王竞
- 作品数：16 被引量：39H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 摩氏摩根菌噬菌体MmP1内溶素基因的克隆、表达及活性鉴定
- 2009年
- 目的克隆、表达摩氏摩根菌噬菌体编码的内溶素基因,为内溶素的生物学活性检测提供纯化蛋白产物。方法以摩氏摩根菌噬菌体基因组为模板扩增内溶素全长基因,并将其插入原核表达载体pQE31中,成功构建了内溶素重组质粒pQE31-M12;将重组质粒转化大肠埃希菌JM109,获得了表达稳定的基因工程菌,并优化了表达条件;该表达菌经过超声裂解及SDS-PAGE电泳,确定重组融合蛋白的表达形式,并利用亲和层析及分子筛层析纯化目的蛋白;利用平板扩散法检测重组蛋白抑菌活性。结果内溶素基因重组质粒pQE31-M12经酶切及测序鉴定正确;重组工程菌经0.5mmol/LIPTG在37℃诱导5h后内溶素重组蛋白可获得最佳分泌型表达,对其蛋白裂解上清行非变性的Ni-NTA柱亲和层析以及分子筛层析纯化后,获得单一条带的目的蛋白;该重组蛋白对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用。结论成功构建了表达内溶素基因的大肠杆菌工程菌,获得了纯化的表达产物,并初步证明该内溶素蛋白可抑制金黄色葡萄球菌的生长,为进一步改组内溶素的结构并增强其抗菌功能奠定了基础。
- 朱晓艳朱军民王竞黎庶饶贤才胡福泉谭银玲
- 关键词：噬菌体基因表达纯化
- 一种外源基因敲入乳酸乳球菌快速筛选系统及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种外源基因敲入乳酸乳球菌的快速筛选系统，所述筛选系统包括温敏质粒和乳酸乳球菌；其中，所述温敏质粒包含his基因片段和温敏复制子‑红霉素抗性基因(Ts‑Em<Sup>r</Sup>)片段；所述乳酸乳球菌的染色...
- 王竞殷素鹏胡福泉赵泽孝
- 文献传递
- 宏基因组研究高脂饮食诱导小鼠的肥胖易感性与肠道菌群的关系被引量：15
- 2017年
- 目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-resistant,HFDIOR)模型,正常饲料组为对照组,搜集并提取3组小鼠粪便样本细菌基因组,DNA质检后挑取高质量样本(每组6个),采用Illumina公司的Hiseq2000进行细菌宏基因组测序及相关生物信息学与统计学分析。结果较之对照组,肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门含量显著升高,拟杆菌门显著下降(P<0.05)。肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道的特征菌种组成显著不同,且毛螺菌科中的Lachnospiraceae bacterium 10_1与Lachnospiraceae bacterium 28_4分别为肥胖及肥胖抵抗组小鼠的关键菌种;肥胖与肥胖抵抗小鼠肠道菌群的功能及代谢显著差异则主要集中在碳水化合物代谢、核酸代谢与锚定、膜转运活性及转移酶活性等方面。结论不同个体对于饮食诱导的肥胖的易感性差别可能与肠道菌群组成及功能变化相关,这有助于正确评价肠道菌群在肥胖发生中的作用。
- 朱宏斌沈伟王竞卢曙光赵岩乐率申梦宇李刚杨雨卉龚雅利李明谭银玲胡福泉
- 关键词：肥胖肠道菌群高脂饮食宏基因组
- 通过RNA-seq初步考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3对宿主转录组的全局性调控
- 2013年
- 目的定性定量地考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后对宿主转录组的全局性调控作用。方法利用高通量链特异性的RNA-seq对PaP3感染宿主菌PA3后5个时间点(5 min、10 min、20 min、30 min、80 min)的转录本进行深度测序,并以铜绿假单胞菌PAO1株及噬菌体PaP3基因组序列为参照,通过生物信息学对检测数据做定性定量的分析。结果以未感染噬菌体的细菌为对照,在铜绿假单胞菌PA3被噬菌体PaP3感染后的不同时间点共检测到5 536个差异表达基因,共归属于27条PseudoCAP功能注释,KEGG Pathway显著性富集分析发现差异表达基因共涉及45条代谢路径。此外,在5个样本中还预测出1 438个新转录本及1 329个新的候选sRNA,发现19种已注释的sRNA及91种新的候选sRNA出现差异表达。结论噬菌体PaP3可能通过抑制宿主菌PA3转录调节相关基因而对宿主的转录组进行全局性的调控,这为深入理解噬菌体与宿主相互作用的机制奠定了基础,也为探索噬菌体通过细菌与人体免疫系统的相互作用提供了多方面多层次的信息。
- 赵霞陈灿煌倪青山王竞胡福泉谭银玲
- 关键词：RNA-SEQ转录组转录调控SRNA
- 乳酸乳球菌温敏水凝胶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制被引量：8
- 2020年
- 目的探讨乳酸乳球菌温敏水凝胶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及其机制。方法(1)按照菌与培养基体积比为1∶100用M17GS液体培养基培养约5×108集落形成单位/mL乳酸乳球菌(浓度下同),分别于培养0(即刻)、2、4、6、8、10、12 h用酶标仪观测其生长情况。另取该菌菌落同前处理并于相同时间点收集培养基分离细菌培养上清液,用台式pH计测定pH值,并用L-乳酸检测分析试剂盒测定培养0(即刻)、2、4、8、12 h的L-乳酸浓度(样本数为3)。(2)将泊洛沙姆温敏聚合物与M17GS液体培养基按照质量与体积比为0.2 g∶1 mL充分混匀,制备单纯温敏水凝胶。按照菌与水凝胶体积比1∶100在单纯温敏水凝胶中加入乳酸乳球菌,充分混匀后制备乳酸乳球菌温敏水凝胶,分别在4、37℃孵育以及成胶后再4℃孵育观察其形态;通过流变仪测定乳酸乳球菌温敏水凝胶在10~40℃的储能模量与损耗模量,同时观察成胶温度;将乳酸乳球菌温敏水凝胶冷冻干燥后,通过扫描电子显微镜观察其表面及其中乳酸乳球菌的形态结构。(3)将小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞用终质量浓度分别为100、10 ng/mL内毒素/脂多糖与γ干扰素培养24 h刺激M1型极化,将细胞分为空白对照组(不做其他处理)、乳酸乳球菌温敏水凝胶组和乳酸组。乳酸乳球菌温敏水凝胶组细胞加入1 mL乳酸乳球菌温敏水凝胶,乳酸组细胞加入终物质的量浓度为30 mmol/L乳酸,37℃培养24 h后,通过实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测M2型巨噬细胞标志物精氨酸酶1、CD206的mRNA表达量(样本数为3),采用免疫荧光法检测精氨酸酶1和CD206的蛋白定位与表达。(4)取15只8~10周龄雌性BALB/c小鼠,通过链脲佐菌素联合高糖高脂饲料的方法诱导为糖尿病小鼠模型后,在每只小鼠背部制作直径6 mm全层皮肤缺损创面,采用随机数字表法将小鼠分为空白对照组(不做其他处理)、单�
- 卢毅飞邓君王竞罗高兴
- 关键词：糖尿病伤口愈合水凝胶乳酸乳球菌
- 应用重组乳糖酶LacLM生产无乳糖奶的研究
- 2009年
- 为明确由第三军医大学基础部微生物学教研室研发的重组乳糖酶LacLM的工业价值和应用方式,采用葡萄糖氧化法(GOD/POD)测定了该酶水解乳糖的酶学特性,以及对牛奶中所含乳糖的水解率。实验测得该酶对乳糖的Km和Vmax值分别是13.9±1.05mM和14.1±0.31μmol glucose/(min·mg)protein。该酶水解乳糖的最适温度和pH分别为37℃和7。在10℃下每升牛奶加入40mg酶可以在12h内完全水解牛奶中的乳糖;在25℃下每升牛奶加入5mg酶可以在18h内完全水解牛奶中的乳糖;在37℃下添加2.5mg酶就能在10h内完全水解牛奶中的乳糖。试验结果表明,重组乳糖酶LacLM可以直接加入牛奶中,在低温或常温下去除牛奶中的乳糖,适合用于无乳糖奶的工业化生产。
- 潘渠李晋川王竞谭银玲朱晓燕陈志谨胡福泉
- 关键词：牛奶乳糖不耐受
- 细菌耐受噬菌体的高超技巧:断臂求生
- 本研究对野生菌株PAls和耐受菌株PAlr进行了全基因组测序和比较基因组学分析。结果发现耐受菌株PAlr较其敏感菌株PAls丢失了一个大约219.6Kb的大片段，其中编码了192个基因。深入研究发现，192个基因中，导致...
- 乐率姚新月卢曙光谭银玲饶贤才李明金晓琳王竞赵岩胡力文胡福泉
- 关键词：细菌生理机能基因缺失
- 文献传递
- 以国际遗传工程机器大赛(iGEM)为载体培养大学生的科研创新能力被引量：7
- 2017年
- 创新能力是科技发展的源动力,是一个民族进步的灵魂。21世纪的中国需要高素质的创新人才,而高等学校是培养人才,生产和传播新知识、新思想的重要基地。因此,如何加强大学生创新精神和创新能力的培养是我国高等教育的一大重要课题。国际遗传工程机器大赛(International Genetically Engineered Machine Competition,i GEM Competition)是合成生物学领域的顶级国际性学术竞赛,要求大学生能够用以合成生物学为核心的综合手段去解决科研和应用中的实际问题。i GEM竞赛过程非常注重对本科生的科研能力、团队协作、英语水平、沟通和表达技能的培养,从而吸引了全球顶尖高校和国内一流大学的积极参与。本文旨在通过对i GEM竞赛及2016年获奖情况进行分析,并结合第三军医大学i GEM代表队的参赛经历,探讨i GEM竞赛在培养大学生科研创新能力中的重要作用。
- 乐率胡启文熊坤胡晓梅王竞
- 关键词：创新教育
- 金葡菌L型的诱导及其对肽抗生素hPAB-β敏感性初步研究
- 细菌L型是细菌的细胞壁部分或完全缺失后形成的,最早于1935年在英国Lister研究所发现,故命名为L型细菌。许多细菌、真菌、螺旋体都能形成L型,且分布非常广泛,凡有微生物的地方皆可有L型存在,如土壤、溪水、动物器官及人...
- 王冬梅饶贤才陈志瑾杨杰丛延广王竞朱军民胡珍原薇薇胡福泉
- 文献传递
- 高能粒子-分子击断:空气消毒领域的革命
- 杨权王小若李强王竞胡福泉
