徐凯
- 作品数：14 被引量：65H指数：5
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划四川省教育厅资助科研项目更多>>
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- 联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响
- 2011年
- 将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4＋、CD8＋细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。
- 朱玲郭万柱徐凯王印陈燕凌唐玉香
- 关键词：圆环病毒2型VP2基因ORF2基因
- 共表达猪IFN-γ基因对PPV VP2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究被引量：3
- 2010年
- 将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2。用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况。将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒灭活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平。试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达。pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体。结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。
- 陈燕凌徐志文郭万柱朱玲徐凯唐玉香
- 关键词：VP2基因ORF2基因IFN-Γ基因
- PRV基因缺失株在体外细胞中增殖的超微结构被引量：5
- 2009年
- 用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Fa株和本实验室构建的系列PRV基因缺失株(PRV-TK-、PRV-gI\gE-、PRV-TK\gI\gE-株)感染不同的细胞系(IBRS-2、Marc145、ST、Vero、MDBK细胞),对感染细胞的形态学观察发现,受试各PRV毒株在以上细胞均能增殖并引起细胞病变,但对不同的细胞却表现差异,其中在ST细胞上增殖滴度最低,在MDBK上最高;同PRV Fa株相比,PRV-gI\gE-和PRV-TK\gI\gE-株的增殖力有所降低,而PRV-TK-则变化不明显;对细胞感染后的超微结构分析发现,基因缺失对该毒株在细胞上的吸附和穿入过程没有影响,但与Fa株相比,主要表现为增殖速度的减缓和病毒粒子数量的减少。
- 徐志文郭万柱朱玲徐凯王印王小玉
- 关键词：细胞感染形态学超微结构
- 四川省规模化猪场猪瘟的流行病学调查被引量：3
- 2010年
- 为了研究四川省的猪瘟流行病学情况,随机采集13个规模化猪场经产母猪、后备母猪、公猪以及仔猪的扁桃体和血样共862份进行猪瘟抗原和抗体的检测。结果表明：13个猪场扁桃体猪瘟抗原阳性率为1.78%～14.50%,平均阳性率为6.62%;经ELISA检测,猪瘟抗体平均阳性率为68.10%,阳性率最高为86.70%,最低为20.00%。说明各场免疫水平相差较大,平均阳性率低于70%的国家标准,猪瘟带毒现象在四川省省内规模化猪场普遍存在。
- 华丽朱玲郭万柱徐凯王小玉
- 关键词：猪瘟流行病学
- 猪传染性胃肠炎与猪伪狂犬病混合感染的诊治
- 2009年
- 2009年3月四川某规模化猪场暴发了一起以仔猪腹泻、呕吐、脱水为主的急性传染病,10日龄以内仔猪死亡率高达86%。经流行病学调查、病理剖检和PCR检测,诊断为猪传染性胃肠炎与猪伪狂犬病混合感染。对此采取紧急接种、药物治疗和综合防控措施,病情得到控制。
- 徐凯徐志文郭万柱王印朱玲
- 关键词：猪传染性胃肠炎伪狂犬病
- 四川省规模化猪场猪瘟的流行病学调查被引量：20
- 2010年
- 本研究以四川省13个规模化猪场为调查对象,随机采集经产母猪、后备母猪、公猪以及仔猪的扁桃体样品和血样各862份,进行猪瘟抗原和抗体的检测。扁桃体检测结果显示,13个猪场猪瘟抗原阳性率从1.78%到14.5%不等,平均为6.62%;血清检测结果显示,猪瘟抗体阳性率平均为68.1%,最高为86.7%,最低为20%。结果表明,各场免疫水平相差较大,平均阳性率低于70%的国家标准,猪瘟带毒现象在四川省内规模化猪场普遍存在。
- 徐凯徐志文郭万柱华丽朱玲王印
- 关键词：猪瘟流行病学
- PPV VP2-PCV2 ORF2真核表达载体的构建及对小鼠免疫效应试验
- 2011年
- 将猪细小病毒(PPV)VP2基因和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2截短基因(47～207aa)克隆到真核表达载体pCI-neo,构建了含VP2和ORF2基因的融合表达质粒pCI-ORF2-VP2,经脂质体法转染PK15细胞后,用间接免疫荧光检测法测到融合蛋白能正常表达。将pCI-ORF2-VP2质粒肌注BALB/c小鼠(100μg/只),相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立圆环亚单位苗、细小灭活苗和空载体对照组,于免疫后7、14、21、28、42d无菌摘取脾脏作T淋巴细胞增殖试验,摘眼球采凝血和抗凝血,分别作PPV、PCV2抗体的监测和T淋巴细胞亚群的动态监测。结果显示,pCI-ORF2-VP2免疫小鼠脾脏T淋巴细胞对ConA刺激的反应性、诱导CD4+、CD8+T淋巴细胞的免疫功能和血清PPV/PCV2的抗体水平在不同时间段均显著高于空载体对照组。表明真核表达质粒pCI-ORF2-VP2能刺激小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫。
- 徐凯徐志文郭万柱朱玲王印陈燕凌唐玉香王小玉
- 关键词：圆环病毒2型VP2基因ORF2基因
- 猪IL2基因重组对PPV VP2-PCV2 ORF2真核质粒免疫原性增强的研究被引量：1
- 2011年
- 将猪IL2成熟肽基因、PPV VP2基因和PCV2 ORF2抗原多肽基因定向克隆至真核表达载体pCI-neo,构建重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2-ORF2-VP2,用脂质体介导法将其转染PK15细胞,采用RT-PCR法和间接免疫荧光法检测重组质粒在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,分别将pCI-IL2-ORF2-VP2质粒、pCI-ORF2-VP2质粒、pCI空载体、猪细小灭活苗和圆环亚单位苗通过肌注进行免疫,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体效价。结果表明,重组质粒在体外能正常表达,pCI-IL2-ORF2-VP2免疫小鼠脾脏淋巴细胞转化功能,CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量和血清PPV/PCV2抗体的OD值在二免后均高于或显著高于pCI-ORF2-VP2对照组。结果表明,猪IL2基因重组能显著增强VP2/ORF2核酸疫苗诱导的免疫应答。
- 魏浩澈徐志文徐凯郭万柱朱玲唐玉香陈燕凌
- 关键词：圆环病毒2型VP2基因ORF2基因
- 猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3′端对病毒样颗粒形成的影响被引量：3
- 2009年
- 以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3′端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析。结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒。通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3′端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3′端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒。
- 徐志文郭万柱蒋清蓉朱玲熊丁杰王印徐凯王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因插入位点病毒样颗粒
- 四川省部分地区猪伪狂犬病病毒野毒感染的血清学调查被引量：8
- 2010年
- 为了研究四川省猪伪狂犬病野毒的感染情况,试验采用gE-ELISA对采自四川省简阳、邛崃、遂宁等9个地区的2 639份血样进行了伪狂犬病病毒的血清学调查。结果表明:伪狂犬病病毒gE抗体阳性率为0～17.00%,平均阳性率为3.15%;不同地区间差异较大,资阳、南充两地伪狂犬病病毒野毒感染较为严重,gE抗体阳性率分别为15.50%和17.00%;不同类别猪群中以妊娠的母猪gE抗体阳性率最高(4.81%),其次是后备母猪和经产母猪,种公猪gE抗体阳性率最低(为0.57%)。
- 程龙娇朱玲徐凯
- 关键词：伪狂犬病病毒野毒血清学
