CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成功应用于多种植物基因组的编辑,但是在生菜中鲜有报道。本研究拟在生菜(Lactuca sati va L.)中建立CRISPR/Cas9基因编辑体系。首先根据生菜FANCM基因序列设计靶位点,构建Lsfancm-CRISPR/Cas9载体。然后以生菜子叶作为外植体,通过农杆菌侵染、共培养、愈伤组织诱导、芽再生及生根培养等过程,对生菜进行农杆菌介导的遗传转化,共获得24株T_0代转基因阳性植株。进一步对靶位点序列进行PCR并测序分析,发现4株转基因生菜的靶位点发生基因编辑,产生fancm杂合突变体,并且在T_1代植株中鉴定到纯合突变体。以上结果表明,本研究已成功将CRISPR/Cas9基因编辑体系有效地运用于生菜中,该体系的建立可为将来生菜的基因功能研究及分子育种提供重要的技术参考。
