸、丙氨酸的酸性蛋白质家族。目前认为该家族与结核分枝杆菌抗原变异相关,有利于细菌逃避宿主免疫系统,并通过抑制宿主免疫细胞对其抗原的呈递过程影响机体的免疫应答,干扰宿主对结核感染的保护性。该家族蛋白作为结核感染的免疫学标志,在结核诊断和新药物靶向以及抗结核DNA疫苗的研制开发方面具有重要意义和广阔的应用前景。
- 龙洋鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌脯氨酸谷氨酸免疫应答
- 结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因重组穿梭质粒的构建及其在BCG中的融合与分泌表达研究被引量：4
- 2006年
- 通过SOE法(重叠延伸,Genesplicingbyoverlapextension),扩增cfp10-esat6融合基因,与穿梭整合质粒pMV361构建成重组质粒。另将BCGα抗原(α-Ag)信号肽序列与上述重组质粒构建成另一重组质粒。将两种重组质粒分别导入BCG菌构建融合型重组卡介苗和分泌型重组卡介苗,热诱导后分析其表达产物。本研究成功构建并表达了CFP10-ESAT6融合及分泌表达的重组BCG,为发展新型结核病疫苗打下了一定的基础。
- 王晓樱鲍朗赵明才张会东龙洋
- 关键词：结核分枝杆菌卡介苗
- 结核分枝杆菌免疫相关蛋白PPE68的表达及免疫原性的研究
- 2005年
- 目的:克隆、表达结核分枝杆菌PPE家族蛋白PPE68的编码基因Rv3873,并初步探索PPE68诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,为进一步研究PPE68的免疫功能提供实验依据。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv3873基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET32a(+),获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,纯化表达产物,通过XTT比色法检测重组蛋白PPE68诱导脾淋巴细胞的增殖活性。结果:重组质粒pETRv3873构建成功,57kDa的His-PPE68融合蛋白在大肠杆菌中稳定表达,并具有刺激Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖的功能。结论:PPE68蛋白具有较强的免疫原性,其免疫学功能具有进一步研究的价值。
- 王晓琳鲍朗朱庆平龙洋张会东钟琪
- 关键词：PPE68免疫原性结核分枝杆菌
- 四川地区结核分枝杆菌喹诺酮耐药基因突变研究被引量：8
- 2004年
- 目的 研究结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制 ,探索四川地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床分离株的耐药基因突变特征。方法 采用绝对浓度法检测结核分枝杆菌临床分离株的最小抑菌浓度 (MIC) ,再通过聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR- SSCP)和直接测序检测结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物临床分离株 gyr A耐药决定区 (QRDR)突变 ,并和标准株 H 37Rv比较。结果 6 8株临床分离株中 ,14株喹诺酮药物敏感株和 8株低耐药株未发现 gyr A耐药决定区基因突变 ,2 5株高耐药株、11株低耐药株和 10株药物敏感株检测到 gyr A基因突变 ,高耐药株突变率为 10 0 % ,低耐药株突变率为 5 8% ,敏感株突变率为 4 2 % ,总的突变率为 6 8%。根据 SSCP条带 ,gyr A突变可分成 4种类型 ,测序发现分别为 Ser95 Thr、Asp94 Gly、Ala90 Val、Ala83Val突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与 gyr A基因突变密切相关 ,gyr A基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制。
- 赵明才鲍朗吴悦涵龙洋曾献武张会东谢益新
- 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应-单链构象多态性
- 一种胶束及其制备方法和应用
- 本发明涉及药物制剂领域，公开了一种胶束及其制备方法和应用；所述胶束包括药物载体，以及装载于所述药物载体中的疏水性药物；其中，所述疏水性药物包括非甾体抗炎药和慢作用抗风湿药物中的一种或两种；所述药物载体包括：A)亲水部分，...
- 何勤李嘉欣龙洋李曼
- 文献传递
- 结核分枝杆菌PE家族蛋白质Rv1818c羧基端PGRS片段免疫功能的研究
- 该研究选择了结核杆菌免疫逃避这一领域,着眼于探索结核杆菌逃避宿主免疫系统监视的新途径,将可能具有抑制抗原递呈细胞对其进行MHC Ⅰ类抗原处理及递呈的Rv1818c羧基端PGRS片段与含有CD8+T细胞抗原表位的ESAT-...
- 龙洋
- 关键词：结核杆菌ESAT-6免疫逃避
- 文献传递
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的高效表达及免疫原性研究被引量：11
- 2006年
- 目的高效表达结核分枝杆菌6kDa早期分泌性抗原靶(6kDaearlysecretoryantigenictarget,ESAT6)和培养滤液蛋白10(culturefiltrateprotein10,CFP10)的融合蛋白,通过免疫动物,获得CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,扩增cfp10-esat6融合基因,将其与表达质粒pET32a(+)构建成重组质粒pET-cfp10-esat6。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达带组氨酸标签的融合蛋白,经亲和层析得到纯化CFP10-ESAT6蛋白。用该蛋白免疫成年家兔,获得的抗CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体,作Western-blot和ELISA分析。结果重组质粒pET-cfp10-esat6构建成功,融合蛋白CFP10-ESAT6大量表达,多克隆抗体制备成功(1∶106)。结论成功构建并表达了CFP10-ESAT6融合蛋白,制备了大量的CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体,为发展新型结核病疫苗和临床血清学检测奠定了实验基础。
- 王晓樱鲍朗赵明才张会东龙洋
- 关键词：结核分枝杆菌GST融合表达免疫原性
- 结核分枝杆菌Rv0901基因原核表达质粒的构建及其表达
- 2004年
- 目的 为研究结核分枝杆菌基因Rv0 90 1的功能提供材料。方法 PCR扩增Rv0 90 1基因编码序列 ,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX 1λT获得重组表达质粒 ,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达 ,通过SDS PAGE、GST 纯化试剂盒鉴定并纯化表达产物。结果 从结核杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv0 90 1基因 ;成功构建了融合表达质粒pGEX Rv0 90 1;重组质粒经IPTG诱导后能在大肠杆菌中稳定表达 4 5kDa的GST Rv0 90 1融合蛋白。结论 本实验成功表达并纯化GST Rv0 90 1融合蛋白 ,为Rv0 90 1基因功能的研究打下了基础。
- 吴悦涵鲍朗赵明才龙洋曾献武张会东
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达质粒基因表达重组质粒
- 一种药物载体、胶束、药剂及其制备方法和应用
- 本发明涉及药物制剂领域，公开了一种药物载体、胶束、药剂及其制备方法和应用；所述药物载体和胶束包括：A)亲水部分，包括亲水性肝素类化合物；B)疏水部分，包括疏水性类胡萝卜素和维生素A类化合物中的一种；其中，所述亲水部分和疏...
- 何勤卢正则龙洋李曼
- 结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定被引量：4
- 2004年
- 目的 克隆并表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6的编码基因 ,为研究其免疫功能奠定基础。方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板 ,用PCR对ESAT 6基因进行扩增 ,扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3 1/Zeo( +)中。对重组表达载体pcDNA ESAT 6进行酶切、PCR及测序鉴定。经鉴定无误的重组质粒用DEAE 葡聚糖法转染COS 7细胞 4 8h后 ,用Trizol法提取转染细胞总RNA进行RT PCR鉴定。结果 重组质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,并能在COS 7细胞中有效表达。结论 结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6真核重组表达质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,为进一步研究ESAT 6和CFP 10的免疫原性。
- 龙洋鲍朗吴悦涵赵明才曾献武张会东朱庆平
- 关键词：结核分枝杆菌免疫学ESAT-6真核表达载体蛋白表达
