韦芳
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 环杷明对人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨环杷明(cyclopamine)诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡的作用及其对Gli-2和Bcl-2表达的影响。方法:用10μmol∕L环杷明处理人腮腺多形性腺瘤细胞,48 h后倒置显微镜下观察细胞数量及形态变化;48 h后实时定量PCR检测实验组(环杷明组)和空白对照组、DMSO对照组的Gli-2、Bcl-2 mRNA表达水平差异;24 h后流式细胞术观察细胞凋亡。结果:人腮腺多形性腺瘤细胞用10μmol∕L环杷明作用48 h后倒置显微镜下可见细胞数量减少、细胞核固缩或碎裂、核仁变形等典型的细胞凋亡形态学变化;环杷明组与空白对照组、DMSO对照组相比,可以显著下调Gli-2、Bcl-2 mRNA表达(P<0.01);环杷明组的细胞凋亡率明显高于空白对照组和DMSO对照组(P<0.01)。结论:环杷明可诱导人腮腺多形性腺瘤细胞凋亡,其作用机制可能与下调Gli-2、Bcl-2 mRNA表达,活化细胞凋亡的线粒体途径有关。
- 欧学平肖翠翠宋萌肖忠明韦芳洪艳
- 关键词：细胞凋亡
- 人单核细胞趋化因子-1基因重组卡介苗的构建与鉴定
- 2013年
- 目的构建能自动分泌性表达单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的重组卡介苗。方法分别以卡介苗(BCG)和人MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽基因序列和300bp的MCP-1基因序列。将上述两片段基因序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMV261-Ag85B-MCP-1。测序鉴定完毕后,用电穿孔法将该重组质粒导入BCG中,构建重组卡介苗rBCG MCP-1。分别应用PCR扩增和Western blot检测rBCG MCP-1中MCP-1的基因和蛋白的表达。结果质粒pMV261-Ag85BMCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实克隆基因BCGAg85B信号肽和MCP-1正确插入载体pMV261。Western blot显示rBCG MCP-1的培养上清和菌体中均可检测到MCP-1蛋白的表达。ELISA法可检测到培养上清中有高表达的MCP-1蛋白(340pg/mL)。结论成功构建了能分泌MCP-1的新型重组卡介苗rBCG MCP-1,为进一步研究其抗膀胱肿瘤的疗效打下了基础。
- 李杜渐徐耀庭韦芳李惠明黄汝强许晓文顾炜顾伟平
- 关键词：卡介苗单核细胞趋化因子-1膀胱肿瘤基因重组
- 卡介苗穿梭表达质粒pMS MCP-1的构建与鉴定
- 2012年
- 目的:构建分泌性表达单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的重组卡介苗。方法:分别以卡介苗(BCG)和MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120bp的BCG Ag85B信号肽序列和300bp的MCP-1基因序列。将BCG Ag85B信号肽序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS。再将MCP-1基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMS MCP-1。结果:质粒pMS MCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG Ag85B和MCP-1正确插入载体pMV261。结论:重组质粒pMS MCP-1可望在BCG中分泌性表达细胞因子MCP-1,从而协同加强对肿瘤的杀伤作用,该质粒的成功构建为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础。
- 李杜渐徐耀庭韦芳李惠民黄汝强许晓文顾炜顾伟平
- 关键词：卡介苗单核细胞趋化因子-1多聚酶链反应
