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pXZ208-EGFP—HO-1慢病毒表达载体的构建与鉴定: 2011年; 目的构建大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）的慢病毒表达载体。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pXZ208-EGFP—HO-1表达载体，脂质体共转染法在包装细胞293FT中包装含有HO-1的慢病毒再感染大鼠原代心肌细胞。结果酶切出两条分别为egfp—ho-1片段大小约1640bp、pXZ208片段大小约为8583bp，酶切鉴定正确，包装出的慢病毒成功感染心肌细胞，感染效率可达60％以上。结论成功构建pXZ208-EGFP—HO-1的慢病毒表达载体，并建立高效稳定表达egfp—ho-1的慢病毒转染系统。; 陶涛李东野陈丹吴皖灵徐通达朱红; 关键词：血红素加氧酶-1 慢病毒心肌肥大

红色荧光蛋白标记蛋白激酶B的慢病毒构建和表达被引量：1: 2011年; 目的构建、包装并鉴定携带红色荧光蛋白（DsRed）标记的蛋白激酶B（aktl）的慢病毒。方法通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）扩增1488kbmouseaktl基因片段，通过TA克隆将akt1接入T载体，然后和IRES—dsred、pXZ208连接。酶切、测序鉴定正确的重组体（pXZ208-aktl—IRES—dsred）。三质粒系统经磷酸钙法包装病毒，荧光显微镜和流式细胞仪（FACS）检测病毒滴度。Westernblot比较病毒感染组与未感染组AKTl蛋白表达。pXZ208-akt1—IRES—dsred慢病毒和绿色荧光蛋白标记（GFP）的慢病毒共感染真核细胞，荧光显微镜观察两者的表达。结果经鉴定转移质粒构建正确，荧光显微镜观察293FT表达DsRed，FACS测得病毒滴度为（1．245±0．250）×10^7／ml。Westernblot证实病毒感染组与末感染组比较AKT1蛋白表达增高（P〈0．05）。与GFP标记的慢病毒共感染真核细胞，荧光显微镜观察到共同表达DsRed和GFP。结论DsRed标记akt1慢病毒构建和表达成功。DsRed和GFP标记慢病毒共感染真核细胞可观察到表达两种荧光蛋白。; 罗园媛李慧娟李东野陈丹陶涛朱红徐通达夏勇; 关键词：慢病毒蛋白激酶B 红色荧光蛋白

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陶涛