张龙
- 作品数：11 被引量：28H指数：3
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 双硫仑联合铜离子对人骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2020年
- 背景:研究表明双硫仑本身具有抗肿瘤活性,可联合铜(Cu)离子在体内外水平对多种肿瘤发挥抑癌作用,但关于双硫仑对骨肉瘤细胞增殖和凋亡作用的影响尚未阐明。目的:探讨双硫仑-Cu在体内外水平对骨肉瘤增殖与凋亡能力的影响以及可能的作用机制。方法:实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为2017LL077)。①体外实验:配置双硫仑在进入人体后的转换物二乙基二硫代氨基甲酸钠(diethyldithiocarbamate,DDTC)和Cu离子的复合物DDTC-Cu(0.5,1,2,3和5μmol/L),设置DDTC单药(5μmol/L)、Cu单药(5μmol/L)和空白对照组。药物处理人骨肉瘤细胞Saos-2细胞和MG-63细胞,CCK8法检测不同浓度DDTC-Cu对Saos-2细胞和MG-63细胞的增殖抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测DDTC-Cu对Saos-2细胞凋亡水平变化;②体内实验:取4周龄BALB/c-nu/nu雌性裸鼠共10只,随机分为DDTC-Cu组和对照组。采用异位移植方法,在裸鼠右侧背部皮下注射Saos-2细胞和Matrigel混悬液(1∶1混合),注射量400μL/只;接种2周后,对照组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5mg/kg,隔日1次),DDTC-Cu组裸鼠腹腔注射地塞米松(0.5mg/kg,隔日1次)和DDTC-Cu复合物(10nmol/g,隔日1次);观察两组荷瘤小鼠移植瘤生长情况,绘制瘤体生长曲线。接种5周后麻醉下处死动物,完整取出瘤体,免疫组织化学检测瘤体石蜡切片组织中ki67蛋白的表达水平,Westernblot检测瘤体组织中细胞增殖和凋亡蛋白的表达及JNK通路蛋白表达的变化。结果与结论:①体外实验结果:DDTC-Cu组对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用明显高于其他3组;CCK-8实验结果显示DDTC-Cu对骨肉瘤细胞增殖抑制呈剂量依赖性,两株细胞的24h药物半抑制浓度分别为0.337μmol/L和0.487μmol/L;流式细胞学检测结果显示DDTC-Cu可呈剂量依赖性促进Saos-2细胞的凋亡;②体内实验结果:DDTC-Cu组裸鼠移植瘤的体积和质量均小于对照组;免疫组织化学
- 徐朝健张龙程才统孙晓娟吕智
- 关键词：双硫仑骨肉瘤凋亡JNK通路
- Gustilo Ⅲ型开放性胫腓骨骨折创面细菌分布特征及其治疗策略被引量：11
- 2020年
- 目的探讨GustiloⅢ型开放性胫腓骨骨折创面细菌分布特征及其治疗策略。方法回顾性分析自2016-01—2017-07诊治的33例GustiloⅢ型开放性胫腓骨骨折,采用基于细菌培养的方式对开放性骨折创面进行细菌分布特征研究。结果33例均保肢成功且获得随访,随访时间平均1.1(1~2)年。6例软组织缺损,后期给予皮瓣或植皮治疗。在清创术前及清创后72 h,66份伤口分泌物标本中共培养、分离、鉴定出1455株不同细菌分离株,其中革兰氏染色阳性7种,革兰氏染色阴性11种,需氧菌8种,兼性厌氧菌9种,严格厌氧菌1种。感染严重程度方面,骨折Gustilo分型程度越高,细菌种类数及菌株数越多,术前创面污染越严重,差异有统计学意义(P<0.05)。结论开放性胫腓骨骨折损伤程度越高,创面污染越严重。GustiloⅢ型开放性胫腓骨骨折患者一般条件允许的情况下应彻底清创,可有效控制感染;清创术后72 h感染率越高,对于出现感染的患者积极进行抗感染治疗,同时也要预防术后院内感染。
- 徐朝健田志冯毅韩鹏飞潘永春房瑞玲张龙吕智
- 关键词：创面感染细菌培养
- Matrigel对人骨肉瘤动物模型移植瘤形成的影响被引量：4
- 2017年
- 目的 研究Matrigel、常规培养液和磷酸盐缓冲液（PBS）三种细胞混悬液对骨肉瘤动物模型移植瘤形成的影响,分析Matrigel对人骨肉瘤细胞分化与增殖的作用.方法 将24只BALB/c-nu/nu裸鼠随机分为3组,每组8只,将人骨肉瘤细胞株SaOS-2细胞分别混悬于Matrigel胶和RPMI 1640完全培养液1：1混悬液（M组）、RPMI 1640完全培养液（R组）、PBS（P组）,以1×10^6/ml细胞等量注射于裸鼠背部皮下,400μl/只.处理后定期测量各组裸鼠成瘤情况,计算肿瘤体积.5周后,解剖成瘤部位,取出肿瘤组织,4%多聚甲醛溶液固定,石蜡包埋、切片,苏木精-伊红（HE）染色,镜下观察组织学形态.结果 M组8只裸鼠均在0d形成肿块,随时间推移逐渐增大;R组和P组在移植后2-4d部分裸鼠皮下肿块消失,1周后部分裸鼠可再次观察到肿块,并随时间逐步生长.接种5周后,M组肿瘤体积明显大于R组和P组,肿瘤体积分别为（3185±488）、（598±189）、（512±109）mm3,差异有统计学意义（F=85.7,P〈0.001）.5周后解剖瘤体,M组肿瘤质量大于R组和P组,肿瘤质量分别为（2.22±0.18）、（1.48±0.13）、（1.47±0.17）g,差异有统计学意义（F=37.07,P〈0.001）.R组和P组在肿瘤体积和质量方面差异均无统计学意义（P〉0.05）.病理组织学检查结果显示,M组细胞较好地保持骨肉瘤细胞原有的分化程度,R组和P组细胞向低分化转变.结论 Matrigel促进人骨肉瘤细胞在实验动物体内较快增殖,成瘤率高,均一性好,瘤体细胞形态学接近其来源组织,更符合人骨肉瘤发生、发展过程.
- 张龙孙晓娟陈成龙吕智
- 关键词：骨肉瘤动物
- shRNA沉默骨膜蛋白基因抑制人骨肉瘤的血管生成被引量：1
- 2019年
- 背景:骨膜蛋白(periostin,POSTN)是一种细胞外基质蛋白,在多种肿瘤组织中表达上调,与肿瘤的迁移、增殖和血管生成能力有关。血管内皮生长因子受体2(vascularendothelialgrowthfactor2,VEGFR2/KDR)与其配体血管内皮生长因子结合后主要调控血管的发生和构建,但KDR与POSTN在骨肉瘤中的相互作用尚不清楚。目的:探讨POSTN在体内、外水平对人骨肉瘤增殖和体内血管生成能力影响及其作用机制。方法:①体外实验:qRT-PCR和Westernblot检测人骨肉瘤临床标本组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白表达水平;qRT-PCR检测3株不同人骨肉瘤细胞系内POSTN表达,筛选基因表达最高的细胞系进行转染实验;转染慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA进入Saos-2细胞,选出3个作用靶点中抑制率最高的序列进行后续实验;②体内实验:取裸鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)12只,实验组(n=6)将慢病毒包装pPLK-POSTN-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,对照组(n=6)将慢病毒包装pPLK-Scramble-shRNA转染的Saos-2细胞注射至胫骨髓腔中,接种5周后,测量瘤体体积与质量;接种3周后,应用小动物活体成像检测血管生成情况;接种5周后取瘤体组织,Westernblot检测POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT蛋白表达,病理切片免疫组织化学染色内皮细胞黏附分子蛋白表达。实验方案经山西医科大学第二医院伦理委员会批准(编号:2018002)。结果与结论:①体外实验:骨肉瘤组织中POSTN和KDR的mRNA及蛋白水平表达均高于正常骨组织(P<0.01);Saos-2细胞中的POSTN基因表达量较MG-63和U2-OS细胞高;②体内实验:实验组瘤体体积和质量均小于对照组(P<0.05);实验组瘤体内血管生成量少于对照组(P<0.05);实验组POSTN、增殖细胞核抗原、KDR和p-AKT及内皮细胞黏附分子蛋白表达均低于对照组(P<0.05);③结果表明:沉默POSTN基因可抑制骨肉瘤血管生成,其机制可能与KDR/PI3K/AKT通路活化有关�
- 徐朝健张龙程才统冯毅吕嘉孙晓娟吕智
- 关键词：骨肉瘤血管生成KDRSAOS-2细胞
- 利用免疫缺陷动物构建骨肉瘤动物模型研究进展被引量：2
- 2017年
- 骨肉瘤是骨组织最常见的原发性恶性肿瘤,恶性程度很高且青少年多发,目前其机制尚不明确,故构建一个生物学行为和药物动力学接近人骨肉瘤的动物模型是深入研究该疾病发病机制、寻找靶向性和特异性更高的新治疗手段的重要途径。免疫缺陷动物是先天性遗传突变或人工方法造成的一种多系统免疫功能缺陷动物,裸鼠因其无胸腺和T细胞缺如的免疫缺陷特点,使移植性肿瘤仍能保留其原有的生物学特性,成为直接研究人类骨肉瘤生物学特性及其发病机制的重要研究手段。现就近年免疫缺陷动物的骨肉瘤动物模型建立作一综述。
- 张龙葛乔枫吕智
- 关键词：骨肉瘤裸鼠
- Sonic Hedgehog信号通路中Smo和Gli-1在骨肉瘤中的表达与临床价值的研究
- 目的：探讨Sonic Hedgehog信号通路中Smo和Gli-1在骨肉瘤细胞中表达情况并分析其与临床特征、预后的相关性.方法：临床选取32例人骨肉瘤组织标本及8例正常骨组织标本，对选出的32例患者入组分析，其中男14例...
- 张龙孙晓娟武壮壮吕智
- 关键词：骨肉瘤信号通路肺转移预后
- 敲低核转运蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和血管生成的体内影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨核转运蛋白2(karyopherina 2,KPNA2)对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和血管生成的影响,并从分子层面分析其可能的作用机制。方法构建Sh-KPNA2慢病毒载体(Sh-KPNA2组)及空载体Sh-Control(Sh-Control组)转染骨肉瘤细胞Saos-2,观察敲低KPNA2后对Saos-2细胞增殖的影响;利用转染Sh-KPNA2和空载体Sh-Control的Saos-2细胞分别构建OS动物模型,小动物活体荧光分子断层成像系统(fluorescence molecular tomography,FMT)验证KPNA2对瘤体血管生成的影响;qRT-PCR和Western blot验证瘤体内KPNA2和睾丸决定因子Y染色体性别决定区基因(SRY related HMG box-2,Sox2)的mRNA和蛋白表达水平。结果 Sh-KPNA2组细胞增殖能力较Sh-Control组明显降低(P<0.05);Sh-KPNA2组荷瘤小鼠瘤体积显著小于Sh-Control组(P<0.05);免疫组化和FMT扫描结果显示,Sh-Control组的血管生成能力显著高于Sh-KPNA2组(P<0.05);瘤体qRT-PCR和Western blot检测结果均显示Sox2在Sh-Control组中表达显著高于Sh-KPNA2组(P<0.05)。结论敲低KPNA2可抑制OS增殖和血管生成,其机制可能与KPNA2影响Sox2的表达有关。
- 葛乔枫张龙孙晓娟吕智
- 关键词：骨肉瘤细胞细胞增殖肿瘤血管生成SOX2裸鼠
- microRNA-21在骨肉瘤中的研究进展
- 2021年
- 骨肉瘤是一种恶性的骨肿瘤,好发于年轻人的长骨干骺端,患者5年生存率为60%~70%。骨肉瘤早期即可发生肺转移。15%~20%的患者在首次检查时即可发现肺转移,早期肺转移患者5年生存率低于20%。microRNA是一类长度为19~24核苷酸的非编码小RNA分子,可通过非完全配对的方式与靶基因mRNA结合,引导沉默复合体的形成来降解mRNA或者阻碍其翻译,从而抑制相关蛋白的表达。microRNA-21在多种肿瘤中稳定表达,包括骨肉瘤。本文回顾microRNA-21在骨肉瘤中的作用,为骨肉瘤的临床诊疗和基础研究提供参考。
- 申振武壮壮张龙吕智
- 关键词：骨肉瘤MICRORNA-21生物学功能
- 慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛表达对细胞增殖的影响被引量：5
- 2019年
- 目的观测慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞初级纤毛表达对细胞增殖的影响。方法雄性2周龄SD幼鼠20只,随机分为假手术组(切开暴露左侧输尿管)和慢性肾功能不全(CRI)组(左侧输尿管结扎),每组10只。术后2周处死幼鼠,测量胫骨全长并行组织学切片观测生长板增殖区细胞生长状态及细胞初级纤毛表达率。分别提取两组胫骨生长板区软骨细胞进行体外培养至P3代,检测细胞24 h增殖率,细胞初级纤毛表达率和纤毛长度;Western印迹检测细胞纤毛转运体88(IFT88)蛋白表达水平并进行灰度分析。结果CRI组幼鼠胫骨长度短于假手术组[(35.84±4.56)mm比(42.33±3.44)mm,P=0.002];胫骨生长板增殖区细胞在CRI组排列紊乱,细胞柱细胞数量少[(2.71±1.10)个/HP比(7.68±1.32)个/HP,P<0.001];CRI组细胞初级纤毛表达率较高[(35.53±7.41)%比(18.31±5.12)%,P<0.001]。与假手术组比较,CRI组体外培养生长板软骨细胞24 h增殖率较低[(11.38±6.10)%比(24.35±8.46)%,P=0.001],细胞初级纤毛表达率较高[(60.12±7.86)%比(32.17±8.97)%,P<0.001],细胞初级纤毛长度较长[(3.54±1.61)μm比(1.96±0.82)μm,P=0.012],IFT88蛋白表达量较高(0.47±0.23比0.17±0.10,P=0.001)。结论CRI幼鼠胫骨生长板增殖区软骨细胞初级纤毛表达率增高,细胞增殖率降低,生长板发育受限。
- 王小健张阳郭丽张龙李鹏翠魏垒张宇明苏云星李荣山
- 关键词：骨骺生长板
- 癌相关成纤维细胞来源的外泌体在促骨肉瘤侵袭转移中作用的实验研究被引量：1
- 2019年
- 目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体对骨肉瘤侵袭及转移的影响。方法利用人源骨肉瘤细胞株Saos-2采用差速贴壁法分离、培养CAFs,显微镜下观察CAFs的形态,免疫组织化学观察α-SMA蛋白表达对CAFs进行鉴定。培养CAFs,采用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒分离外泌体。通过透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体特异性标记蛋白β-actin、CD63表达情况对外泌体进行鉴定。培养人源骨肉瘤细胞株Saos-2,分为外泌体组和对照组,采用细胞划痕及Transwell小室实验观察外泌体对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响。选取一级5周龄BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按编号随机分为外泌体组和对照组,每组6只。两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右侧背部皮下接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,建立裸鼠骨肉瘤肿瘤模型。造模结束后即刻进行尾静脉注射:外泌体组每只裸鼠通过尾静脉注射浓度为0.1μg/μL的外泌体悬液30μL,对照组裸鼠尾静脉注射等量生理盐水,两组均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日观察裸鼠成瘤情况,从裸鼠右侧背部皮下可触及肿块开始,测量两组裸鼠肿块的最长径和最长径的最大垂直短径,计算肿瘤体积,此后每周测量1次,共测量6次。完成最后一次测量后腹腔麻醉断椎法处死裸鼠,完整取出肿块并称重。取裸鼠肺组织进行切片HE染色观察两组裸鼠肺转移情况。结果显微镜下观察CAFs呈长梭形,排列杂乱,无方向性;细胞免疫组织化学染色结果显示:CAFs的α-SMA蛋白表达阳性,提示CAFs提取成功。电镜观察外泌体呈70~100 nm圆形或椭圆形膜性囊泡状结构;Western blot结果显示外泌体中CD63蛋白呈高表达,β-actin蛋白表达较弱,提示成功分离CAFs来源外泌体。细胞划痕实验、侵袭实验结果显示:外泌体组细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数目分别为(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%�
- 陈成龙孙雪娇李志慧孙晓娟韩鹏飞张龙吕智
- 关键词：骨肉瘤外泌体癌相关成纤维细胞肺转移肿瘤微环境
