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组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体体内靶向溶栓被引量：1: 2008年; 目的观察组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因局部转导对特氟隆（Dacron）片（与机械瓣瓣环同质）的溶血栓作用。方法70只兔建立下腔静脉内Dacron片植入血栓模型，随机分为pLEGFP-N1-tPA治疗组（n=30）、pLEGFP-N1空载体对照组（n=20）、空白对照组（n=20），局部基因转导，于术后2、75d各组一半动物取材（6个亚组A1、B1、C1、A2、B2、C2），聚光共聚焦（confocal）观察所取静脉增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达，体视镜和电镜观察Dacron片表面血栓情况，免疫印迹（Western blot）、血浆平板和酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测所取静脉tPA表达、溶栓、活性及含量变化。结果术后2d和75d取材，治疗组所取静脉，confocal均观察到多而强的EGFP表达，pLEGFP-N1对照组也有EGFP表达，但空白对照组无EGFP表达。70个Dacron片加未植入组10个Dacron片共80个，在体视镜（×160倍）和电镜（×500倍）下观察，未植入组和治疗组Dacron片表面均无血栓，对照组表面均有血栓。治疗组所取静脉Western blot检测均有外源tPA表达，对照组未检测到。血浆平板显示：治疗组均有大的溶解圈，有明显溶栓作用，对照组没有；根据蚓激酶计算出的纤溶活性显示：治疗组术后2d和75d所取静脉tPA活性分别为（529．62±9．05）、（537．50±12．45）U／g，两时间点比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。术后2d和75d治疗组、两对照组中6个亚组所取静脉tPA含量分别为（A1 737．64±13．19）、（B1 29．88±5．61）、（C1 28．71±5．49）、（A2 742．87±10．56）、（B2 32．03±6．26）、（C2 31．34±5．63）ng／g，治疗组明显高于对照组（P〈0．01）；治疗组中两时间点比较，tPA含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论pLEGFP-N1-tPA局部基因转导能有效阻止外源移植物表面血栓形成。; 张凯伦龚永生蒋雄刚刘小斌厉泉徐磊张晓明; 关键词：逆转录病毒科纤溶酶原基因治疗血栓

VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达被引量：2: 2011年; 目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。; 王刚刘成硅张晓明张凯伦蒋雄刚; 关键词：真核表达载体体外表达

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张晓明

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