张克
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用酵母双杂交系统筛选与BnSmD1相互作用的蛋白
- 2012年
- 本研究以油菜BnSmD1为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术,从甘蓝型油菜cDNA文库中筛选出与之有相互作用的Arf-GTP酶激活蛋白1(Brassica napus ADP-ribosylation factorGTPase activating proteinl,BnArf GAP1),采用RT-PCR扩增并克隆到3个油菜ArfGAP基因的开放阅读框全长序列,BnArf GAP1、BnArf GAP2和BnArfGAP3.BnArfGAP1和BnArfGAP2都拥有1个507bp的开放阅读框,编码168个氨基酸残基;与前两个基因相比,BnArfGAP3核苷酸序列中插入了一个93bp的带有终止密码子的外源片段,导致翻译的提前终止,它拥有1个249bp的开放阅读框,编码82个氨基酸残基.BnArfGAP1和BnArfGAP2核苷酸序列一致性达到98.22%;BnArfGAP1与BnArfGAP3核苷酸序列一致性达到82.83%,BnArf GAP2与BnArf GAP3核苷酸序列一致性达到84.17%.BnArfGAP1、BnArf GAP2和BnArf GAP3都含有一个C2结构域.
- 张克汪静邓薇刘洋赵云
- 关键词：酵母双杂交GAPC2结构域
- 增生性瘢痕成纤维细胞中羟基丙酮酸异构酶同系物结合结构域分析被引量：2
- 2012年
- 目的 了解增生性瘢痕Fb中羟基丙酮酸异构酶同系物（HYI）与P311蛋白相互作用的结合区域. 方法（1）以克隆有P311的pMD18-T质粒为模板,对P311进行PCR扩增；Trizol法提取人增生性瘢痕Fb的总RNA,对HYI进行RT-PCR扩增,采用双酶切法分别构建pGA DT7-P311和pGBKT7-HYI重组载体,PCR及测序验证.采用Prot Seale软件和HNN软件对HYI蛋白进行二级结构分析,据此结果扩增HYI-1（1 ～447 bp）、HYI-2（247 ～447 bp）、HYI-3（1 ～279 bp）、HYI-4（247 ～654 bp）片段,双酶切法构建pGBKT7-HYI-1、2、3、4重组载体,经PCR及测序验证.（2）采用醋酸锂法将酵母细胞AH109制备成感受态细胞,粗略等量分为HYI全长与HYI-1、2、3、4杂交组,以及阳性对照组和阴性对照组.采用聚乙二醇-醋酸锂法,前5组分别同时转化pGBKT7-HyI全长、各片段的重组载体与pGADT7-P311重组载体,后2组分别同时转化pGBKT7-53与pGADT7-RecT重组载体、pGBKT7-Lam与pGADT7-RecT重组载体.转化后即刻,取各组部分细胞分别涂布在缺乏亮氨酸、色氨酸、腺嘌呤及组氨酸的培养基（简称四缺培养基）上,另取各组部分细胞分别涂布在缺乏亮氨酸和色氨酸的培养基（简称二缺培养基）上,培养3～6d,观察菌株生长情况,5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷显色反应检测菌落β半乳糖苷酶表达. 结果（1）克隆出的P311片段与Genbank中P311（序号hsu36189）序列一致.与Genbank中HYI（序号AY775560）序列对比,HYI基因扩增片段在496 bp处的A替换为了G.经验证各重组载体插入片段无误.（2）计算机模拟结果显示,组成HYI蛋白的216个氨基酸中,可能形成α螺旋的氨基酸有101个,可能形成无规则卷曲的氨基酸有90个,可能形成延伸链的氨基酸有25个.（3）HYI-1、2、3、4克隆片段大小与预期相符,经验证各重组载体插入片段无误.（4）除阴性对照组菌株未见在四缺培养基上生长外,其他组菌株均在2种培养基上生长,�
- 汪静刘洋张克马兵赵云
- 关键词：瘢痕成纤维细胞双杂交系统技术
